ERα特异性抑制剂MPP降低小鼠2-细胞胚G1/S期过渡相关因子Nanog、cyclin D1和cyclin E水平

目的观察雌激素受体(ERa)特异性抑制剂甲基哌啶吡唑(methyl-piperidino-pyrazole,MPP)对小鼠2-细胞胚G1/S期过渡相关因子Nanog、cyclin D1和cyclin E表达水平的影响,阐明ERa对小鼠2-细胞胚G1/S期过渡的作用,为进一步探讨ERa在小鼠植入前胚合子基因组激活中的作用机制提供理论依据。方法收集昆明雌性小鼠与雄性小鼠交配所得的受精卵,分别置于无MPP的培养液和含20mmol/L MPP的培养液中培养,获取体外发育的2-细胞胚,采用免疫荧光染色技术检测细胞内Nanog、cyclin D1和cyclin E水平。结果免疫荧光染色结果显示,含20mmol/L MPP培养液培养的受精卵其体外发育2-细胞胚内Nanog、cyclin D1和cyclin E免疫反应性明显降低。结论 ERa可通过调控小鼠2-细胞胚内Nanog、cyclin D1和cyclin E水平,影响细胞从G1期到S期的过渡。

FGF10对小鼠植入前胚体外发育及2-细胞胚内G蛋白偶联受体30表达的影响

目的观察成纤维细胞生长因子10(FGF10)对小鼠受精卵体外发育和2-细胞胚内G蛋白偶联受体30(GPR30)水平的影响,为进一步探讨FGF10在小鼠植入前胚体外发育中的作用提供依据。方法以M16培养液为对照组,M16中分别添加不同浓度的FGF10为实验组,收集昆明(KM)雌性小鼠与KM雄性小鼠交配所得的受精卵,分别观察各组受精卵体外发育情况。收集KM小鼠受精卵,分别置于M16和含不同浓度FGF10的M16培养液中培养,获取体外发育的2-细胞胚,采用免疫荧光染色结合激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内GPR30水平。结果添加FGF10实验组发育到4-细胞胚、桑葚胚和囊胚的比率明显高于对照组,其中以添加浓度为10ng/ml的FGF10实验组的效果最明显。免疫荧光染色结果显示,10ng/ml的FGF10实验组体外发育2-细胞胚内GPR30免疫荧光染色强度明显高于对照组。结论 FGF10可促进KM小鼠植入前胚的体外发育,其作用可能与上调2-细胞胚内GPR30有关。

雌激素受体α抑制剂MPP对小鼠合子型基因组激活的影响可能与S期启动相关

目的观察雌激素受体α(ERα)特异性抑制剂甲基哌啶吡唑(Methyl-Piperidino-Pyrazole,MPP)对小鼠早期胚胎发育的影响与合子型基因组激活(ZGA)发生的时间是否相关,并检测与小鼠ZGA密切相关的2-细胞胚DNA复制是否受MPP处理的影响,为进一步探讨ERα在小鼠ZGA过程中的作用机制提供实验基础。方法 1收集昆明小鼠1-细胞胚、2-细胞胚和4-细胞胚,以空白KSOM培养液(单纯型优化的胚胎培养基)为对照组,以KSOM中添加MPP为实验组;将各时间点收集的早胚培养3h后再移入新KSOM培养液中继续培养至囊胚阶段,并记录囊胚数;2收集昆明小鼠末期1-细胞胚,分别置于上述两组培养液中培养15h至2-细胞胚S期后期,用荧光显微镜技术检测2-细胞胚核像变化;Brd U标记法分析DNA复制情况。结果1于不同时间段经MPP 3h处理后,在1-细胞胚末期、2-细胞早期和2-细胞胚中后期,MPP处理对小鼠早胚发育具有显著的抑制作用,其阶段特异性影响与小鼠ZGA发生的时间一致。另外,MPP对2-细胞胚G1/S过渡期(36~39h)抑制明显,但是对S期中后期(39~42h)进程无显著影响。2与KSOM组相比,经MPP处理15h后,2-细胞胚核变圆;Brd U标记水平明显下降。结论MPP在小鼠早胚中的阶段性作用与ZGA有关;ERα可能通过促进S期启动来调控ZGA。

雌激素受体抑制剂对小鼠囊胚形成的影响

目的观察雌激素受体(estrogen receptor,ER)抑制剂对昆明(Kunming,KM)小鼠体外囊胚形成的影响,为进一步探讨雌激素受体在小鼠囊胚形成中的作用和机制提供实验依据。方法以空白KSOM培养液为对照组,KSOM中添加浓度为1、2、3、4、5μmol/L的ERα抑制剂MPP,以及浓度为1、10、50、100μmol/L的ERβ抑制剂PHTPP为实验组,收集KM小鼠8-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至桑葚胚和囊胚两个阶段的数目,比较各组发育到囊胚的比率。结果添加浓度为1μmol/L、2μmol/L的MPP实验组囊胚发育率分别为86.36%、86.40%,与对照组(82.26%)相比无明显差别(P>0.05),而添加浓度为3μmol/L、4μmol/L、5μmol/L的MPP实验组囊胚发育率分别为46.58%、7.50%、0,发育率显著下降(P<0.01)。添加浓度为1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L的PHTPP实验组囊胚发育率分别为82.61%、87.04%、83.98%,与对照组(82.09%)比较没有明显差异(P>0.05),而添加高浓度(100μmol/L)的PHTPP实验组囊胚发育率(51.39%)较明显下降。结论低浓度(5μmol/L)的ERα抑制剂MPP可完全抑制KM小鼠8-细胞胚体外发育到囊胚,而50μmol/L的ERβ抑制剂PHTPP对KM小鼠囊胚形成无明显影响,高浓度(100μmol/L)的PHTPP才可部分抑制囊胚形成。提示在小鼠囊胚形成中,ERα起着更为主要的作用。

多关节机器人的分散预测控制

本文提出一种对多关节机器人进行分散预测控制的方法,这种方法把分散控制的结构优点与预测控制的性能优点结合起来,以提高控制的实时性和鲁棒性。文中研究了这一分散控制的多层结构,并着重讨论了不同分散信息结构下的关连预测策略,最后以仿真实例说明了这种分散预测控制方法的有效性。

雌激素受体α抑制剂MPP在小鼠囊胚形成和滋养层干细胞中影响YAP核定位

目的研究雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)抑制剂甲基-哌啶-吡唑(methyl-piperidino-pyrazole,MPP)在小鼠桑葚胚和滋养层干细胞(trophoblast stem cells,TSCs)中对YAP的影响。方法收集昆明(kunming,KM)小鼠8-细胞胚,置于0μmol/L(对照组)和5μmol/L(实验组)MPP中培养,分别于8h、12h和24h后收集各组桑葚胚,采用免疫荧光技术观察YAP表达,采用Real Time-PCR检测MPP处理24h后Yap mRNA表达变化;将小鼠TSCs置于0μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L MPP中培养,48h后观察细胞形态改变,分别检测Sox2、YAP、Cdx2 mRNA和蛋白表达水平。结果小鼠8-细胞胚经MPP处理24h后,桑葚胚YAP蛋白核定位水平降低,Yap mRNA水平无显著改变;经MPP处理48h后,5μmol/L组小鼠TSCs细胞出现细胞团块,10μmol/L组细胞增殖明显受抑制;与对照组相比,5μmol/L组细胞Sox2 mRNA表达水平升高,Yap和Cdx2 mRNA水平无显著改变,团块状细胞中的YAP蛋白失去明显的核内定位,SOX2和CDX2阳性细胞的表达更加密集。结论 ERα在小鼠桑葚胚和TSCs中调控YAP核定位,其在TSCs细胞中的作用与CDX2和SOX2的表达有关。

渗透式人文素质教育在护理学专业人体形态学教学中的应用

早期接触人文学科方面的教育对医学生今后的人文素质形成具有重要意义[1].渗透式医学人文素质教育是指在专业课或专业基础课教学过程中,紧密结合教学目标和教学内容,将医学人文素质培养的基本要求有意识、有计划地融入其中.护理学专业的本质是关怀、维护人类健康,护理人员除了要掌握护理学基础理论、知识和技能以外,还须具备较高的医学人文素质.

蛋白激酶在小鼠囊胚形成中的作用机制

在小鼠8-细胞胚向囊胚发育的过程中发生第1次细胞系分化。蛋白激酶(Akt)是一种功能强大的激酶,其在囊胚形成期间的作用尚未明确。本研究中结果显示,Akt蛋白特异性定位于桑葚胚的外层细胞。Akt特异性抑制剂MK2206可显著抑制小鼠囊胚形成,并导致滋养外胚层标志基因Cdx2表达水平降低、核蛋白ERα出现胞质内粗颗粒状表达。采用siRNA显微注射的方式敲低ERα也可导致小鼠囊胚发育率降低,并伴有Yap蛋白表达水平降低。

p-CREB在小鼠植入前胚的表达及其与2-细胞阻滞的关系

目的观察p-CREB在小鼠植入前胚以及阻滞品系(昆明小鼠)与非阻滞品系(B6C3F1小鼠)2-细胞胚的分布与表达,初步探讨p-CREB在小鼠植入前胚中的作用以及与小鼠2-细胞阻滞的关系。方法利用激光扫描共聚焦显微镜检测p-CREB在B6C3F1小鼠植入前胚中的定位,比较不同品系小鼠体外培养以及B6C3F1小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚内p-CREB的表达变化。结果p-CREB的免疫阳性反应在小鼠1-细胞胚中主要分布于细胞质中;2-细胞胚及其后期植入前胚主要定位于细胞核内;昆明小鼠体外培养2-细胞胚核内荧光强度显著低于同一条件发育的B6C3F1小鼠,B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚核内荧光强度显著高于体内发育。结论p-CREB在小鼠植入前胚发育中起重要作用,p-CREB在昆明小鼠2-细胞胚核内表达较低可能与小鼠2-细胞阻滞有关。

我国煤化工产业的发展前景与展望

煤炭是我国的主要能源,而且是优化能源结构的主要基础能源。笔者立足国内资源优势,保障能源持续发展,本文总结了中国发展煤化工的优势和不足,阐述了煤化工的机遇和风险,对中国煤化工产业提出建议。

我国中小企业的营销创新

我国中小企业面临着巨大压力和挑战。应从营销方式、营销文化方面,实施营销创新策略,排除营销压力,确保中小企业营销在激烈地竞争中立于不败之地。

浅析电解铝的质量管理

电解铝的质量管理是一个长期的过程,应从加强设备装备技术、规范生产工艺管理、加快检验分析技术进步、提高技术创新能力等方面采取有效措施。本文针对我国电解铝工业质量管理存在的问题,分析我国电解铝工业质量管理现状,对提高电解铝的质量管理进行了探讨。

转录因子TRPS1通过H3K27me3调控小鼠合子型基因激活

前期研究发现,转录因子TRPS1可参与调控小鼠植入前胚合子基因组激活,但具体调节机制尚未明确。本研究收集小鼠1-细胞胚,采用显微注射的方法,注射TRPS1的抗体、siRNA和反寡义核苷酸,分别沉默TRPS1的蛋白和mRNA,观察小鼠植入前胚各阶段发育率变化;利用免疫荧光染色法检测TRPS1-siRNA显微注射后H3K27me3表达情况,并利用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)在细胞模型中探讨其作用机制。结果表明,沉默TRPS1的蛋白和mRNA能够使大部分小鼠植入前胚发育停滞在2-/4-细胞胚阶段;Trps1-siRNA显微注射处理导致H3K27me3表达水平降低。在细胞模型S-KO-V3卵巢癌细胞中转染TRPS1-siRNA,发现H3K27me3的甲基转移酶EZH2下调;采用ChIP-qPCR技术,发现TRPS1能够特异性的结合在EZH2的启动子上,在植入前胚中验证发现,TRPS1下调能够引起2-细胞胚EZH2蛋白表达水平下降。

营销培训“营心”攻略

西谚说:没有营销,一切便不会发生。企业要实现从资本到货币、从产品到客户的"惊人一跃",就需要借助营销这一桥梁,在这其中,扮演着铺路搭桥角色的营销人员,自然就成为了企业竞胜的核心要素。营销人员的培训,理所当然成了众多企业培训的重头戏。结合多年培训实践。

转录因子SNAIL在小鼠植入前胚中的表达及作用

干细胞工程与再生医学福建省高校重点实验室母型向合子型过渡(MTZ)是哺乳动物胚胎发育的关键事件,合子基因组激活(ZGA)作为母型向合子型转化的重要一步,具体机制有待于进一步的研究。Snail作为Snail家族的成员之一,在上皮细胞-间充质转化(EMT)和胚胎发育方面有重要的作用。本研究主要通过观察Snail在小鼠植入前胚不同阶段的定位及mRNA水平的变化,并利用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制其基因的表达,研究Snail在小鼠植入前胚发育过程中的作用。结果显示,Snailm RNA水平在1-细胞胚表达最高,随后逐渐降低;Snail蛋白于2-细胞胚后期直到桑椹胚前期定位于胞核,而囊胚分布于胞质。