人外周血树突状细胞的分离与鉴定

应用细胞分层剂密度梯度离心辅以细胞贴壁和花环沉降法，分离和纯化人外周血树突状细胞。通过Ｅｔ花环形成细胞测定、荧光染色镜检和ＦＡＣＳ分析表明，分离的细胞纯度可达４０％～６０％，残留的其他细胞多为ＮＫ细胞、单核细胞和Ｔ细胞。ＦＡＣＳ分析还显示：所分离的细胞表面ＭＨＣⅡ类抗原的阳性率达９７．３４％；扫描电镜观察可见独特的细胞形态。将此类细胞加入体外淋巴细胞增殖反应体系则呈现明显促进作用。提示：分离的细胞形态与功能均与树突状细胞相符。

鼻疽假单胞菌与类鼻疽假单胞菌的基因分类

目的 :对鼻疽假单胞菌和类鼻疽假单胞菌进行基因分类研究。方法 :应用 16SrDNA扩增、基因测序及微孔板定量杂交技术 ,从基因水平对具有不同生物学特性的鼻疽假单胞菌和类鼻疽假单胞菌两个标准菌株进行同源性分析。结果 :尽管两种细菌在生物学特性上有着明显的差异 ,但其 16SrDNA序列相似度达 99%以上 ,且染色体DNA定量杂交也显示大于 70 %的同源性。结论 :鼻疽假单胞菌和类鼻疽假单胞菌的系统发育关系十分密切 ,应归属于同一种 ,是否妥当仍待进一步考证。

OT致小鼠DTH模型及雷公藤多甙抑制效应的实验观察

以局部血管通透性的改变为指标，比较了旧结核菌素（ＯＴ）和牛血清白蛋白（ＢＳＡ）诱导小鼠迟发型超敏反应（ＤＴＨ）的作用，并以此为基础，在成模前给小鼠连续９～１５ｄ灌喂３０ｍｇ／ｋｇ的雷公藤多甙（ＴⅡ），以观察该药的抑制效应。结果表明，０．２５Ｕ的ＯＴ２次注射后能明显导致小鼠的ＤＴＨ；ＴⅡ应用后可有效地减轻第２次ＯＴ注射局部血管的通透性，降低ＤＴＨ的发生率。通过树突状细胞（ＤＣ）过继后对ＤＴＨ的影响、ＴⅡ对ＤＣ作用的研究及模型小鼠淋巴细胞增殖能力和血清ＴＮＦ、ＮＯ水平的检测，对ＤＴＨ的发生和ＴⅡ抑制ＤＴＨ的机制做了初步探讨。

人外周血树突状细胞递呈可溶性肿瘤抗原触发抗瘤免疫的体外研究

考察人外周血树突状细胞（ＤＣ）递呈可溶性肿瘤抗原激发抗瘤免疫作用。应用改良Ｓｔｅｉｎｍ ａｎ 法分离纯化人外周血ＤＣ，同时将ＭＤＡ、３ＡＯ及Ｗｉｓｈ 三种瘤细胞制成可溶性肿瘤抗原，将二者于体外共育，分析ＤＣ表面标记的改变及某些细胞因子产生的水平，并检测其对肿瘤细胞杀伤作用的影响。结果表明，经可溶性肿瘤抗原刺激的ＤＣ分泌ＩＬ－１２及ＴＮＦα水平增加，同时高水平表达ＣＤ４０ 、ＣＤ８０ 等表面分子；与对照组相比，显示不同程度的促杀伤作用并有效地促进特异性淋巴细胞增殖。ＧＭ－ＣＳＦ上调ＤＣ的上述作用。

小鼠脾脏树突状细胞免疫功能的体外研究

本实验通过对小鼠脾脏分离到的树突状细胞免疫功能的研究表明,在ConA,PHA刺激的淋巴细胞增殖反应和混合淋巴细胞反应(MLR)中树突状细胞具有明显强于巨噬细胞的抗原递呈作用(P<0.001或P<0.005)。树突状细胞的这种作用可被特异性的单克隆抗体所抑制(抑制率>95％)。少量的巨噬细胞可促进其作用。

抗大鼠树突状细胞单克隆抗体的研制及初步鉴定

树突状细胞是一种重要的抗原提呈细胞,在移植排斥反应中发挥重要作用。为了进一步研究该细胞的功能和寻找抗移植排斥反应的更有效途径,我们在分离大鼠树突状细胞获得成功的基础上,应用杂交瘤技术制备出5株抗树突状细胞单克隆抗体,分别命名为WZD1～5。杂交瘤细胞培养上清或腹水对新鲜分离的大鼠树突状细胞均显示不同程度的细胞毒性作用,且与腹腔Mφ及淋巴细胞无明显交叉反应。经间接免疫荧光染色测定,腹水中单抗的效价为2×10^(-2)。

DC增强血清NO和TNF水平及促进佐剂性关节炎的发生

静脉注射树突状细胞后，诱导大鼠佐剂性关节炎，并通过检测其血清ＮＯ和ＴＮＦ含量，探讨免疫损伤性炎症形成过程中ＮＯ的作用与ＴＮＦ水平变化的关系及可能的作用机制。结果表明，与对照组相比，佐剂性关节炎模型鼠血清中ＮＯ和ＴＮＦ水平均升高，尤以ＤＣｓ注射组为著（Ｐ〈０．０１和Ｐ〈０．０５），经抗ＤＣｓ单克隆抗体（ＷＺＤｓ）免疫抑制处理的模型鼠炎症损伤减轻，血清ＮＯ和ＴＮＦ含量也随之降低。

雷公藤多甙与WZD_3联合免疫抑制作用的研究

SD 大鼠尾静脉注射大鼠树突状细胞单克隆抗体(WZD_3)和 la 单克隆抗体。同时经灌胃施用雷公藤多甙(T_1,33mg/kg),观察其外周血或脾淋巴细胞对 ConA 刺激的增殖能力、混合淋巴细胞反应(MLR)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)及溶血素产生的水平。结果表明,单独注射的两种单抗皆可明显抑制 T 细胞应答和减少 B 细胞分泌溶血素的水平(P<0.01或 P<0.05),当 WZD_3与 TⅡ减半量联合应用时,其对 MLR 仍表现抑制作用(P<0.01),但不影响 T 细胞的增殖能力和溶血素的产生(P>0.05),这一作用可能与对 MHC 基因产物特异性耐受的诱导相关。

传统廉政文化中为官者应具备的道德操守

中国传统廉政文化要求为官者以道德操守为重。为官者应具备的道德操守主要包括四个方面:以清正廉洁为要、以忠君爱国为首、以爱民利民为本、以戒奢从俭为先。中国传统社会中一批具有远见卓识的政治家和思想家,以及清廉勤勉的清官廉吏代表,他们所倡导与表现出的清正廉洁、为国爱民、戒奢从俭的道德操守,值得当下广大党员领导干部思考与学习。

细胞程序性死亡研究在医学上的战略意义

细胞程序性死亡(Programmed Call death,PCD)的概念是在1965年由Lockshin & willians等首先提出。直到1972年Kerr,Curri和wyllie等又从另一个角度提出了细胞凋亡(Apoptosis,APO)的概念。这两个概念从不同角度描述了生物细胞自然死亡的规律,即生理死亡现象。这种生理性死亡近年来受到生物学家及医学家们的重视。广泛将研究成果应用十老年医学,某些疾病的发生和防治及一些免疫生理现象,如机体对自身组织耐受性等。现将研究概况分别叙述于下:

一株Pseudomonas sp.的分离鉴定与所产絮凝剂性能研究

从土壤中分离筛选出一株絮凝剂产生菌,命名为C-2,通过nPCR扩增试剂盒鉴定得出这株絮凝剂产生菌为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens);絮凝性能实验表明:生物絮凝剂(命名为PS-2)在碱性条件下,以CaCl2作为助凝剂处理高岭土悬浊液时,用量仅为20mL/L,搅拌强度要求不高,能够使高岭土的絮凝率达到98%以上,絮体形成快,矾花大,沉降速度快,且温度的影响不大;将PS-2应用于多种高浊度废水的处理中,结果表明其对多种废水均具有良好的絮凝效果;成分分析表明PS-2是一种多糖和核酸的混合物。

T-bet、GATA3及相关因子的表达与胃癌及转移的相关性研究

目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测55例胃癌患者及45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平,应用免疫组化法检测胃癌组织中p53的表达状况。结果:55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51%(28/55)、78%(43/55)、27%(15/55)、69%(38/55)。定量PCR结果显示,病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(P<0.01),而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(P<0.01)。T-bet与IFN-γ在病人体内的mRNA表达存在正相关性(P<0.01),正常人则没有。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(P<0.01和P<0.05),且在p53阳性的患者中,T-bet的表达率较低,而GATA3的表达率较高。结论:胃癌患者有明显Th2漂移现象,且p53的表达与T-bet的表达呈负相关。

伤寒沙门菌基因组DNA芯片的制备与基因表达谱分析应用

伤寒沙门菌是一种具有鞭毛的革兰阴性人类肠道致病菌,也是一种重要的原核生物研究用模式菌.基因组芯片能够系统、全面且高效地观察生物的基因表达及进行基因组结构比较.利用伤寒沙门菌现有的全基因组序列,以Ty2菌株的基因组为基准,选取CT18菌株和z66阳性菌株的特异性蛋白编码基因,设计特异性引物,经PCR有效扩增出4201个基因,产物纯化后点样于多聚赖氨酸玻片制备伤寒沙门菌基因组DNA芯片,并验证了芯片样点位次与效果.通过对基因表达谱分析的各种条件进行优化,建立相应的表达谱分析方法,并用于比较伤寒沙门菌野生株在高渗、低渗条件下的基因表达差异,结果与以前的报道基本一致.结果表明,成功建立了伤寒沙门菌基因组DNA芯片及表达谱分析方法,可为有关伤寒沙门菌基因表达调控及致病性机理、进化和基因多样性等方面的深入研究提供有效的技术支持.

猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定

目的:从猪关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定。方法:选择猪关节软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶消化、氯化钠盐析、DE22纤维树脂处理等步骤,提取纯化Ⅱ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析等方法对Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定。结果:4 mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖;分步加入胃蛋白酶的限制性酶解结果满意;氯化钠盐析浓度为2.4 mol/L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的Ⅱ型胶原蛋白与S igm a公司的产品一致。Ⅱ型胶原最大吸收峰为230 nm,氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论:实验结果提示从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,符合II型胶原的特征。提取材料广泛、实验条件简便,结果可靠。

多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K-B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测β内酰胺类耐药基因。结果 47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和OXA-51的阳性率分别为91.5%(43株)、93.6%(44株)、93.6%(44株)和95.7%(45株)。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗生素耐药可能与β内酰胺类耐药基因的表达相关。

Th9细胞:一种新型效应性CD4^+ T细胞亚群

长期以来,人们认为IL-9是Th2类细胞因子,作用于多种炎症细胞和组织细胞,在对抗寄生虫感染和诱导变应性疾病,尤其是过敏性哮喘中发挥着重要的作用。近来研究发现,机体内存可能在着一群新型的不同于已知的Th1、Th2及Th17的CD4+Th细胞亚群,具有分泌IL-9和IL-10的能力,有学者称之为"Th9"细胞。由于IL-9主要由Th9细胞分泌,这就需要对原本归于Th2类的生理或病理改变机制进行重新探讨,以阐明Th9细胞在细胞免疫中的作用。现就Th9细胞的生物学功能及与相关疾病的关系进行简要综述。

可溶性Ⅱ型胶原蛋白提取纯化条件的研究

目的优化实验条件,建立提取纯化可溶性Ⅱ型胶原蛋白(solublecollagentypeⅡ,SCⅡ)的可靠方法。方法选择鸡胸箭突软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖,对胃蛋白酶的消化方式、氯化钠盐析浓度、DEAE阴离子树脂种类进行研究。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析对SCⅡ进行鉴定。结果4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖,分二步加入胃蛋白酶的消化结果满意,氯化钠盐析浓度为2.4mol/L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的SCⅡ与Sigma公司的产品一致,SCⅡ最大吸收峰为230nm,在检出的15种氨基酸中甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论改进后的方法具有材料广泛、实验条件简便、结果可靠等优点,适用于科研、临床各种规模SCⅡ的提取。所得产品纯度高、符合II型胶原的特征。

大鼠DCs单抗和雷公藤多甙对大鼠同种异体心肺联合移植排斥反应的影响

采用改良的大鼠同种异体心肺联合移植手术，研究了大鼠树突状细胞（ＤＣｓ）单克隆抗体单独和联合雷公藤多甙片对移植排斥反应的影响，并与生理盐水对照组、雷公藤多甙片（ＴⅡ）组进行比较。结果表明：大鼠ＤＣｓ单抗单独和联合ＴⅡ两治疗组间无明显区别，但两组大鼠移植心脏存活时间明显长于生理盐水组和ＴⅡ组（Ｐ＜００１）；而且病理切片显示以慢性排斥反应改变为主。而生理盐水对照组和ＴⅡ组皆表现为急性排斥反应。提示ＤＣ单抗在治疗移植排斥反应中有实用价值。