错配修复基因hMSH2在乳腺癌中的表达及意义

错配修复基因是限制其他生长调控基因突变的一类高度保守的基因[1],hMSH2是其中的一种,它与细菌中MutS基因同源,位于染色体人类2p22-21,其mRNA长7.3kb,含16个外显子,编码100kDa的蛋白质[2].

胃癌谷胱甘肽S转移酶π表达及其与药物敏感性的关系

目的：评价谷胱甘肽Ｓ转移酶π（ＧＳＴ－π）在胃癌组织中的表达及其与化疗药物敏感性的关系。方法：对３９例胃癌新鲜手术标本，用ＳＡＢＣ免疫组化法检测ＧＳＴ－π的表达，用细胞生长抑制率测定（ＭＴＴ）法检测原代胃癌细胞对５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）、顺 （ＣＤＤＰ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）和阿霉素（ＡＤＭ）４种化疗药物的体外敏感性，以研究两者之间的关系。结果：３９例胃癌标本的ＧＳＴ－π表达阳性率为６６．７％（２６／３９），ＧＳＴ－π的表达与肿瘤组织学类型、大小、浸润深度及区域淋巴结转移度等临床病理学参数无明显相关。表达阳性者对ＣＤＤＰ和ＭＭＣ显示了较强的体外耐药性，但与５－Ｆｕ和ＡＤＭ的体外敏感性无明显相关。结论：ＧＳＴ－π在胃癌组织中的高表达可能是造成其对ＣＤＤＰ和ＭＭＣ等药物耐药的原因之一，ＧＳＴ－π表达检测结合ＭＴＴ体外药敏试验对判断化疗效果有一定参考价值。

结直肠癌中Galectin-9的表达及其意义

目的:探讨Galectin-9基因和蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:运用荧光实时定量PCR及免疫组织化学染色方法检测45例手术切除的结直肠癌标本和20例正常结直肠上皮组织中Galectin-9基因和蛋白的表达,分析Galec-tin-9的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果:Galectin-9基因在结直肠癌组织中表达低于正常结直肠上皮组织(P<0.05),Galectin-9蛋白在结直肠癌组织中表达阳性率为62%,在正常结直肠上皮组织中表达阳性率为90%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Galectin-9的低表达与结直肠癌的远处转移相关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤分期及肿瘤部位无显著相关。结论:Galectin-9在结直肠癌中低表达,并且与肿瘤的远处转移相关,有可能成为结直肠癌判断预后的标志物以及基因治疗的潜在靶点。

深低温冻存胃癌样本的核酸与蛋白质质量控制研究

目的：探索上海市瑞金医院低温冻存0～10年胃癌样本的核酸与蛋白质质量。方法：随机抽取2003年至2014年间库存手术切除胃癌标本24对（共48份）。1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA与RNA纯度及完整性，同时增加了RIN值评估法检测RNA完整性；BCA法检测样本蛋白质浓度，考马斯亮蓝法测定蛋白质分子完整性。结果：将组织标本按冻存年限分成四组（〈2年、3～5年、6～8年和〉9年），各组之间DNA完整性差异无统计学意义（P〉0．05），正常胃组织的DNA降解程度比胃癌组织高（P=0．023）；四组之间的RIN值检测显示，冻存6年以上组的RIN值有明显下降（P=0．018）；各组间的蛋白质浓度无显著性差异，考马斯亮蓝法测定蛋白质分子条带完整性存在显著性差异。冻存〉9年组仅出现少量低分子量条带（平均36．5kD），冻存6～8年组尚有中等分子量（平均65．63kD）条带，冻存3～5年组有高分子量（平均127．5kD）条带，冻存短于2年组仍可见大分子量（平均160kD）条带。结论：长期低温冻存对DNA影响最小，超过5年组RNA和大分子量蛋白质降解较多，但中小分子量蛋白质保存完好。

血清K-ras基因突变检测联合CA19-9测定在胰腺癌诊断中的应用

背景与目的:胰腺癌早期诊断困难,常用的肿瘤标记物如CA19-9,虽敏感度较高但特异性较差,胰腺癌中常有K-ras基因的突变,而且特异性较高,我们通过检测血清DNA中K-ras基因的突变以及测定血清CA19-9的含量,以探讨两者联合检测在胰腺癌诊断中的临床意义。方法:取39例胰腺癌患者的血清,抽提DNA,采用突变富集聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测K-ras基因第12密码子突变,同时应用放免法测定血清CA19-9的含量,并与17例其他胰腺疾病患者和21例健康者的血清检测结果作对照,分析两者联合应用的临床诊断价值。结果:在28例胰腺癌和2例其它胰腺疾病患者血清中检测到K-ras基因突变,阳性率分别为71.79%和11.76%;而血清CA19-9测定的阳性率则分别为71.79%和41.18%。平行法联合检测K-ras和CA19-9诊断胰腺癌时敏感性增至94.87%,系列法联合检测时特异性增至94.12%。21例健康对照者血清中K-ras基因与CA19-9均无异常。结论:联合血清K-ras基因突变检测与CA19-9测定可提高胰腺癌诊断的特异性和敏感性,具有一定的临床应用价值。

胃癌中IRX1的表达与启动子区甲基化的相关性

目的探讨胃癌中同源盒基因IRX1的表达与启动子区甲基化修饰之间的关系。方法生物信息学软件分析IRX1基因启动子区;RT-PCR检测胃癌细胞株及手术切除胃癌组织IRX1基因mRNA表达水平;MSP及BSP法检测启动子区甲基化状态;检测去甲基化试剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷的干预对胃癌细胞IRX1基因表达的逆转效应。结果经生物信息学预测IRX1基因转录起始点上游启动子区富含CpG岛;胃癌细胞株及胃癌组织IRX1基因表达有不同程度下调;MSP及BSP检测显示所有胃癌细胞株启动子区呈高甲基化状态;经5-Aza-CdR处理的细胞株IRX1基因的表达有不同程度上调。结论胃癌中IRX1基因的表达下调与启动子区甲基化修饰有一定关系,为探讨IRX1基因作为去甲基化治疗靶点的可能性提供了实验数据。

二氢嘧啶脱氢酶(DPD)与胸苷酸合成酶(TS)在结直肠癌中的表达及预后价值

目的:探讨5-FU代谢酶在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法:44例结直肠癌根治术后分别施以5-FU为主的辅助化疗,并通过免疫组化检测二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和胸苷酸合成酶(TS)的表达。结果:DPD阳性表达的结直肠癌无病生存期显著缩短(P=0.047),而总生存期也有缩短的趋势,但差异无显著意义(P=0.136)。而TS表达与预后无关(P>0.05),但TS在晚期肿瘤中表达较高(P<0.05)。结论:在接受5-FU为主辅助化疗的结直肠癌患者中,DPD表达可作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密切相关,可视为结直肠癌进展的生物学标志。

肝移植后肝脏组织活检的动态病理学分析

目的:分析肝脏组织活检在肝移植后常见并发症鉴别诊断中的作用。方法:在52例原位肝移植中,27例因肝功能障碍在术后0～330d不等接受肝脏活检。其中经皮肝穿刺44次,肝脏楔形活检6次,总计活检50次。标本经常规行HE染色,并根据需要加染组织化学或免疫组织化学染色后作显微镜观察。结果:急性排斥反应分别占受检病例及总移植病例数的48.15%和25.00%;慢性排斥反应分别占两者之14.81%和7.69%;保存/再灌注损伤分别占25.93%和13.46%;肝动脉栓塞分别占11.11%和5.77%;肝内胆道损伤占7.41%和3.85%;CMV感染占3.70%和1.92%;肝炎复发占3.70%和1.92%;可疑药物性肝损伤占11.11%和5.77%。结论:急性排斥反应和保存/再灌注损伤是移植后早期肝功能障碍的主要因素;肝动脉栓塞和供肝冷缺血可导致肝内胆道损伤;急性排斥反应及病毒感染与慢性排斥反应的发生有关;而药物诱发的肝损伤因缺乏特异性改变则应密切结合临床并采取排除诊断法。

Wnt信号通路靶基因GS mRNA及蛋白在胃癌中的表达

目的:探讨Wnt信号通路的靶基因GS mRNA及蛋白在胃癌中的表达及其临床意义.方法:荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测52例胃癌组织及癌旁正常组织GS mRNA表达;免疫组织化学技术(SP法)检测97例胃癌组织、30例癌旁正常组织及10例肠化生组织中GS蛋白表达水平差异.结果:癌组织和癌旁正常组织GS mRNA表达有显著差异(25.508±5.090vs13.001±2.040,P<0.05).癌组织GS蛋白表达与组织学类型、Lauren分型及淋巴结转移密切相关(χ=26.994,54.929,5.173,均P<0.05),与肿瘤大小、TNM分期、远处转移及患者的性别和年龄等无明显相关.结论:GSmRNA和蛋白高表达同胃癌生物学行为密切相关,可能与胃癌的发生、发展及预后有关.

亚砷酸钠诱导HSP 72在大鼠肝脏热缺血–再灌注损伤中的保护作用

目的:观察亚砷酸钠(SA)诱导大鼠肝脏产生热休克蛋白72(HSP72)的过程及其抗肝脏热缺血-再灌注损伤的作用。材料与方法:将24只SD大鼠随机分成SA组(预先给予SA6mg/kg)和对照组(预先给予生理盐水)。24h后,两组均阻断肝脏中、左叶血供60min,再灌注3、6h;分别用Westernblot检测肝脏中的HSP72表达;外周血测定ALT、AST、LDH;组织学作HE染色、免疫组化测定HSP72。结果:注射SA6mg/kg后12h肝脏开始产生HSP72,24h达到高峰,并持续至60h。肝脏热缺血60min再灌注3、6h后,SA组HSP72显著表达,血清ALT、AST、LDH显著下降(P<0.05),组织学检查显示肝脏损伤明显减轻。结论:SA可诱导大鼠肝脏产生HSP72;SA预先诱导肝脏产生对HSP72可使肝脏抵御热缺血鄄再灌注损伤。

低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响

目的:探讨低温冻存时间对生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内2002至2006年间收集的手术切除胃癌标本20对(包括肿瘤组织及配对正常组织),用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定RNA、DNA完整性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测核转录因子-κB(NF-κB)亚单位P65的mRNA表达;蛋白印迹(Western blot)法检测NF-κB蛋白表达。另随机抽取46例胃癌标本,检测其NF-κBP65的单核苷酸多态性(SNP)位点变异。结果:所有抽提DNA的吸光度比值(A260/A280)均在1.7～2.1间,电泳条带清晰,可检测出SNP位点变异。与保存1～2年者相比,储存3年或以上的标本NF-κBP65 mRNA与蛋白表达均有下调(P=0.03,P<0.01)。结论:组织样本低温保存在5年范围内,其DNA分子的完整性与质量均未受影响;RNA与蛋白质分子在低温保存1～2年内尚不影响癌基因表达的分析结果,但低温保存3年或以上的标本中RNA及蛋白质均有不同程度降解。

化疗药物杀伤原代胃癌细胞效应与P-糖蛋白和GST-π表达的关系

背景与目的:化疗耐药是影响进展期胃癌疗效的主要原因之一。本研究旨在评价不同化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其诱导凋亡能力,同时研究上述效应与胃癌组织P鄄糖蛋白(P鄄gp)和谷胱甘肽S转移酶π(GST鄄π)表达的关系。方法:39例分离纯化后的人新鲜胃癌细胞,分别暴露于血浆峰浓度的5鄄氟尿嘧啶(5鄄FU)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)及羟基喜树碱(HCPT)。用台盼蓝染色法和MTT法检测经上述药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性的变化;用原位末端转移酶标记法(TdT法)检测胃癌细胞凋亡率;并用免疫组化染色检测胃癌组织中GST鄄π和P鄄gp的表达。结果:经化疗药物作用后,体外培养的胃癌细胞出现不同程度的形态学改变、代谢活性下降及细胞凋亡。不同个体肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性不同。MTT结果提示,所测药物对胃癌细胞的平均抑制率由高到低依次为MMC[(38.6±7.7)%],DDP[(38.1±8.8)%],5鄄FU[(37.8±10.3)%],ADM[(31.9±10.4)%],HCPT[(29.9±10.2)%]。MMC、DDP及5鄄FU的平均抑制率明显高于HCPT及ADM(P<0.01)。TdT结果提示,诱导胃癌细胞凋亡率由高到低的药物依次为DDP[(32.1±7.7)%],5鄄FU[(31.1±8.8)%],MMC[(29.8±6.3)%],HCPT[(21.9±7.4)%],ADM[(19.9±7.4)%]。本组病例GST鄄π和P鄄gp的?

解聚素-金属蛋白酶17在结肠直肠癌中的表达及其意义

目的:研究解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease17,ADAM17)在结肠直肠癌中的表达及其临床意义。方法:收集80例手术切除的结肠直肠癌及60例正常结肠直肠黏膜组织,采用RT-PCR和免疫组化SP法检测ADAM17在结肠直肠癌及正常结肠直肠黏膜组织中的表达情况;分析ADAM17在结肠直肠癌组织中的表达和病人临床病理特征之间的关系。结果:结肠直肠癌组织的ADAM17基因表达高于正常结肠直肠黏膜组织(0.66±0.14比0.26±0.12,P<0.01),ADAM17蛋白在结肠直肠癌组织中之表达阳性率为79%,在正常结肠直肠黏膜组织中之表达阳性率为25%,差异具有统计学意义(P<0.01)。ADAM17高表达与结肠直肠癌浸润深度及远处转移相关(P<0.05);与病人的年龄、性别、肿瘤部位、大小、分化程度及淋巴结转移无关。结论:ADAM17在结肠直肠癌组织中呈高表达,此情况与结肠直肠癌浸润深度及远处转移相关,可能成为一种新的判断结肠直肠癌病人预后的标志物。

大鼠侧脑室注射细胞因子等对脑损伤的形态学研究

目的:探讨大鼠侧脑室注射细胞因子和高渗液等致病因素对脑组织的损害作用。方法:48只雄性SD大鼠分为6组:侧脑室内分别注射TNF-α、10%NaCl、胰脂肪酶、白色念珠菌悬液及大肠埃希菌悬液,注射0.9%NaCl作为对照;以光镜和电镜观察不同损害因素对大鼠脑组织的作用。结果:TNF-α、10%NaCl、胰脂肪酶、真菌及细菌悬液均可招致不同程度的脑神经元和胶质细胞的水肿、核固缩、脑软化、轴突髓鞘板层结构紊乱、髓鞘脱失等病理改变。结论:促炎细胞因子、高渗状态、胰脂肪酶以及真菌和细菌感染都是重症急性胰腺炎病程中导致脑组织髓鞘、神经元和胶质细胞等损伤的病理因素。

热休克蛋白在良恶性嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的通过检测热休克蛋白90(HSP90)在良、恶性嗜铬细胞瘤(PC)组织中的表达情况,探讨HSP90能否成为一项用于评估嗜铬细胞瘤潜在恶性程度的有效分子标记物。方法选取1986年10月～2006年8月在我院泌尿外科行手术治疗、且有完整的临床、病理和随访资料的嗜铬细胞瘤患者存档石蜡标本38例,其中良性嗜铬细胞瘤(BP)21例,恶性嗜铬细胞瘤(MP)17例。采用免疫组化技术Envision二步法,检测良、恶性嗜铬细胞瘤中HSP90的表达情况。恶性组经首次手术确诊后随访28～179月,良性组经首次手术确诊后随访93～264月。结果在MP组中HSP90的阳性表达率为70.59%,明显高于BP组中阳性表达率28.57%,两组热休克蛋白的表达具有显著的统计学差异(P<0.05)。结论 HSP90有望成为区分嗜铬细胞瘤良恶性的一项指标。

急性坏死性胰腺炎大鼠脑髓鞘损伤的初步观察

目的:研究急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠24h内脑脊液和血清髓鞘碱性蛋白(MBP)水平的动态变化。方法:分别诱导SD大鼠ANP和急性水肿性胰腺炎(AEP)模型,同时设立假手术组。分别于模型诱导后3、6、9、12、24h抽取小脑延髓池脑脊液和腹腔动脉血液。以ELISA法测定脑脊液、血清中MBP的含量。透射电镜观察髓鞘超微结构变化。结果:ANP组大鼠诱导后3h,脑脊液MBP水平明显高于AEP组和假手术组(P<0.01),6、9h时仍维持在较高水平(P<0.05),12、24h时则降至较低水平。ANP组、AEP组和假手术组血清MBP水平无显著差异(P>0.05),在24h内维持于较低水平。电镜检查,3～9hANP组脑髓鞘主要呈轻度的损伤性改变,如空泡化、板层结构散乱等改变。结论:大鼠ANP早期存在脑组织髓鞘结构损害,表现为脑脊液MBP水平明显升高。

结肠癌K-ras突变与对西妥昔单抗耐药的实验研究

目的:研究结肠癌K-ras基因突变导致对西妥昔单抗耐药的可能机制。方法:通过基因测序及免疫细胞化学染色,筛选表皮生长因子受体(EGFR)表达阳性,同时K-ras基因呈突变型及野生型的结肠癌细胞各1株,应用细胞增殖实验(CCK8方法)、流式细胞技术(Annexin V标记),检测西妥昔单抗(C225)在体外对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。同时用K-ras呈野生型和突变型的结肠癌细胞株,分别建立裸鼠皮下移植瘤模型,分成HT29-C225、HT29-NS、SW620-C225及SW620-NS组,给予西妥昔单抗(每3天注射1次,每次0.5mL,共4周)。治疗后,绘制肿瘤生长曲线,用TDT介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,用定量PCR、免疫组织化学染色(IHC)及蛋白印迹(Western-blot)等技术检测移植瘤标本中EGFR信号转导通路中AKT及其磷酸化蛋白的表达。结果:体外增殖及凋亡实验显示,西妥昔单抗对不同K-ras基因型的结肠癌细胞均未能显示细胞毒作用。而体内研究发现,西妥昔单抗能明显抑制K-ras野生型结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长,但对K-ras突变型者抑制作用较差。对K-ras突变型结肠癌裸鼠皮下移植瘤的定量PCR检测结果显示,西妥昔单抗治疗组裸鼠的AKT基因表达率高于对照组。IHC及Western-blot显示,西妥昔单抗治疗组与对照组间AKT蛋白的表达率无明显差异,但西妥昔单抗治疗组裸鼠的p-AKT表达率高于对照组。结论:K-ras突变状态与西妥昔单抗的疗效相关,K-ras突变型者EGFR信号通路中的衔接蛋白AKT呈自主激活状态,该基因突变可能是导致对西妥昔单抗耐药的机制之一。

氯喹在小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤中的保护作用

目的:研究氯喹对小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤的保护作用,并探讨相关机制。方法:Balb/c小鼠建立肝脏部分热缺血-再灌注模型。氯喹组给予氯喹预处理,对照组给予等体积生理盐水。肝脏再灌注1、6、24 h后检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)水平,HE染色检测肝脏病理学变化,荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α和IL-6 m RNA水平,Western印迹检测肝脏TLR4及HMGB1表达。结果 :与对照组相比,氯喹组再灌注1、6、24 h血清ALT显著下降(P<0.05);肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润显著减轻(P<0.01);血清TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05);组织TNF-α、IL-6 m RNA表达以及HMGB1、TLR4蛋白含量显著减少(P<0.05)。结论 :氯喹预处理可显著减轻小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤,其机制可能通过抑制HMGB1表达及TLR4信号通路。

胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测

目的:研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法:从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及5'端转录起始点上、下游各3,000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果:IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3'端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃粘膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论:IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。

STAT3蛋白、VEGF和MVD在肾上腺皮质癌中的表达及其意义

目的探讨信号转导和转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和微血管密度(microvessel density,MVD)在肾上腺皮质癌(ACC)中的表达及其临床意义。方法选取经手术治疗且具有完整的临床、病理资料的肾上腺皮质肿瘤存档石蜡标本37例,其中良性组20例,恶性组(ACC组)17例。采用免疫组化技术,检测良、恶性肾上腺皮质肿瘤中STAT3、VEGF和MVD的表达情况。结果 STAT3在ACC组中呈高表达(11/17,64.71%),在良性组中表达较低(4/20,20%),ACC组与良性组之间STAT3的表达有显著性差异(P<0.05);VEGF在ACC组中呈高表达(12/17,70.59%),在良性组中表达较低(5/20,25%),VEGF在ACC组中的表达与在良性组中的表达有显著性差异(P<0.05);MVD在ACC组中的表达为76.40±15.64,良性组中为21.05±8.07,两者之间有显著性差异(P<0.05)。无论是在良性组中还是在ACC组中,STAT3与VEGF的表达、VEGF与MVD的表达均呈正相关。结论 STAT3和VEGF在ACC中的高表达为抗肿瘤血管生成治疗在ACC中的应用,提供了一定的理论依据。