蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺及其抗肿瘤活性研究

为实现浙贝母、黑豆高值化利用,开发一种具有抗肿瘤功效的蛹虫草菌质,将浙贝母-黑豆(浙贝母黑豆=21,质量比)作为蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株发酵基质,以多酚含量为评价指标,采用单因素及响应面试验方法优化蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺,采用MTT法测定发酵菌质体外抗肿瘤活性。结果表明,最佳发酵条件为料液比11.2(g/mL),接种量20 mL/100 g,培养温度21℃,培养时间29 d。优化条件下,菌质中多酚含量(6.24 mg/g)与模型预测值(6.35 mg/g)偏差为1.78%,且显著高于基质中多酚含量(1.19 mg/g);发酵菌质具有一定的体外抗肿瘤活性,其水提物对S180肿瘤细胞体外增殖抑制率表现出良好的量效及时效关系,以质量浓度相当于生药量200 mg/mL的水提液作用48 h条件下的细胞增殖抑制率最强,达到了73.08%,且在相同质量浓度及作用条件下,发酵菌质对S180肿瘤细胞的体外增殖抑制率是基质的1.10~1.88倍。

蛹虫草菌株胞外发酵液抗氧化能力评价及优良菌株筛选

为建立高抗氧化能力的蛹虫草优良菌株评价筛选方法,以蛹虫草(Cordyceps militaris)胞外发酵液为研究对象,采用相关性分析对10株蛹虫草菌株进行抗氧化能力评价及优良菌株筛选。以菌株生长活性、胞外酶活力、抗氧化能力为指标,在相关性分析、隶属函数赋值计算的基础上建立线性回归方程,得到蛹虫草菌株抗氧化综合能力与发酵生物量、菌丝平均生长速度、β-葡萄糖苷酶活力、蛋白酶活力的蛹虫草菌株定向筛选模型,采用模型筛选得到优势菌株CH-1及CA-1。通过结实性实验进一步验证,蛹虫草菌株CH-1与CA-1生物学转化率可达90%以上,其虫草素含量较野生菌株高60%左右,菌株生长周期短10 d以上,试验结果说明此模型可用来快速筛选出具有高抗氧化能力的蛹虫草优良菌株。

优质粗毛纤孔菌设施化栽培技术

珍稀药用真菌粗毛纤孔菌野生资源十分匮乏,优异种质资源更为稀缺,人工栽培还处于起步阶段。现将采自辽宁西部百年桑树的野生粗毛纤孔菌进行设施化栽培,从母种制备、二级种制备、养菌、转色、病虫害防治、子实体培养等方面总结出一套适合辽西地区的栽培技术,按此技术栽培所获得粗毛纤孔菌品质优良,该技术为推广栽培药用菌野生资源提供了一定的技术支持。

一株耐高温β-胡萝卜素降解菌的筛选及发酵工艺优化

以提升烟叶香韵为目的,对4株产香酵母菌进行发酵培养,通过产香感官评价、酶活分析、烟叶发酵成分分析(GC-MS法),筛选得到1株β-胡萝卜素降解产香酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC35。方法:①4株酵母菌发酵产香效果感官评价;②CS35菌株β-胡萝卜素降解效果分析、样品萃取及GC-MS靶向测试分析;③酶活测定、酶促反应体系研究;④菌株SC35发酵工艺优化及响应面优化。SC35在70℃高温环境下能有效加速β-胡萝卜素的降解,降解产物为1,3-环己二酮、氧化异佛尔酮、β-紫罗兰酮等,通过单因素试验和响应面法优化菌株SC35的最佳培养基配方中各组分添加量依次为葡萄糖2.01%,NaNO20.20%,K2HPO40.10%,MgSO40.05%,FeSO4·7H2O 0.001%,KCl 0.05%;最佳发酵条件为发酵温度27.65℃,发酵时间72 h,接种量0.99%,摇床转速140 r/min,装液量100 mL/250 mL,pH值5.5(自然)。采用优化后发酵工艺SC35粗酶液降解效率可达86%以上。

蛹虫草多酚提取工艺优化及其抗氧化活性

以蛹虫草子实体为原料,采用响应面设计优化蛹虫草多酚提取工艺,分析蛹虫草多酚的抗氧化活性。以多酚的得率为指标,在单因素试验基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验,确定蛹虫草多酚最佳提取工艺,并对多酚体外总抗氧化能力及DPPH自由基、羟自由基清除能力进行分析。结果显示:蛹虫草多酚最佳提取工艺为提取温度51℃、提取时间1.6 h、液料比49∶1(mL/g),优化条件下多酚得率为6.03 mg/g。抗氧化活性分析结果表明:浓度为0~0.4 mg/mL时,蛹虫草多酚总抗氧化能力随着质量浓度的增加而增强,且始终高于同等浓度的维生素C溶液;多酚溶液对DPPH自由基的半抑制质量浓度为19.52μg/mL,为维生素C溶液的75.25%;对羟自由基半抑制质量浓度为86.47μg/mL,是维生素C溶液的8.31%。蛹虫草多酚的提取工艺可行,蛹虫草多酚具有较强的抗氧化活性。

桑黄活性成分研究及行业发展分析

桑黄具有很高的营养价值及药用价值,近年来被广泛研究报道。本文讨论桑黄活性成分研究、相关药理作用,并分析目前的行业发展现状,以期为桑黄的进一步研究利用及桑黄产业发展提供思路。

烟叶香型特征致香成分研究及含量测定

采用高效液相色谱法(HPLC)对烟叶致香成分麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素、芳樟醇、β-大马酮的含量进行分析、鉴定和评价。通过查阅相关文献,确定以麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素、芳樟醇、β-大马酮烟叶特征致香成分为考查对象,在规定色谱条件下对检测方法的精密度、稳定性进行研究,并对湖南永州(2019)陈化烟叶样品中5种特征致香成分含量进行了测定分析。在规定色谱条件下,5种致香物质的特征吸收峰与其他各组分均达到良好的基线分离。建立的麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素、芳樟醇、β-大马酮HPLC测定方法可行。

1株寄生桑树的野生粗毛纤孔菌鉴定及资源特性分析

采用形态学观察及内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析的方法,对1株寄生于桑树的野生粗毛纤孔菌(SK-4)进行鉴定,使用单因子试验方法确定菌丝最适培养条件,并研究子实体不同提取物中的黄酮、多酚、多糖的含量及其抗氧化活性。结果表明:野生菌株SK-4为粗毛纤孔菌Inonotus hispidus,其菌丝体生长最适氮源为酵母粉,最适碳源为蔗糖,最适pH值为5.0,最适生长温度为25~28℃。SK-4菌株子实体的水提物及醇提物中多糖、黄酮及多酚的含量及抗氧化活性差异明显,其中70%乙醇提取物抗氧化活性明显优于水提物,子实体多糖主要存在水提物中,多糖的含量与1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力呈中等正相关(R2=0.557),与总抗氧化能力、羟自由基清除率呈负相关,70%乙醇溶液有利于黄酮、多酚的提取,二者的含量与总抗氧化能力、羟自由基清除率呈极显著正相关(R2>0.95),与DPPH自由基清除能力呈负相关。

一种测定蛹虫草中虫草酸含量的酶标仪微量反应方法

研究和建立一种基于酶标仪-96孔板高通量测定虫草酸含量的检测方法,并对该方法进行性能评价。以酶标仪为检测仪器,在96孔板内按照设定反应条件微量加入样品和试剂进行显色反应,利用酶标仪测定吸光度值并计算虫草酸含量。通过检测精密度、重复性、回收率,并与分光光度计法进行比较,综合评价该方法的准确度、精确度。结果表明,测定数据具有较高的精密度(样品CM1的RSD值0.829%;样品CM2的RSD值1.772%)、重复性(标准样品B40的RSD值2.061%;样品CM2的RSD值1.599%)、回收率(平均回收率99.24%,RSD值3.666%),测定结果与分光光度法检测结果无显著差异(P>0.05)。结果表明,酶标仪微量法测定准确、重复性好,并可大大减少样品和试剂的用量,该方法方便、快捷、高效,可以替代分光光度法用于虫草酸含量的测定。

蛹虫草液体菌种发酵工艺条件优化

研究不同发酵条件对蛹虫草液体菌种发酵液的菌丝生物量、菌丝虫草素含量的影响,并进行栽培验证,以确定蛹虫草液体菌种培养条件,建立液体菌种发酵培养最佳工艺。结果表明,最佳发酵工艺条件为发酵摇床转速140 r/min,接种量8%,装液量200 mL/500 mL,发酵周期84~96 h。试验结果为实现规模化人工栽培蛹虫草提供技术支撑。

桑黄菌株S-1培养条件研究

以桑黄菌株(Inonotus linteu)S-1为试材,采用人工栽培试验,研究了不同培养基、培养温度、初始pH、桑叶提取物浓度对菌丝生长特性的影响,以期为桑黄菌株S-1人工栽培及开发应用提供参考依据。结果表明:桑黄菌株S-1最适斜面培养基为PDA,菌丝生长最适温度25℃、最适pH为5.0~5.5;优化条件下,在培养基中添加0.05%~0.30%的桑叶提取物,对试验菌株菌丝生长具有明显促进作用,其中以添加浓度为0.25%时促生长作用最为明显;在人工栽培培养基上,桑黄菌株S-1具有良好的子实体形成能力,其最适栽培培养基为木屑78%、麸皮18%、豆饼粉2%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、蔗糖0.2%,生石灰1%、石膏粉1%、桑叶提取物0.25%,含水量65%。

桑黄发酵液胞外多糖含量测定方法的比较及优化

为建立桑黄多糖含量准确的测定方法,以桑黄菌株(S-1)Lnonotuslinteu液体培养胞外多糖为原料,比较研究苯酚-硫酸法及蒽酮-硫酸法的多糖测定效果。以吸光度为指标,对测定条件进行单因素优化试验,并考察精密度、加标回收率等指标。结果表明,蒽酮-硫酸法测定结果值偏高,苯酚-硫酸法测量结果值更为可信,且其加标回收率(95.42%,RSD=2.33%)较蒽酮-硫酸法(114.38%,RSD=6.21%)表现更好,为桑黄多糖含量测定较为理想的方法。优化获得的苯酚-硫酸法最佳测定条件:浓硫酸用量为7.0 mL,苯酚溶液质量浓度为5%,苯酚溶液用量为1.0 mL,显色水浴最适温度为60℃,最佳显色时间为15 min;优化条件下,试验方法在0~100μg/mL葡萄糖质量浓度与吸光度值具有良好的线性关系,稳定性、精密度试验的相对标准偏差(RSD)分别为0.32%、1.80%;平均加标回收率为103.24%,其相对标准偏差RSD为1.91%。结果:苯酚-硫酸测定方法具有良好的准确度、稳定性、重现性,可作为桑黄多糖含量的测定方法。该研究为桑黄菌株代谢产物及其产品研发、质量控制提供科学的参考方法。

不同组织分离期对大圆头蛹虫草菌种性能的影响

为明确大圆头蛹虫草组织分离最佳分离时期,以大圆头蛹虫草优良母种为母本,采用组织分离法制备子代母种,以优良母种为对照,通过对不同组织分离期(35、40、45、50 d)子代母种平板培养、液体培养及栽培实验,考察不同组织分离期对子代母种培养性状及子实体形成能力的影响。结果表明,不同组织分离期大圆头蛹虫草子代母种培养性状存在较大的差异,其子实体形成能力与子代母种培养性状具有显著相关性,以组织分离期为40 d的子代母种性能表现最优,优良菌种筛选率最高(48%),45 d次之(44%),50 d最低(32%)。明确大圆头蛹虫草优良菌种选育组织分离最佳时期为40 d,试验结果为大圆头蛹虫草优质菌种选育、复壮提供参考。