慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg的关系

目的:定量检测慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg,并寻找三者浓度之间的关系。方法:选取555例HBsAg阳性的慢性HBV感染患者血清标本,分别用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HBV-DNA和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBsAg、HBeAg。结果:555例患者中,有338例检测出HBV-DNA阳性,阳性率为60.9%(338/555);对HBV-DNA浓度取对数后分为三组:>6组、3～6组和<3组。三组之间的HBsAg的浓度差异存在显著性(P<0.001),进一步两两比较发现>6组中位浓度低于3～6组(P<0.001),而3～6组和<3组之间差异无显著性(P=0.505);三组之间HBeAg差异有显著性(P<0.001),进一步进行两两比较,发现>6组高于3～6组(P<0.001),而3～6组高于<3组(P<0.001)。在HBV-DNA阳性组,对HBV-DNA浓度的对数与HBeAg进行相关分析,两者相关系数为0.463,而与HBsAg浓度呈负相关,相关系数为-0.180。结论:随着HBV-DNA拷贝数的增加,HBsAg量呈下降趋势,而HBeAg浓度呈上升趋势,且均存在相关性。

“系科合一”模式下《临床检验仪器与技术》教学特点及体会

《临床检验仪器与技术》是医学检验技术专业的主干课程之一,该学科是仪器分析技术与医学检验技术相互交叉结合的一门学科,是联系基础医学、工程学与临床检验之间的纽带和桥梁,也是医学检验技术其他主干课程的基础课程。根据南京医科大学"系科合一"特点,该课程由各检验医学亚专业教师、临床工程处及信息中心工作人员进行授课,同时在医院检验科进行临床带教实践,方便了学生了解医学检验仪器的最新发展和前沿,提高了教学效果。

不同化学发光分析系统对乙型肝炎血清标志物检测的比较

目的:对Roche Cobas e601和Abott Architect i2000分析系统检测主要乙型肝炎血清标志物HBsAg、抗-HBs和HBeAg的结果符合性和相关性进行评价。方法:分别采用两种分析系统对119份、140份、197份标本的HBsAg、抗-HBs和HBeAg进行检测。结果:两种分析系统对HBsAg、抗-HBs、HBeAg检测的定性结果符合率分别为99.1%、95.7%和90.9%,定量数值的相关系数分别为0.566、0.863、0.964,其中抗-HBs浓度存在显著差异(P<0.05),Abott Architect i2000显著高于RocheCobas e 601分析系统。结论:两种分析系统在乙型肝炎标志物的定性结果判断中具有较好的符合率,但抗-HBs浓度之间存在差异。

医学检验技术专业《临床检验仪器与技术》教学效果调查

《临床检验仪器与技术》是医学检验技术专业的主干课程,该课程是仪器分析与医学检验技术的交叉学科,是联系基础医学、工程学与医学检验技术之间的纽带和桥梁,也是医学检验技术其他主干课程的基础课程。根据南京医科大学"系科合一"的特点,该课程授课老师由各检验医学亚专业和临床工程学专业的教师进行授课。该课程已经开展多年,为了更好地提高教学效果,提高教学质量,选择2012~2014级医学检验技术本科专业学生作为调查对象,调查其对本门课程的学习兴趣、学习效果、授课教师安排是否合理及授课学时安排是否合理等。调查结果显示学生对该课程兴趣一般;《医用物理学》、《医用电子学》和《分析化学》这几门基础课程的开展对学好该课程至关重要;77.5%学生认为目前授课模式可很好地发挥本课程与检验其他主干课程的紧密联系程度,不需要调整;在对目前理论课与实践课比例是否合适进行调查,52.11%的学生认为比例合适,不需要调整。

血浆中APC基因甲基化检测在早期肺癌诊断中的应用

目的研究血浆DNA中APC基因启动子甲基化与肺部实体瘤良、恶性的关系,确定血浆中APC基因甲基化检测对早期肺癌诊断的意义。方法以92例CT检查发现肺部实体瘤(直径≤2 cm),并在CT引导下行肺部穿刺患者和23例健康人作为研究对象,收集血浆样本,利用磁珠法提取DNA,行亚硫酸氢盐化学修饰后,采用针对APC基因启动子区的甲基化引物和探针,以荧光定量MSP法(TaqM an探针)检测APC基因的甲基化。结果92例肺部实体瘤患者经病理诊断,有58例确诊为肺癌、31例为肺部良性疾病、3例未明确诊断。58例肺癌患者中有11例(19%)测出APC基因启动子区甲基化阳性,31例肺部良性疾病、3例未明确诊断和23例健康对照组均为阴性。结论检测血浆DNA中APC基因启动子甲基化有助于早期肺癌的诊断。

成人医学高等教育检验医学专业学生论文发表情况调查

医学论文写作和发表是衡量成人医学教育学生是否具有科研创新能力的重要指标。采用匿名问卷调查的形式,对78名2009级成人医学高等教育检验医学专业学生在临床工作中论文发表情况进行调查,发现已经发表论文的学生比例为28.2%(22/78)。未发表论文的主要原因是不知道如何书写。成人检验医学教育学生论文发表率较低,需要在授课过程中进行这方面的培训。在已发表论文的22名学生中,工作年限为5～20年,平均15.4年。此外,有74.4%(58/78)的学生近五年有发表论文需求。

医学检验专业成人高等教育专升本学生科研思维培养和探索

目的:探索采用不同的教学策略对医学检验专业成人高等教育专升本学生进行科研思维培养的作用。方法:首先,通过压缩理论课学时,安排论文和科研标书讲解的教学方式,从2011年开始,每学期专业课在保证理论课授课完成的前提下,采用论文讲解的模式进行教学,同时,选择优秀论文作为范例进行讲解。其次,引入导师制,授课教师进行一对多的精准指导,许多老师都是高学历和高职称,具有丰富的带教经验。最后,通过本学系是研究生学科点的优势,安排学生与在读研究生进行见面交流。结果:经过多年的教学实践,本学系的科研培养策略和教学方法对提高了学生的科研思维能力和创新能力有一定帮助。结论:本学系使用的教学方法和教学策略对学生的科研思维能力和创新能力具有一定的意义,可以推广。

肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究

背景与目的:APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增(methylation-specificPCR,MSP)检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值。方法:将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI-H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚-氯仿法提取细胞DNA,并用MSP对APC基因甲基化进行验证,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析。结果:所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1.5×102～1.5×105拷贝/mL,用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1.5×102拷贝/mL。78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性,其中的19例(47.5%)肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1.67×102～6.78×103拷贝/mL,中位浓度为1.60×103拷贝/mL。38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性。结论:实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值。

肺癌细胞株APC基因启动子甲基化对其转录的影响

背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞株中的甲基化情况,并进一步了解甲基化对其转录的影响,本研究检测了3株肺癌细胞的抑癌基因APC启动子甲基化状态及其对该基因转录水平的影响。方法:提取3株肺癌细胞株(肺腺癌细胞株SPC-A1、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、大细胞肺癌细胞株NCI-H460)的DNA,以经转甲基处理和未做处理的脐带血DNA为阳性、阴性对照,亚硫酸氢盐化学修饰后,用甲基化特异性基因扩增(methylation specific-polymerase chain reaction,MSP)和甲基化基因芯片对APC基因启动子1ACpG岛甲基化进行研究,并用实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction)技术,以Sybr-GreenⅠ为荧光染料,β-actin基因为内参照,检测mRNA转录;对甲基化阳性的NCI-H460细胞,分别用1、5、10、15μmol/L的5′-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)试剂进行脱甲基化,提取RNA,荧光定量检测其转录变化。结果:SPC-A1和NCI-H446细胞APC甲基化阴性,NCI-H460细胞APC甲基化阳性;甲基化芯片检测NCI-H460细胞在APC启动子1A5个CpG位点均存在甲基化(687、707、714、719、726),SPC-A1和NCI-H446甲基化阴性,荧光定量结果NCI-H460的APC转录较SPC-A1和NCI-H446有明显的下降,仅为二者平均的30.04%;经5-aza-dC脱甲基化作用后,NCI-H460细胞的APC表达增加了约5～10倍,其中10μmol/L浓度作用下,APC表达增加最多。结论:肺癌细胞株NCI-H460中存在APC基因高甲基化,5-aza-dC脱甲基化试剂可以激活其转录。

4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。

人血浆DNA双重实时荧光定量PCR检测法的建立

目的建立带有内参照的双重实时荧光定量PCR方法检测血浆DNA含量。方法构建重组质粒DNA作为内参照物,采用共用下游引物的双重实时荧光定量PCR技术同步扩增人看家基因β-actin和重组质粒载体中人工合成DNA序列,定量检测健康成年人血浆DNA含量。结果本法能在同一个反应管中对目的基因和内参照进行同步扩增,两者的扩增无相互干扰,特异性好;重组质粒DNA的平均扩增效率达90%,β-actin基因的平均扩增效率接近100%;本法批内变异系数(CV)11%,批间CV17%。结论成功建立含有内参照的双重实时荧光定量PCR方法,可对血浆DNA进行定量检测。

食管癌患者血浆循环DNA定量检测及临床特征分析

目的检测食管癌患者血浆循环DNA的含量并探讨其与临床病理特征之间的关系。方法采集44例食管癌患者及100例健康对照的外周血，用磁珠法提取DNA、双重实时荧光定量PCR检测血浆DNA含量，并用放免法检测血清CEA水平。结果食管癌患者血浆DNA含量（中位数：54．0ng／ml，四分位数区间：38．0—68．1ng／ml）显著高于健康对照（中位数：18．5ng／ml．四分位区间：15．5～24．9．g／ml），P〈0．001。Ⅱa期、Ⅱb期和Ⅲ～Ⅳ期患者血浆DNA含量分别37．0（27．2—46．2）ng／ml、53．0（41．4。63．7）ng／ml和66．3（55．9～81．8）ng／ml。Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅱa～Ⅱb期（P=0．003）。Ⅱa和Ⅱb期组的血浆DNA含量显著高于健康对照组（P〈0．001）。高、中分化组和低分化组的血浆DNA含量分别为32．3（24．2～55．1）ng／ml、52．9（42．5—69．6）ng／ml和65．0（57．7～88．6）ng／ml，低分化组显著高于高、中分化组（P：0．010）。以32．3ng／mL作为临界值，血浆DNA诊断敏感性为91．2％，特异性为90．O％，ROC曲线下面积为0．959（95％Cl0．915～1．000），优于血清CEA。结论检测血浆DNA对食管癌的筛查、早期诊断、判断肿瘤侵袭与转移具有重要价值。

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的评价实时荧光定量PCR技术检测血浆(或血清)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA的技术。方法建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTBDNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTBDNA含量。结果18例非结核肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTBDNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例(18.2%)治疗前血浆(或血清)MTBDNA阳性,在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆(或血清)MTBDNA阳性检出率为27.8%(5/18),其特异性达100%。结论本研究证实了结核患者血浆(或血清)循环MTBDNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。

不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测

目的研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值。方法用普通甲基化特异性基因扩增(methylation specific PCR,MSP)方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-GreenⅠ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测。结果NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200μl血浆中能检测出102个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200μl血浆中需投入103个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带。实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍。结论实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断。

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法。方法以肺癌细胞株NCI-H460作为RASSF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆。用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测。以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量。结果实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆)。15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%)。5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml。结论实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强。

慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与HBV-DNA的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与乙肝病毒HBV-DNA之间的关系。方法选取655例HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者血清标本,用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBeAg、HBsAg,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA。结果在HBeAg阳性标本中,HBV-DNA阳性率为64.64%;HBeAg阴性标本中,HBV-DNA阳性率为36.61%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度组HBeAg和HBV-DNA检测结果比较,差异有统计学意义(P<0.01)。不同载量HBV-DNA组,HBeAg差异有统计学意义(P<0.01),且随HBV-DNA含量增加而增加;HBsAg差异也有统计学意义(P<0.01),但随HBV-DNA含量增加而降低。结论同时检测HBV-DNA与HBeAg能更好地用于临床诊断与疗效观察,HBeAg随着HBV-DNA拷贝数的增加而增加,而HBsAg却呈下降趋势。

单纯疱疹病毒性脑炎患者相关抗体滴度分析及意义

目的研究单纯疱疹病毒性脑炎患者血液及脑脊液中单纯疱疹病毒抗体(抗-HSV)滴度的改变。方法收集45例单纯疱疹病毒性脑炎患者的血液和脑脊液,稀释成不同滴度,用ELISA双抗原夹心法进行抗-HSV检测。结果采用多滴度稀释后,血液抗-HSV-IgG阳性率由20.0%上升到26.7%;脑脊液抗-HSV-IgM阳性率由6.7%上升到93.3%,抗-HSV-IgG阳性率由6.7%上升到13.3%。脑脊液中抗-HSV-IgM的阳性率显著高于血液,差异有统计学意义(P<0.05),而两者抗-HSV-IgG阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论ELISA法检测抗-HSV需要进行多个滴度稀释检测,避免钩状效应,提高阳性检出率。此法简便快速,有望成为辅助诊断单纯疱疹病毒性脑炎的重要指标。

中孕孕妇血清中戊型肝炎血清标志物的分析

目的:调查南京地区中孕孕妇戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)的感染状况。方法:收集临床妊娠监测的中孕孕妇的血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测戊型肝炎病毒的抗原、IgG抗体和IgM抗体。结果:在155例中孕孕妇血样中,HEV抗原均呈阴性,1例HEV-IgM抗体阳性,3例HEV-IgG抗体阳性同时其HEV-IgM抗体滴度处于可疑区间,36例为单纯HEV-IgG抗体阳性,115例抗体均阴性。HEV-IgG抗体总的阳性率为25.16%(39/155),与对照组22.22%(20/90)相比,不存在统计学上的差异(P>0.05)。各年龄组之间,随着年龄增长,HEV-IgG抗体阳性率有升高的趋势,无统计学差异(P>0.05)。结论:孕妇戊型肝炎病毒感染现状不容忽视,为保证孕妇和新生儿的安全,建议在妊娠常规监测中增加戊型肝炎血清标志物的检测。

定量检测血浆RASSF1A甲基化在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用

目的定量检测晚期肺癌患者化疗过程中血浆RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)甲基化水平,探讨其在个体化治疗中的应用价值。方法采集24例晚期肺癌患者化疗前后静脉血共135份,用荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)检测RASSF1A基因的甲基化水平,观察化疗前后的变化情况。结果 13例部分缓解组(partial remission,PR)患者化疗后甲基化定量水平明显升高(P<0.05),而11例未缓解组(stable disease,SD或progressive disease,PD)的患者化疗前后甲基化水平无明显变化;生存时间≥12个月的13例患者化疗后甲基化定量水平也明显升高(P<0.01),而生存时间<12个月的11例患者化疗前后甲基化水平无明显变化。生存曲线分析显示,化疗后有甲基化水平升高改变的患者总体生存时间更长(P<0.01)。结论晚期肺癌患者化疗前后血浆RASSF1A甲基化定量水平的检测,对评估化疗的疗效及预后有一定的价值,对个体化化疗的药物选择有一定的指导意义。

尿微量清蛋白/肌酐检测对高血压和糖尿病患者早期肾损害的诊断意义

目的探讨高血压和糖尿病患者尿微量清蛋白(mAlb)/肌酐(Cr)与早期肾损害关系,以便发现早期肾损害,提前进行预防和治疗。方法采用快速免疫透射法检测145例糖尿病患者和133例高血压患者尿中mAlb、Cr及mAlb/Cr,并与80例健康体检者作为对照。结果糖尿病和高血压患者的mAlb/Cr检测阳性率明显高于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论mAlb/Cr是作为高血压和糖尿病患者早期肾损害的一项敏感指标,对诊断早期肾病有重要的临床意义。