赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。

NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。

子宫内膜癌患者T细胞亚群、红细胞免疫与Ag-NOR_s定量分析的临床意义

目的 探讨子宫内膜癌患者的免疫功能变化及临床意义 .方法 采用单克隆抗体直接免疫荧光染色法、红细胞花环试验及 KL 型肿瘤免疫图象分析仪 ,对 2 1例子宫内膜癌患者和 2 0名正常对照组分别测定其外周血 T细胞亚群、红细胞免疫 C3b受体花环率 (E- C3b RR% )与红细胞循环免疫复合物花环率 (ICR% )、核仁银染区面积 /细胞核面积比值 (I.S% ) .结果 子宫内膜癌患者 CD+ 3T细胞 ,CD+ 4T细胞 ,CD+ 4/ CD+ 8比值 ,E- C3b RR% ,I.S%值明显降低 ;CD+ 8T细胞 ,E- ICR%明显升高 ,与对照组相比较差异显著 (P<0 .0 1) .结论 子宫内膜癌患者免疫功能低下 ;联合检测 T细胞亚群、红细胞免疫与 Ag- NORs可较全面反映子宫内膜癌患者的免疫功能状态 。

NGAL基因5′侧翼区转录调控元件的分段定位鉴定

目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果 :在NGAL基因 5′端 -945～ -65 8和 -65 7～ -4 172个区段发现了转录增强子元件与转录激活蛋白之间的相互作用 ,而在 -4 16～ -15 2区段则发现了转录沉默子元件与转录抑制蛋白之间的相互作用。结论 :在NGAL基因5′侧翼转录调控区可能至少存在着 2个转录增强子元件和

NGAL的结构与功能研究进展

NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin）是一种新的lipocalin,其结构与功能的研究进展为人瞩目。目前认为 ＮＧＡＬ具有运输疏水性小分子，调节明胶酶B(gelatinase B或matrixmetalloproteinase-9,ＭＭＰ－９）活性等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。最近，ＮＧＡＬ蛋白的空间结构已被研究清楚。这对于促进ＮＧＡＬ生物学作用或功能的研究，特别是对其新的生物学作用或功能的探索，比如与肿瘤的关系（ＮＧＡＬ可能是一种新的癌基因或促癌基因）将具有十分重要的意义。对此作者进行了综合评述。

一氧化氮对体外培养大鼠大脑神经细胞的神经毒作用的初探

应用细胞培养技术，探讨了大脑神经细胞接触硝普钠（（ＳＮＰ）一氧化氮的供给者）的剂量、时间与神经毒作用的关系，结果显示，接触时间为５ｍｉｎ时，随ＳＮＰ浓度的增高，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）净增加率呈良好的二次回归；而在一定浓度下，随着接触时间的延长，ＬＤＨ净增加率呈良好的线性回归。这些结果表明，一氧化氮（ＮＯ）可产生剂量时间依赖的神经细胞损伤。

NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体的构建与鉴定

背景与目的:构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5’侧翼转录调控区不同长度片段G0-G6(-1431-+84)。PCR产物经pGEM-Teasy转载,再定向亚克隆插入pGL3-Basic。重组子通过特异限制性内切酶切割,琼脂糖电泳予以鉴定。结果:成功构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体7个,pGLB-G0-G6。结论:为借助于双荧光素酶报告基因检测系统研究确定NGAL基因5’侧翼转录调控区转录调控元件的分布特点以及转录调控元件与转录调控蛋白之间相互作用的性质提供了基本实验条件。

Simulink在移动通信实验仿真中的应用

针对移动通信实验教学的局限,以具体实例研究了将通信仿真软件Simulink引入该课程的思路和方法。实践表明,通过教师演示和引导学生观察思考,利用Simulink辅助实验教学,可以使抽象的移动通信原理变得形象化,有效地提高了移动通信实验课程的教学效果,为专业课实验教学方法和手段的改革提供新的途径。

基于SIMULINK的PN码同步系统仿真研究

在MATLAB/SIMULINK平台上,采用相位搜索法设计并实现了扩频通信系统中PN码的同步仿真。对相位搜索法理论分析的基础上,利用Simulink通信系统仿真工具箱,建立了PN码同步系统仿真模型,分析了该系统的工作过程。仿真结果表明,利用Simulink仿真扩频通信中PN码同步系统,物理概念清晰,方法简单、实用。

食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件

以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.

移动通信链式实验教学体系

针对移动通信技术的飞速发展及实验教学的滞后,探索一种移动通信链式实验教学体系。该体系链联3个学期,包含工程认识、专业实验、工程实训、系统仿真四大模块,涵盖了理论验证、关键技术仿真、通信系统实训。通过对该实验教学体系的建设,逐步强化学生对通信系统的工程意识及工程技能,有效地提高了移动通信实验课程的教学效果,为改革专业课实验教学方法探索新的思路。

移动通信课程双语教学的实践与探索

主要探讨高校工科专业课程的双语教学改革。移动通信是通信工程专业的一门主干专业课,通过几年来移动通信课程双语教学的实践,总结了一些经验,并分析了双语教学中遇到的主要问题及解决办法。

人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验?

血清过氧化脂质水平与更年期和性别的关系

本文采用荧光分光光度法测定了健康人血清水溶性荧光物质(WSFS)的相对含量,借此来衡量血清过氧化脂质(LPO)水平。结果表明,血清LPO水平随增龄而升高,其中女性呈极显著正相关,男性相关性不明显。年龄分组比较,女性血清LPO水平更年期前较低,更年期时明显升高(P<0.01),而更年期后有所下降;男性无此规律。性别间比较,男性明显高于女性(P<0.01)。本研究结果提示,血清LPO水平的增龄性变化规律可能与更年期生理特点、性别以及人体衰老机制有一定关系。

扩展频谱通信系统的仿真

主要研究二进制扩展频谱通信系统的基本原理及其模型的仿真实现，并用ＭＡＴＬＡＢ语言对此系统模型与普通二进制数字通信系统模型加以仿真比较。比较结果表明，扩展频谱通信系统在抗干扰方面优于普通二进制通信系统。

HPV18E6E7基因诱发的人胎儿食管上皮永生化和恶性转化细胞端粒长度和端粒酶活性

目的 :探讨端粒长度、端粒酶活性以及端粒酶亚单位组分 (hTERT、hTR)的表达与食管上皮细胞永生化和恶性转化之间的关系。方法 :对HPV18E6E7基因诱发的人胎儿食管上皮永生化细胞系SHEE和恶性转化细胞系SHEEC ,通过Southernblot检测端粒长度 (TRF) ,TRAP法测定端粒酶活性 ,RT PCR研究端粒酶催化亚单位 (hTERT)和端粒酶RNA成分 (hTR)的表达。结果 :SHEE细胞和SHEEC细胞的端粒平均长度比正常食管上皮细胞的明显缩短 ,但稳定维持在一定长度范围内。SHEE细胞和SHEEC细胞均具有端粒酶活性 ,并均有hTERT和hTR表达。结论 :端粒酶表达活化使端粒维持在一定长度是永生化食管上皮细胞SHEE和恶性转化细胞SHEEC能够稳定分裂增殖的重要因素之一。

非同位素标记法检测人染色体端粒长度

目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1:12 80稀释 )、DNA上样量 (>2 0 μg)、杂交温度 (4 7± 2℃ )等主要影响因素 ,获得了比较好的杂交条带。结论 :建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法。

基于空间收缩的新颖粒子群优化算法

针对粒子群优化算法的不足，通过引入空间收缩思想，定义了收缩半径和收缩周期，提出了一种新的基于空间收缩粒子群优化算法，并给出了该改进算法的重要参数——收缩比与收缩周期，在5个著名基准测试函数上研究了算法主要参数——收缩比和收缩周期对算法性能的影响，并与一些经典改进算法进行了广泛的对比实验，分析了算法的性能，实验结果表明，该算法能够有效避免早熟收敛，显著提高收敛率和解的质量，尤其对高维复杂函数优化问题优势更明显，

小波变换在弹射加速度滤波中的应用

小波分析作为一种崭新的信号处理方法，在工程界受到了越来越广泛的重视，已成功应用于信号分析、图像处理及非线性科学等方面。小波变换是去噪的有力工具，能将由各种不同频率成分组成的混合信号分解到不同的频率段上，有效地用于滤波和信噪分离。本文基于小波分解与重构理论，分别对航空弹射加速度信号滤波，与传统的消噪法进行了比较。结果表明小波去噪法用较少的数据就能很好地完成滤波功能，并且滤波的效果优于传统的方法。

基于小波变换的弹射加速度频谱分析

基于小波变换可提取信号所需频率成分的特性 ,利用多个小波组合 ,设计较理想的带通滤波器 ,采用频谱细化法对航空弹射加速度信号作频谱分析 ,并将此法与经低通数字滤波器后得到的信号的FFT谱分析做了比较。结果表明 ,基于小波变换的频谱细化法比FFT谱分析法有较高的频率分辨率 ,实现起来也比较简单、容易 。