HES5对肾小管上皮细胞转分化和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨HES5(hairy and enhancer of split 5)对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡的作用及其潜在机制。方法分析和筛选GSE66494数据中的差异表达基因。建立小鼠的输尿管梗阻模型(unilateral uretera obstruction,UUO),检测肾组织中HES5的表达水平。TGF-β1(10 ng/mL)处理HK-2细胞24 h建立肾小管上皮-间质转化模型后,通过qRT-PCR和Western blot检测HES5的表达水平。用过表达HES5的质粒转染HK-2细胞,24 h后检测其纤连蛋白(Fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)及凋亡相关标志物(Bax、Bcl2)等蛋白表达;然后,将HK-2细胞分为4组:Control组、siHES5组、TGF-β1组、siHES5+TGF-β1组,检测各组的纤维化及凋亡标志物的表达情况。运用TUNEL及流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测各组AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。通过加入PI3K抑制剂(LY294002)处理过表达HES5的HK-2细胞后,检测Vimentin的表达。结果HES5的表达在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和小鼠纤维化肾组织中均显著上调;过表达HES5可以促进HK-2细胞中FN、CollagenⅠ、Vimentin、Bax的合成,抑制Bcl2的表达(P<0.05);敲低HES5不仅下调纤维化标志物的表达,还抑制了肾小管上皮细胞凋亡;此外,HES5基因敲低使TGF-β1诱导的HK-2细胞内PI3K/AKT信号通路的激活程度降低(P<0.05);PI3K/AKT信号通路抑制剂减弱了HES5对Vimentin的诱导作用。结论敲低HES5可以抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡,这可能与PI3K/AKT信号通路活性降低有关。

Fgl2对小鼠急性肾损伤中巨噬细胞极化的作用

目的探讨纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein2,Fgl2)对顺铂诱导的急性肾损伤(cisplatin-induced acute kidney injury,Cis-AKI)中巨噬细胞极化的作用。方法选取24只8~10周龄(体质量20~25 g)的雄性野生型(Fgl2^(+/+))小鼠和Fgl2基因敲除(Fgl2^(-/-))小鼠各12只。单次腹腔注射生理盐水(saline)或顺铂(cisplatin,Cis)处理3 d,按随机数字表法分成4组(n=6):Fgl2^(+/+)Saline组、Fgl2^(+/+)Cis组、Fgl2^(-/-)Saline组和Fgl2^(-/-)Cis组。3 d后,检测肾功能相关指标血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的水平,HE染色评估肾损伤程度;Western blot检测肾组织中Fgl2和肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)的表达;RT-qPCR检测Fgl2、Kim-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、IL-6、IL-12p40、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、TNF-α的表达;免疫组化检测肾脏Fgl2和巨噬细胞(F4/80^(+))的表达;免疫荧光检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))和M1型巨噬细胞(F4/80^(+)CD86^(+))的表达;流式细胞术检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))及M1型巨噬细胞(F4/80^(+)MHCⅡ+)、M2型巨噬细胞(F4/80^(+)CD206^(+))的表达。结果与Fgl2^(+/+)Saline组比较,Fgl2^(+/+)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),肾组织Fgl2表达显著上调(P<0.05);与Fgl2^(+/+)Cis组相比,Fgl2^(-/-)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾损伤相关分子Kim-1、NGAL表达显著升高(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),巨噬细胞浸润显著增加(P<0.05),M1型巨噬细胞相关分子IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS表达显著上升(P<0.05),流式细胞术结果显示M1型巨噬细胞百分比显著升高(P<0.05),M2型巨噬细胞百分比无明显变化,且M1型占比显著高于M2型(P<0.05)。结论Fgl2基因敲除可通过促进巨噬细胞向M1型转化加重Cis-AKI。

生物炭影响地带性土壤等温吸附丁草胺的特征及关键机制

为解析土壤理化性质与生物炭添加效果之间的相关性,明确生物炭影响地带性土壤等温吸附丁草胺的特征及关键机制,本研究采用9种不同理化性质地带性土壤,加入系列用量稻壳生物炭,考察了丁草胺在生物炭-土壤混合体中的等温吸附特征。结果表明:在不同生物炭添加剂量条件下,丁草胺在土壤中的吸附等温线均遵循Freundlich吸附模型,生物炭添加显著增加了9种地带性土壤对丁草胺的吸附能力[模型平衡常数(Kf)增加],降低了线性吸附的程度[模型指数(1/n)降低]。生物炭添加剂量越高,丁草胺吸附容量越大。热力学计算结果显示,在0.5%~2%生物炭添加条件下,丁草胺在地带性土壤中的吉布斯自由能为-16.30~-21.67 kJ·mol^(-1),表明吸附过程是自发且有利的。皮尔森相关性分析结果表明,土壤有机碳与Kf增长率呈显著负相关,说明土壤可溶性有机质抑制生物炭对丁草胺的吸附。多元线性回归方程分析结果显示,当土壤未添加生物炭时,土壤有机碳、pH、黏粒、粉粒4种土壤理化性质对Kf值的解释能力高达99%,而当生物炭添加为0.5%、1%、2%时,土壤有机碳、pH、黏粒、粉粒4种土壤理化性质对Kf值的解释能力分别下降至83%、70%、90%。通径系数研究表明,生物炭添加剂量从0上升至1%时,土壤黏粒和土壤粉粒对丁草胺吸附的直接作用系数增大,而有机碳和pH对丁草胺吸附的直接作用系数减小。研究表明,生物炭输入改变了丁草胺的吸附特征,土壤黏粒和土壤粉粒等土壤质地因素对丁草胺吸附产生重要影响。

Fgl2在小鼠横纹肌溶解诱导急性肾损伤中的作用及其机制

目的探讨纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,Fgl2)在横纹肌溶解诱导急性肾损伤(rhabdomyolysis induced acute kidney injury,RM-AKI)中的作用及其机制。方法将C57BL/6背景的野生型(wild-type,WT)小鼠和同背景Fgl2基因敲除(Fgl2 knock out,Fgl2 KO)小鼠分为4组:WT小鼠生理盐水组(WT+saline)、WT小鼠RM-AKI组(WT+Gly)、Fgl2 KO小鼠生理盐水组(Fgl2 KO+saline)、Fgl2 KO小鼠RM-AKI组(Fgl2 KO+Gly),每组5只。其中,RM-AKI组予以后腿肌肉注射50%甘油(10μL/g)建模,生理盐水组以等量生理盐水替代。48 h后检测小鼠肾功能(Scr、BUN)及其肾组织病理改变;qRT-PCR检测小鼠肾组织中Fgl2、IL-6、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-10的表达;免疫组化检测Fgl2、F4/80的表达;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡,Western blot检测Fgl2、Bcl2、Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9的表达。结果与WT+saline组相比,WT+Gly组小鼠肾组织Fgl2的表达显著升高。与WT+Gly组相比,Fgl2 KO+Gly组小鼠肾功能障碍程度减轻,肾组织病理损伤评分降低(P<0.05);且促炎因子IL-6、MCP-1、TNF-α、IL-1β表达降低,抑炎因子IL-10表达增加(P<0.05);巨噬细胞浸润、肾组织细胞凋亡减少,凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达下降,而Bcl2蛋白表达无明显差异。结论Fgl2基因敲除可抑制炎症反应、降低细胞凋亡,对小鼠横纹肌溶解诱导急性肾损伤具有保护作用。

TNFSF14促线粒体分裂介导小鼠缺血再灌注急性肾损伤

目的 研究缺血再灌注急性肾损伤(I/R-AKI)中肿瘤坏死因子超家族成员14 (TNFSF14)对线粒体功能的影响。方法 建立小鼠I/R-AKI模型,糖原染色和透射电镜比较TNFSF14+/+和TNFSF14-/-小鼠肾组织病理学的改变;IHC检测小鼠和临床相关病人肾组织中TNFSF14及其受体LTβR和HVEM和线粒体活动相关蛋白(Drp1和Mfn2)的表达以及免疫细胞的浸润情况。体外细胞实验中,免疫荧光和免疫印迹观察外源性重组TNFSF14因子对肾小管上皮细胞系HK-2细胞的损伤和线粒体活动的影响。结果 TNFSF14及其受体在I/R-AKI小鼠和临床急性小管损伤病人肾组织中的表达显著增加;与假手术组相比,I/R小鼠肾小管损伤评分、免疫细胞浸润、细胞凋亡、线粒体损伤及Drp1表达显著增强;而TNFSF14基因敲除后,上述指标明显下调。体外细胞实验结果显示,外源性TNFSF14的刺激可加重缺氧诱导的HK-2细胞的凋亡和线粒体膜电位下降,同时增加Drp1Se616磷酸化促进其由胞浆向线粒体转移,导致线粒体分裂活动异常增加。结论 TNFSF14可能通过促线粒体损伤介导I/RAKI的病理进展过程。

Zn、Cd及其复合对小麦幼苗吸收Ca、Fe、Mn的影响

研究了溶液培养条件下Cd、Zn及其复合对小麦幼苗吸收Ca、Fe、Mn的影响 .结果表明 ,小麦幼苗对Zn、Cd的吸收随溶液中Cd2 +、Zn2 +浓度的升高而增加 ,Cd、Zn同时存在时与其单独作用时幼苗对它们的吸收不同 ,Zn影响幼苗对Cd的吸收 ,Cd对Zn的吸收起抑制作用 .Ca、Mn的吸收随溶液中Cd2 +、Zn2 +浓度升高而呈下降趋势 ,在Cd单独处理组和Zn单独处理组中Fe的吸收随Cd2 +、Zn2 +浓度升高而增加 ,但在Zn +Cd处理组中 ,Fe的吸收则呈下降趋势 ,其效应方式还与作物具体部位有关 .

AP-1与NF-κB的活化表达与T细胞的无能

目的 :探讨无能T细胞IL 2产生的缺乏与转录因子AP 1和NF kappaB的关系。方法 :通过提取活化组和无能组T细胞的核蛋白 ,进行凝胶电泳迁移率变动分析实验 (EMSA) ,检测了转录因子AP 1和NF kappaB的表达情况。结果 :与活化组相比 ,无能T细胞中AP 1不但表达水平下降 ,且出现组份缺失现象 ;转录因子NF kappaB在无能T细胞中的表达则高于活化组 ,但均有三种复合物存在。结论 :无能T细胞IL 2产生减少或缺乏可能与转录因子AP 1和NF kappaB表达紊乱 (减弱或增强 )以及组份的缺失有关。

超抗原SEA对外周血T细胞的活化作用

目的研究超抗原 SEA对外周血 T淋巴细胞的活化作用。方法用 SEA刺激人外周血 T淋巴细胞 ,观察细胞的 DNA合成、形态、IL - 2的产生、细胞表型以及凋亡情况。结果 SEA对 T淋巴细胞的促增殖作用在浓度为 10 0 ng/m L最强 ,在第 2、3d达高峰 ;首次或多次刺激不改变 T淋巴细胞的 CD4+ CD8+ 表型 ;首次刺激 2 4h内未见明显凋亡 ;但再次刺激 2 4h内即有明显凋亡 ;加入 rh IL - 2 2 d凋亡现象消失。结论超抗原 SEA对 T淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、作用时间有关 ,并且SEA首次或多次刺激对 CD4+ T淋巴细胞和 CD8+

超抗原SEA诱导T细胞无能的作用机制探讨

目的 探讨超抗原诱导T细胞无能的分子机制。方法 采用ELISA和FACS ,分别检测超抗原对诱导T细胞无能的过程中 ,IL 2、IL 10的产生和IL 2Rα链 (CD2 5 )的表达 ,并以3 H TdR掺入法 ,测定无能T细胞对rhIL 2、PMA及iono mycin的应答能力。 结果 在诱导T细胞无能的过程中 ,IL 2的产生显著降低 ,而IL 10的产生则逐渐升高 ;CD2 5的表达与活化组相比较无显著差异。rhIL 2的加入可恢复T细胞增殖 ;PMA单独作用能诱导无能T细胞的部分增殖能力 ,但PMA +ionomycin则能更大程度地恢复T细胞的增殖。结论 超抗原SEA对T细胞无能的诱导 ,可能与降低IL 2的水平和升高IL 10的水平有关。超抗原SEA的反复刺激对T细胞无能的诱导 ,可能是干扰了TCR信号途径的近端事件 ,导致Ras/MAPK途径和Ca/calcineurin途径受阻 ,而使IL

FLK1_(265-2493)与C3d3融合基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建FLK1265-2 493与C3d3融合基因真核表达质粒,并在体外进行表达和鉴定。方法采用PCR技术扩增FLK1265-2 493片段,将该片段插入到pMDT-18载体中后,亚克隆至真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL,构建FLK1265-2 493与C3d3融合基因表达质粒。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定结果证实后,将重组质粒pSG.SS.FLK1265-2 493.C3d3.YL转染Hela细胞,检测其体外表达。结果免疫印迹和免疫细胞化学分析结果分别表明转染细胞上清液和胞浆内均有目的分子的存在。结论构建的DNA疫苗可在真核细胞内正确表达,这为进一步的动物实验打下了基础。

超抗原SEA诱导T细胞失能体外实验模型的建立

目的建立超抗原诱导 T细胞失能的体外实验模型。方法 SEA刺激人外周血淋巴细胞 ,再加入外源性的 r IL-2维持 ,建立短期 SEA反应性 T细胞系 ;进行 Ficoll- Hypaque密度梯度离心获取经 SEA多次刺激过 SEA反应性 T细胞 ;加入处理过的 PBMC作 APCs,建立超抗原 SEA诱导 T细胞的活化组和失能组。结果 SEA和 r IL - 2共同作用可得到静息 SEA反应性 T细胞系 ;SEA反复刺激使 T细胞处于一低反应状态 ,与活化组相比 ,其 DNA合成能力明显下降 ,IL - 2分泌显著减少 ,静息一段时间后 ,其增殖能力慢慢恢复。结论超抗原 SEA多次刺激诱导 SEA反应性 T细胞处于失能状态。

医学本科《医学免疫学》双语教学的探讨

免疫学专业知识抽象，未知领域很多，发展迅速。本文结合双语教学实践探讨了对医学本科生用中文和英文两种语言(即双语教学)讲授医学免疫学课程的优势，以及一些有待进一步完善的事项(英文免疫学教材的选择，授课过程中中、英文比例的确定以及该采取怎样的措施来提高教师和学生的英语水平等）。

浅谈医学免疫学硕士研究生科研能力的培养

科研能力是研究生独立从事科学研究的能力,是衡量研究生综合素质的一个很重要的标准,因此,科研能力一直是研究生培养的重点。医学免疫学是基础医学的一门重要前沿学科,同时也是一门实践性很强的学科。如何更好地展开研究、做好学术是摆在每一名医学免疫学专业研究生面前亟待解决的问题。该文对研究生文献阅读、科研实践和论文写作3个方面的能力培养进行探讨,旨在为医学免疫学研究生综合科研能力的培养提供参考。

天然CD4^+ CD25^+ Treg细胞的研究进展

天然CD4 + CD2 5 + Treg细胞在针对自身抗原和外来抗原的免疫应答中起关键控制作用 ,其缺乏或功能性的缺陷将导致多重病理性的失调。本文就近年在其产生、作用机制以及与免疫耐受的诱导关系等方面的研究进展进行了综述。

C3b_(AN42)与OVA_(257-264)融合基因的构建及表达产物生物学活性的鉴定

目的 :探讨补体系统在T细胞活化中的作用。方法 :构建补体组分C3活化片段C3b的受体结合片段C3bAN42 与OVA2 57-2 64CTL表位融合基因表达质粒 ,并对融合蛋白的表达以及生物学活性进行检测。结果 :以重组质粒转染COS 7细胞后 ,用FACS检测融合蛋白在COS 7细胞中得到表达。将转染细胞的培养上清与巨噬细胞系Ana 1共孵育 ,通过激光共聚焦显微镜扫描观察 ,发现融合蛋白可与Ana 1发生特异性结合 ,并且重组的融合蛋白被Ana 1细胞内吞后 ,可释放出表位肽OVA2 57-2 64。后者与MHC Ⅰ类分子结合后 ,以OVA2 57-2 64 MHC Ⅰ类分子复合物的形式被交叉呈递于Ana 1细胞的表面。结论 :C3bAN42 与OVA2 57-2 64CTL表位融合基因在真核细胞中能正确表达 。

加强军队与地方医科大学联合培养地方研究生的几点思考

军队医科大学的地方研究生培养质量直接影响军队与地方联合培养基地的发展和军队医科大学科研任务的顺利完成。该文就目前我国军队与地方医科大学建立联合基地培养地方研究生的生源结构、师资队伍、科研训练与管理及评价等方面存在的问题进行分析,并提出解决问题的思路来进一步完善联合培养模式,以期促进军队和地方医科院校研究生教育的共同发展。

CTLA-4在超抗原诱导T细胞无能中的作用研究(英文)

目的 探讨CTLA 4对T细胞无能的诱导作用。方法 通过使用超抗原SEA作为一种无能诱导剂 ,建立体外无能模型 ,检测了无能T细胞在受到SEA的再次刺激时其膜分子CD2 8和CTLA 4的表达。结果 与活化T细胞相比 ,无能T细胞在免疫应答的后期阶段表面表达高水平的CTLA 4分子 ,而CD2 8的表达则只较活化组T细胞稍高一些。结论 CTLA

CTLA-4的研究进展

CTLA 4作为一T细胞活化的负性调节分子 ,在自身免疫性疾病和异种移植排斥过程中起着重要的作用 ,因而受到广泛的注意 ,它不但与Th1 Th2的分化有关 ,还参与T细胞无能的诱导过程 ,其对T细胞活化的抑制作用与其结构功能有着密切的关系。

T细胞克隆失能机制的研究进展

T细胞克隆失能是T细胞产生免疫耐受的主要机制之一 ,近几年来一直是免疫学研究者关注的热点。本文综述了诱导T细胞克隆失能的几种实验模型 ,相关分子机制研究进展和共刺激信号对克隆失能的影响 。

脱脂棉及尼龙棉柱分离纯化T淋巴细胞的比较研究

目的 建立脱脂棉柱纯化人外周血T淋巴细胞的方法 ,并与尼龙棉柱分离法进行比较。方法 密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,通过玻璃器皿黏附的方法去除其中的单核巨噬细胞 ,再分别以脱脂棉柱或尼龙棉柱纯化T淋巴细胞。纯化的T淋巴细胞经流式细胞仪检测T淋巴细胞纯度 ,台盼蓝排斥实验检测纯化T细胞活力。结果 脱脂棉及尼龙棉柱滤过法对纯化T细胞的活力均无影响。