双波长高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E的含量

目的；建立双波长高效液相色谱同时测定人血清中维生素A、E（VitA、VitE）浓度的方法。方法：移取血清，加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷，旋涡混合、离心，分离正己烷层氮气吹干，残渣用流动相溶解后进样。流动相为甲醇-水（92：8）；流速1mL·min^-1；柱温30℃，紫外检测器在325nm和292nm检测VitA和VitE。结果：VitA保留时间为2．63min。浓度线性范围50～800μg·L^-1，r^2=0．9995，平均回收率为97．3％（RSD〈5%），最低捡出量0．4ng（S／N〉3）；VitE保留时间为7．61min，浓度线性范围2～16mg·L^-1，r^2=0．9999，平均回收率为96．2％（RSD〈6％），最低检出量2豫（S／，N〉3）。40例健康成人血清VitA平均值为（389．0±138．0）μg·L^-1。VitE平均值为（10．2±2．5）mg·L^-1。结论：双波长HPIC检测血清中VitA和VitE浓度的方法灵敏度高，回收率和重现性良好，操作快速、简便。

高效液相色谱法分析甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤

目的：建立高效液相色谱法测定甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤的方法。方法：待测样品加入10％三氯醋酸溶液沉淀蛋白，旋涡混合、离心，取上清液进样。XTerraTM RP18（3．9mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇和磷酸盐缓冲液（7．5mmol·L^-1，pH7．3）梯度洗脱；流速1mL·min^-1；样品温度15℃；柱温30℃；紫外检测器，检测波长309nm。结果：五聚谷氨酸甲氨蝶呤、四聚谷氨酸甲氨蝶呤、三聚谷氨酸甲氨蝶呤、二聚谷氨酸甲氨蝶呤、甲氨蝶呤的保留时间分别为3．194，4．147，5．488，6．738，8．063min;线性范围1．5625～400μmol·L^-1，甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤的回收率为89．01％～105．54％（RSD〈C5％）；最低检测浓度0．01μmol·L^-1（S／N〉3），9min内可完成5种组分的分析。结论：该方法灵敏度高，结果准确，分析快速、简便。

深圳市不明原因成人脱发患者发中微量元素分析

目的 :分析深圳市不明原因成人脱发患者头发中微量元素含量与脱发的关系。方法 :采用原子吸收光谱法 ,对 5 7名不明原因脱发患者和 4 8名体检正常的健康成人的头发进行微量元素含量的测定 ,并对两组数据进行统计处理。结果 :脱发患者发中铜、铁含量及Cu/Zn比值明显低于健康成人组 ,而铅、锌、锰、钙、镁的含量无明显差异。结论 :这类患者铜 /锌比值的降低主要是由于铜低造成 ,铜。

乳腺癌患者外周血、淋巴结、癌组织中免疫细胞构成分析

目的分析乳腺癌患者外周血、淋巴结、癌组织免疫细胞构成。方法20例健康志愿者及40例乳腺癌患者外周血、18例乳腺癌患者反应性增生淋巴结及40例乳腺癌肿瘤组织细胞悬液用于流式细胞术检测,分析其单个核细胞群中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD56+细胞百分比及CD34-Lin- HLA-DR+细胞群中细胞CD11c+CD123-(pDC1)、CD11c-CD123+(pDC2)百分比,计算CD4/CD8比值以及DC1/DC2比值。结果乳腺癌患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD56+细胞百分比、CD4/CD8比值与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),pDC1/pDC2比值显著低于对照组(P<0.05);反应性增生淋巴结组织亚群构成为:CD3+(54.5±6.8)%、CD4+(37.8±4.9)%、CD8+(13.1±5.5)%、CD19+(5.9±3.4)%、CD56+(1.9±0.4)%、CD4/CD8为(3.6±1.3),DC1/DC2为(3.6±1.3)%。无法取得正常组织中的值,未作对照分析。瘤组织中CD3+(62.4±17.5)%、CD4+(32.0±8.2)%、CD8+(26.9±10.5)%、CD4/CD8(1.3±0.4)、CD19+(2.2±2.0)%、CD56+(2.3±1.6)%,DC数不足以分析。结论乳腺癌患者外周血、淋巴结、肿瘤组织中免疫细胞构成,与对照组比较表现为抗肿瘤特征,循环中pDC1/pDC2比值减低可能与DC1在引流淋巴结中分布增加有关。

深圳市孕妇血清微量元素分析

目的 :探讨深圳市孕妇在不同孕期血清微量元素变化规律。方法 :按孕周将 6 4 8名孕妇分为早孕 (小于16周 )、中孕 (16～ 2 8周 )、晚孕 (大于 2 8周 ) 3个实验组 ,132名正常体检妇女作为对照组 ,采用原子吸收光谱法测定孕妇及对照组妇女血清微量元素含量 ,比较实验组及对照组血清微量元素值。结果 :孕妇在早孕期血清铜含量及铜 /锌比值显著升高 ,并随孕周增加进一步升高 ;血清锌、钙、镁含量则显著下降 ,并随孕周增加进一步降低 ;血清铁含量在早孕期与对照组比较无显著差异 ,而从中孕期开始显著下降。随着孕周的增加 ,缺乏锌、铁、钙、镁的孕妇比例也升高。结论 :深圳市孕妇早孕期起即应注意锌、钙、镁元素的补充 ,中孕期起应注意加强铁营养的补充。

反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A含量

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A的方法,以评价人体维生素A营养状况。方法移取血清,加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷进行萃取,旋涡混合、离心后,移取正己烷层氮气吹干,残渣用甲醇溶解后进样。色谱条件:XTerraTM RP18色谱柱,5μm,3.9 nm×150 mn,柱温:30℃,流动相为甲醇: 水(92:8);流速:1 mL/min;检测波长325nm。结果维生素A在25～800ng/mL浓度范围呈线性,R2=0.9993, 平均回收率为95.2%,RSD<7%,全部操作可在30min内完成。结论改进的检测人血清中维生素A含量的方法, 快速、灵敏、准确,简便易行。

深圳地区624名产后42天产妇微量元素营养状况评价

目的分析产妇产后血清微量元素含量,评价深圳市产妇微量元素营养状况。方法采用原子吸收光谱法测定624名在深圳市第二人民医院保健的产妇产后42d血清(实验组)及115名体检妇女血清(对照组)微量元素的含量,比较两组妇女的微量元素营养状况。结果实验组血清铜含量:(16.75±3.08)μmol/L,铜/锌比值:1.58±0.40,均显著高于对照组;血清锌、铁含量、总铁结合力、转铁蛋白饱和度分别为:(10.94±1.96),(9.65±3.70),(58.83±6.16)μmol/L,(16.29±5.57)%均明显低于对照组;缺铁、缺锌产妇比例分别为50.0%、8.2%;产妇血清钙、镁含量分别为:(2.31±0.15),(0.94±0.08)mmol/L,与对照组比较差异无显著性意义。结论深圳市产妇普遍缺乏铁锌,应加强铁、锌营养补充。

药源性铅中毒病例分析

铅中毒可导致腹痛或贫血,无明确接触史的铅中毒易被误诊。该病例患者因长期服用铅含量超标的治疗乙肝的偏方中药丸导致铅中毒,出现腹痛和贫血症状,又被作为消化道或血液系统疾病考虑而延误了确诊。提示临床医生询问病情时应详细了解患者的服药史,提高对药源性铅中毒的警惕性。同时,患者应尽量在正规医院就诊,不能盲目相信偏方,避免类似遭遇。在驱铅治疗过程中,患者的尿锌、铁排出增多,血清铜、锌、铁含量降低。因此,驱铅治疗时监测患者血清微量元素的变化并给予相应损失元素的补充是必要的。

改性医用胶为纳米骨胶的体外实验

背景：目前α-氰基丙烯酸烷基酯类生物胶可应用于临床许多方面,由于胶本身存在一些缺点,使其在骨科的应用受到限制。目的：对普通医用胶进行改性研究,研制出纳米骨胶并检测其细胞毒性和力学性能。方法：直接在纳米骨胶和普通医用胶上种植兔骨髓基质干细胞细胞,通过倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在胶上生长情况。用胶的浸泡液培养细胞,在0,6,12,18,24h时间点和1~7d每天进行细胞活性检测。用两种胶将标准PVC管粘合,比较两种胶的粘合强度,并在不同环境下比较胶凝固时间。结果与结论：经3次换液后细胞可在纳米骨胶和普通医用胶上生长,两种胶对细胞都有一定毒性,但毒性并无明显差别;纳米骨胶的力学强度明显高于普通医用胶,且凝固时间明显快于普通胶。提示经改性后的纳米骨胶细胞毒性不高于普通胶,但力学强度和凝固时间前者明显优于后者,且前者具有促进成骨的作用。

灾害脆弱性分析在医院制定应急预案中的作用

目的通过灾害脆弱性分析了解医院应急管理需求,为提出针对性预防和应急管理措施提供依据。方法利用风险评估矩阵对医院风险事件进行灾害脆弱性分析,辨识潜在灾害事件及其相应风险值,明确需应对灾害事件重点,及时完善修订相应应急预案。结果通过灾害脆弱性分析,重新确定医院前5位灾害脆弱性风险事件种类,找出尚缺漏的4类风险事件并制订相应应急预案。结论灾害脆弱性分析是评估和预防灾害事件的重要工具,对于医院增强应急管理能力起到重要的作用。

索他洛尔片在健康人体内的药动学研究

目的建立人血浆中索他洛尔的高效液相色谱测定方法,用于研究索他洛尔片在健康人体内的药动学。方法以0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH值为3.0)-乙腈(90∶10)为流动相,用AgilentTC-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱,采用荧光检测,Ex=235nm,Em=313nm。结果索他洛尔线性范围为0.02～2.50μg.mL-1(r=0.9995),平均回收率为102.0%,日内RSD≤3.4%,日间RSD≤7.3%。12名受试者单次服用160mg索他洛尔片后,体内呈一室模型药动学特征。结论分析方法简单、快速、准确、灵敏度高,适用于索他洛尔的药动学及生物利用度研究。

婴幼儿铅高负荷与钙铁铜离子关系研究

对深圳市４８８名婴幼儿头发铅和钙铁铜含量测定结果表明：出生１～３个月婴儿发铅和发钙含量最高，以后随年龄增长而下降，但仍显著高于其他城市，发铁含量在整个婴幼期变化不大，发铜高峰期却在出生４个月～１２个月。铅负荷与钙之间有良好正相关关系（ｒ＝０．６９２１Ｐ＜０．００１），而与铁、铜之间无联系。提示：该市婴幼儿铅高负荷源于母体和生活环境，持续长时间发铅高与钙大量流失的关系。

柴胡疏肝散含药血清蛋白质组学的初步研究

目的利用蛋白质组学的思维,通过实验来证明中药复方多靶点、多环节、多层次的整体性调节方式的作用机理与西药安理申单一靶点的作用机制存在差别,为进一步研究中药复方的作用机制奠定基础。方法通过利用蛋白芯片质谱仪(SELDI)对柴胡疏肝散含药血清和安理申含药血清进行检测,使柴胡疏肝散含药血清、安理申含药血清和空白组含药血清之间飞行时间质谱柱状图之间对比,以其检测到差异蛋白,来验证中药复方和西药的作用机理存在的差异。结果柴胡疏肝散含药血清有7个特有蛋白表达峰;安理申含药血清有14个特有蛋白表达峰。结论柴胡疏肝散含药血清和安理申含药血清飞行质谱图存在着显著差异,因此说明两者之间对机体的药理作用机理存在差异。

TGF-β1诱导分化的兔BMSCs复合左旋聚乳酸＼β-磷酸三钙多孔支架材料体外研究实验

目的研究体外培养rBMSCs经TGF-β1诱导分化的软骨细胞复合左旋聚乳酸\β-磷酸三钙(PLLA\β-TCP)多孔支架材料体外构建仿生人工软骨。方法低温挤出成形法制备成PLLA\β-TCP复合多孔支架材料,体外分离、培养rBMSCs至第3代,利用含有TGF-β1特殊诱导系统诱导其向软骨细胞分化,诱导14d后用甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化进行鉴定后与PLLA\β-TCP多孔支架材料体外复合培养,并取第7、14、21d细胞复合材料进行电镜扫描观察细胞贴附、生长、增殖状况,同时消化收集贴附支架第7、14、21d的细胞,行RT-PCR检测分化软骨细胞相关基因aggrecan、Col2A1在mRNA水平的表达,Western-bolt检测II型胶原蛋白的分泌情况。结果 rBMSCs经诱导后向软骨细胞分化,甲苯胺蓝染色见分化软骨细胞分泌糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG),Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性;电镜扫描见分化细胞在支架材料分布均匀,黏附良好;RT-PCR及Western-bolt检测示7、14、21daggrecan、Col2A1在mRNA水平、II型胶原蛋白均有不同程度表达。结论利用含有TGF-β1特殊诱导系统诱导rBMSCs分化的软骨细胞复合到PLLA\β-TCP多孔支架材料上,细胞生长良好,并能正常分泌软骨细胞特异细胞外基质,体外成功构建了组织工程软骨。

乳腺癌患者外周血树突状细胞亚群及其HLA-DR表达的变化

目的:探讨乳腺癌患者外周血树突状细胞(DC)亚群和其HLA-DR表达变化及血浆中DC相关细胞因子水平的变化。方法:4色荧光流式细胞术分析57例乳腺癌术前、术后1周、术后6个月的患者及正常对照的外周血DC前体细胞pDC1/pDC2(CD11c+CD123-/CD11c-CD123+)比值及其HLA-DR的表达;酶联免疫吸附法检测血浆细胞因子白细胞介素-12p40(IL-12p40)、白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果:57例乳腺癌患者中,2例Ⅲ期、4例Ⅳ期外周血pDC缺乏,其余患者Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期外周血pDC1/pDC2比值分别为1.62±0.59、1.41±0.63、0.91±0.32、0.81±0.29,均显著低于对照组(1.94±0.44,P<0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者术后1周pDC1/pDC2比值为1.71±0.47、1.52±0.54、1.04±0.36,与术前比较均无显著差异(P>0.05),但显著低于对照组(P<0.05);术后6个月pDC1/pDC2比值分别为1.92±0.72、1.63±0.65、1.28±0.34,与术前比较,均有显著提高(P<0.05),但与对照组比较,仅Ⅰ期患者恢复正常(P>0.05),Ⅱ、Ⅲ期患者仍然显著降低(P<0.05)。乳腺癌患者pDC亚群HLA-DR表达以及血浆中IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4水平及IL-12p40/IL-10、IFN-γ/IL-4比值与对照组比较均无显著差异(P>0.05)。结论:Ⅰ-Ⅳ期乳腺癌患者外周血pDC1/pDC2比值降低,部分Ⅲ、Ⅳ期患者外周血pDC缺乏。pDC的HLA-DR表达及DC分泌相关细胞因子的能力没有同步变异。术后患者pDC亚群Ⅱ、Ⅲ期明显改善,Ⅰ期恢复正常。

多发性骨髓瘤患者外周血CD4^+T淋巴细胞亚群特点研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群特点。方法用流式细胞术检测30例MM初诊患者、20例治疗后患者及10名健康志愿者(对照组)外周血CD4+T淋巴细胞亚群,比较分析3组之间调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞(Th)1、Th17比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值。结果初诊MM患者外周血Th17比例明显高于对照组,Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值明显低于对照组。治疗后患者Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值较治疗前明显提高,Th1及CD4+CD25+细胞比例基本恢复至对照组水平,CD4+Foxp3+细胞比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值仍明显低于对照组。结论 MM患者外周血Th17细胞在初始T细胞的分化过程中取得了极化优势。治疗后Th17细胞极化优势现象明显改善,Th17细胞可能参与了MM的疾病进程。

反相高效液相色谱法测定血清中维生素E的含量

目的：建立反相高效液相色谱（RPHPLA）测定人血清中维生素E（VE）浓度的方法。方法：移取血清，加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷，旋涡混合、离心，分离正己烷层，氮气吹干，残渣用流动相溶解后进样。采用XTerra^Tm RP18色谱柱（5μm，3．9×150mm），流动相为甲醇：水（92：8，v／v）；流速1mE／min；柱温30℃；检测波长292nm。结果：VE的保留时间为7．61min，浓度在2-16μg／ml范围内线性关系良好（r^2=0．9999，n=5），平均回收率为95．6％，RSD〈6％，最低检测量2ng（S／N〉3）。40例健康成人血清VE平均值为10．20±2．51μg／ml。结论：反相高效液相色谱检测血清VE浓度的方法灵敏度高，回收率和重现性良好．操作快速、简便．这对测定血清中其它维生素含量具有指导意义。

双重滤过血浆置换治疗难治性重症肌无力的研究

目的探讨多次双重滤过血浆置换治疗难治性重症肌无力的方法、临床疗效和应用价值。方法23例难治性重症肌无力患者全部采用双重滤过血浆置换法治疗4次,3～4d置换1次,置换液为20%白蛋白50ml加706代血浆1000ml。治疗前及每次置换完成后第3天抽空腹血查乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab),并根据临床绝对评分法评分和相对评分法判断临床疗效。结果痊愈1例,基本痊愈2例,显效9例,好转8例,无效3例,总有效率为86.96%。结论多次双重滤过血浆置换能有效降低血液中较高的AchR-Ab水平,对治疗难治性重症肌无力具有重要的临床价值。

柴胡疏肝散含药血清对NG108-15神经元多靶点干预的药物化学研究

目的:探索中药复方柴胡疏肝散配伍对神经元多靶点作用的物质基础和化学机制。方法:采用高效液相色谱对该复方含药血清、水煎剂和含药血清对NG108-15神经元细胞株干预后细胞内药物成分进行检测。结果:在血清和NG108-15神经元细胞中发现多种柴胡疏肝散水煎剂原型成分和移形成分。结论:实验证明柴胡疏肝散含药血清进入NG108-15细胞内部的药物有效成分有多种,符合霰弹靶点理论。

应用蛋白质芯片技术筛选阿尔茨海默病血清标志物

目的用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片检测阿尔茨海默病(AD)患者血清蛋白质指纹图谱,探讨诊断模型在AD诊断中的临床应用价值。方法用SELDI-TOF-MS技术和CM10蛋白质芯片检测45例患者AD和60例健康老人的血清蛋白质指纹图谱,并建立诊断模型。结果筛选出11个有明显表达差异的蛋白质,其中以质荷比(m/z)分别为4604.2、7775.7和9200.6的3个蛋白质建立的诊断模型对AD检测的灵敏度为88.9%(40/45),特异性为85.0%(51/60),总准确率为86.67%(91/105)。结论 SELDI-TOF-MS对AD诊断具有较高的敏感性和特异性,在AD的诊断及标志物筛选等方面具有较好的诊断价值。