采用实时荧光定量PCR法检测大曲中的3种高温放线菌

建立实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法对大曲中3种高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris、T.intermedius和T.daqus)进行特异性定量检测。根据T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus全基因组中特异性单拷贝核心基因recA、mdH、gyrA为参考序列分别设计了一对可扩增278、233、291 bp片段的引物;经特异性、有效性、准确性实验显示,在常见的13种白酒酿造微生物中,引物TV、TI、TD分别可特异性检测T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus,检测范围为2.82~8.82 lg copies/μL,加标回收率95%~105%。进一步对大曲发酵过程样品检测,结果显示,T.vulgaris含量在呈现波动趋势,在第5天达到最高,为(6.06±0.02)lg copies/g;T.intermedius含量呈现先上升后下降的趋势,在第7天达到最高,为(6.33±0.13)lg copies/g;T.daqus含量在0~12 d呈现波动趋势,在12~14 d下降,随后一直上升,发酵结束时含量最高,为(7.62±0.02)lg copies/g。该研究建立的RT-qPCR方法可对大曲发酵过程中3种高温放线菌进行特异性鉴定和快速定量,为进一步监测高温放线菌在白酒酿造过程中的功能提供了方法。

三种单萜对皿式培养樟芝三萜合成的影响

三萜是药食用真菌樟芝野生子实体中主要的活性成分之一,但是人工皿式培养的樟芝菌丝体中三萜含量较低。为了提高樟芝皿式培养三萜的产量,该研究在培养基中添加了3种单萜作为刺激因子。通过添加浓度的优化,得到了对生物量具有显著促进作用的添加方式是0.08 g/L的α-松油醇;对三萜产率具有显著促进作用的最佳添加方式为0.16 g/L的松油烯、0.08 g/L的α-松油醇以及0.12 g/L的4-萜烯醇,三萜产率分别较对照组提高了55.68%、50.39%和28.56%;且在添加0.16 g/L的松油烯时,有两种三萜(去氢硫色多孔菌酸和去氢齿孔菌酸)在樟芝菌丝体中的含量显著升高,分别较对照组提高了5.56倍和0.96倍,在添加0.08 g/L的α-松油醇时,去氢硫色多孔菌酸的含量显著升高,较对照组提高了3.20倍。该研究发现了3种可以促进樟芝皿式培养三萜生成的单萜,为樟芝皿式培养提供了新的思路。

壳寡糖对过氧化氢诱导肝细胞损伤的改善作用及机制

目的:评估壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导肝细胞损伤的改善作用。方法:通过H_(2)O_(2)建立L-02细胞氧化应激损伤模型,对活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位以及IL-6、TNF-α等病程相关基因水平进行分析。结果:COS可改善H_(2)O_(2)损伤L-02细胞的增殖活力、抑制线粒体膜电位下降和ROS水平升高(P<0.05)。单细胞纳米生化分析结果显示,COS处理可以平衡H_(2)O_(2)损伤L-02细胞的ROS水平波动幅度。另外,COS改善了炎症(IL-6、TNF-α)、凋亡(Caspase 3、Caspase 9、Bax、Bcl-2)及氧化应激(Nrf2、HO-1)相关基因转录水平,表现出抗凋亡和抗氧化应激的作用。结论:COS对H_(2)O_(2)损伤的L-02细胞具有保护作用,本实验可为COS的应用开发提供理论参考。

玉米芯木聚糖硫酸酯抗凝血活性及其机制的研究

采用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和凝血酶原时间(PT)检测了玉米芯木聚糖硫酸酯(wisX-SB)的抗凝活性,结果表明wisX-SB能明显延长APTT和TT,而不影响PT,提示wisX-SB是通过内源性和/或共同途径发挥抗凝血作用的。采用发色底物法及纤维蛋白原转化实验分别考察了wisX-SB对凝血酶及纤维蛋白原的作用,结果提示wisX-SB的抗凝机制包括:直接抑制纤维蛋白原的转化;通过增强抗凝血酶III(AT-III)的活性,抑制凝血酶活性,从而达到抗凝目的。较低浓度时以前者为主,较高浓度下两者皆起作用。

功能寡糖产业的现状与发展

本文通过分析国内外寡糖产业的市场容量、几种主要寡糖产品的市场份额、寡糖产品应用的主要产业领域以及我国经济实力的发展与下游产业的发展趋势 ,说明了功能性寡糖产业具有极大的发展前途 。

镇江香醋醋酸发酵过程中细菌群落组成分析

用免培养法对镇江恒顺香醋醋酸发酵过程中醋醅的细菌群落的结构进行了分析。从醋醅样品中获得的总DNA经PCR扩增建立了16S rDNA克隆文库,共获得96个阳性克隆并进行了测序,以代表性序列构建了系统发育树。通过序列分析将它们分为16个OUTs,其中5个OUTs属于Lactobacillus属、2个属于Acetobacter属、1个属于Gluconacetobacter属、2个属于Staphylococcus属、2个属于Enterobacter属、2个属于Pseudomonas属、1个属于Flavobacterium属和1个Sinorhizobium属。

响应曲面法优化灰树花水溶性多糖提取工艺的研究

在单因素试验的基础上,利用响应曲面法对灰树花多糖提取工艺参数进行优化研究。响应面分析结果表明,提取温度、提取时间以及水料比与响应值灰树花多糖得率存在显著的相关性,通过典型性分析得到优化灰树花多糖提取条件:提取温度为89.7℃;时间2.48h;以及水料比31.1:1,提取两次,在此条件下灰树花多糖提取得理论值达到10.62%,验证试验条件下实际最大多糖得率为(10.13±0.7)%。

运用多元数学模型优化灰树花发酵培养基组成的研究

利用BoxBehnken3×3设计优化了影响灰树花深层发酵菌丝体和胞外多糖生产的主要培养基组成,碳源(葡萄糖)、氮源(蛋白胨)和无机盐(KH2PO4),响应面分析结果表明,各因素及其交互作用对响应值灰树花菌丝体和胞外多糖产量均存在显著的相关性。通过典型性分析,获得最大菌丝体量(17.61g/L)时,培养基组成为:葡萄糖45.2g/L,KH2PO42.97g/L,蛋白胨6.58g/L,MgSO4·7H2O1g/L和玉米浆15g/L;而获得最佳胞外多糖量(1.326g/L)时的培养基组成为:葡萄糖58.6g/L,KH2PO44.06g/L,蛋白胨3.79g/L,MgSO4·7H2O1g/L和玉米浆15g/L。与其他实验组的结果相比,优化后的灰树花菌丝体与胞外多糖的量都有较大的增加。15L发酵罐扩大培养的结果表明,在优化培养基组成的条件下,扩大培养后的菌丝体产量最大值达22.50g/L。

微生物分子生态学技术在传统发酵食品行业中的应用研究进展

微生物分子生态学作为分子生物学与微生物生态学交叉而形成的学科,在传统发酵食品行业中的应用还处于起步阶段。本文从分子生态学实验技术角度,综述了目前一些传统发酵食品行业生产过程中微生物群落结构、多样性及其功能相关性的研究进展,并探讨了分子微生态学技术在传统发酵行业的应用前景。

六味地黄汤对雄性大鼠生殖系统的影响

目的 :研究六味地黄汤对雄性大鼠生殖系统的作用。方法 :用醋酸棉酚建造大鼠生精障碍模型后 ,用六味地黄汤(分煎与合煎 )ig治疗 ,以市售品成药和甲基睾酮作为对照和阳性对照 ,计数各实验组大鼠的精子数量 ,考察各实验组大鼠精子的质量 ,观察睾丸曲细精管的结构 ,检测血清NO、T、FSH、LH水平。结果 :六味地黄汤治疗组大鼠的精子数量与模型组有显著差异 (P <0 .0 1 ) ,并高于阳性对照组 ;精子活力也显著优于模型组 ;模型组大鼠血清的NO、T均低于六味地黄汤治疗组。结论 :六味地黄汤可显著地促进生精障碍大鼠的精子发生 ,同时可显著提高精子的质量 ;对损伤的睾丸曲细精管有较好的修复作用 ;可提高模型大鼠血清的NO、LH和T水平 。

乙醇提取樟芝菌粉三萜类化合物的动力学研究

以Fick扩散第二定律为基础,建立樟芝菌粉三萜提取过程的动力学方程,并由此推算出提取的速率常数、活化能、相对萃余率、半衰期,以及内扩散系数等动力学函数值。结果表明:所得提取模型能较好地描述樟芝菌粉三萜类化合物提取的动态过程。樟芝菌粉三萜类化合物提取过程的动力学符合一级动力学方程,为内扩散控制动力学。本研究可为樟芝三萜类化合物提取的工艺设计及操作条件的选择提供有价值的理论依据。

维生素对谷氨酸棒杆菌SYPS-062直接发酵合成L-丝氨酸的影响

研究了VB1,生物素,VB6,VB2,叶酸和VB12对一株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)SYPS-062直接利用糖质原料发酵生产L-丝氨酸的影响,并且初步分析了这几种维生素对菌株SYPS-062发酵积累L-丝氨酸的调控机制。添加一定量的生物素,VB1和VB6表现出对L-丝氨酸积累分别为35%,28%和11%的促进;添加VB2实现了L-丝氨酸和生物量的等幅提高;而叶酸和VB12则通过促进菌株SYPS-062中1C单元循环的效率使L-丝氨酸的积累量分别提高了39%和82%,并且实现了产物转化率(YP/S)及单位细胞产率(YP/X)的显著提高。将6种维生素在其分别的最优浓度下复配,添加在发酵培养基中,结果发现发酵周期有6h左右的缩短,并且达到的最大生物量及L-丝氨酸的积累分别为11g/L和9.0g/L。

搅拌转速和通气量对灰树花深层发酵培养的影响

采用15 L搅拌式发酵罐研究灰树花的扩大培养条件,主要考察了搅拌转速和通气量对灰树花菌丝量、胞外多糖产率、溶氧、菌丝形态以及发酵液粘度的影响.研究结果表明搅拌转速和通气量能显著影响灰树花的生长,并且通过对灰树花菌丝球的大小、形态以及胞外多糖的分泌影响发酵液的粘度.并得出较为优化的培养条件为:温度25℃,通气量0.75 vvm,搅拌转速80 r/min,装液量60%;在此条件下,发酵10 d后,灰树花菌丝体最大得率为22.95 g/L,胞外多糖的得率为1.521 g/L。

松口蘑发酵菌丝体糖蛋白MTS03对人乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖抑制作用研究

目的研究松口蘑发酵菌丝体糖蛋白MTS03的理化性质及抗肿瘤作用。方法采用SDS-PAGE鉴定MTS03的纯度及相对分子质量,氨基酸自动分析仪分析其中的氨基酸组成;MTT法研究糖蛋白MTS03体外对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制率,同时考察MTS03对人正常肝细胞L-02的杀伤率,评价其安全性。结果SDS-PAGE电泳鉴定为单一组分,测定其相对分子质量约为2.37×10~4,经氨基酸自动分析仪分析含有17种氨基酸;MTS03对MCF-7具有直接的细胞毒作用,在一定的浓度范围内呈现量效和时效关系,MTS03对MCF-7作用24,48,72h的IC_(50)分别为25.81,12.46,8.86mg·L^(-1),而对正常肝细胞的IC_(50)分别为1366.49,190.60,95.58mg·L^(-1),对MCF-7的治疗指数TI分别为54.16,18.74,12.25。结论MTS03对于体外培养的乳腺癌细胞具有良好的直接杀伤作用,而对正常肝细胞的毒性较小,可能是一种高效低毒的生物活性物质。

滇结香花对α葡萄糖苷酶的抑制活性

对产于西藏的滇结香花选取极性大小不同的正己烷、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水依次进行提取;建立体外α葡萄糖苷酶抑制模型,对提取物进行活性评价;选择活性较高的组分进行小鼠急性毒性及对高血糖模型小鼠降糖作用评价。结果显示,滇结香花水提物(EMW,1 000 mg/kg)对酵母和大鼠来源的α-葡萄糖苷酶均具有较好的体外抑制活性,活性高于阳性对照阿卡波糖。EMW并未发现明显的毒副作用,EMW中高剂量(每千克体重用药量)200 mg/kg和300 mg/kg给药对小鼠高血糖模型具有良好的降血糖作用。研究表明,EMW具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制及体内降糖活性。

六味地黄汤抑制大鼠生精细胞凋亡及其促进精子发生

用醋酸棉酚建造大鼠生精障碍模型,用六味地黄汤灌胃治疗,以市售六味地黄丸和甲基睾酮分别为对照和阳性对照,TUNEL法检测实验各组大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,计数实验各组大鼠精子数量,考察实验各组大鼠精子的质量.结果表明,六味地黄汤各治疗组、阳性对照组大鼠的精子数量、精子爬高均与模型组有显著性差异(P<0.01),各治疗组大鼠的精子质量(活力)也显著优于模型组;各实验组大鼠睾丸凋亡的生精细胞明显少于模型组.由此显示,六味地黄汤复方可显著抑制大鼠睾丸生精细胞的凋亡,对生精障碍大鼠有显著的促进生精作用,并可显著提高大鼠精子的质量.

灰树花菌丝体抗肿瘤糖肽GFPS1b结构的研究

以体外抑制肿瘤细胞增殖的活性作为筛选导向,从灰树花深层发酵培养菌丝体中提取、分离纯化得到一酸性糖肽GFPS1b.HPGPC法测得其重均相对分子质量为21 000.蛋白质质量分数16.60%,糖质量分数为81.32%。利用化学方法(单糖组成分析、部分酸水解、甲基化分析)和仪器方法(GC、GC-MS、红外吸收光谱、核磁共振)分析GFPS1b的糖链结构,结果表明其单糖组成主要有Glc、Gal、Ara和少量的糖醛酸,其糖链主链由两个α-D-Glc(1→3)、-αD-Gal(1→4)、-αD-Glc(1→3,6)和-αD-Gal(1→6)组成的,其中葡萄糖基的6位发生取代,取代侧链主要为-αL-Ara-(1→4)--αD-Glc(1→。可以认为GFPS1b为一新糖肽。

六味地黄汤对生精障碍模型大鼠精子及其血清NO的影响

目的:观察六味地黄汤对生精障碍模型大鼠促进生精的作用及其对大鼠血清一氧化氮(NO)的影响。方法:用醋酸棉酚建造Wistar雄性大鼠生精障碍模型后,用分煎和合煎的六味地黄汤灌胃给药治疗,以市售六味地黄丸和甲基睾酮为对照,计数各组精子数量,观察各组精子的活力,测定大鼠血清NO水平。结果:模型组大鼠的精子数量与六味地黄汤分煎组、六味地黄汤合煎组、市售六味地黄丸对照组、西药对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);各治疗组、对照组的精子活力也显著优于模型组。模型组大鼠血清NO水平与各组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);血清NO水平和精子数量、精子质量基本成正相关。结论:六味地黄汤对生精障碍大鼠有显著的促生精作用,同时可升高大鼠血清NO水平,显著提高大鼠精子的质量。