长链非编码RNA SFTA1P在肺鳞状细胞癌中的表达及其对肺鳞状细胞癌细胞生物学功能的影响

目的探究长链非编码RNA表面活性剂相关1假基因(surfactant associated 1 pseudogene,SFTA1P)在肺鳞状细胞癌(简称肺鳞癌)中的表达水平及其对肺鳞癌细胞生物学功能的影响。方法提取癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库数据,分析SFTA1P在肺鳞癌组织及正常肺组织中的表达差异;qRT-PCR检测SFTA1P在人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和肺鳞癌细胞系(H520和SK-MES-1)中的表达;通过转染SFTA1P过表达质粒及SFTA1P小干扰RNA分别构建SFTA1P过表达及干扰细胞模型;通过CCK-8及Transwell实验检测SFTA1P对肺鳞癌细胞生物学功能的影响;通过差异分析、相关性分析和功能富集分析探讨SFTA1P影响肺鳞癌细胞生物学功能的潜在机制。结果TCGA数据库肺鳞癌样本分析结果显示,SFTA1P在肺鳞癌组织中表达较正常肺组织低(P<0.05);SFTA1P在肺鳞癌细胞中表达也较人正常肺上皮细胞低(P<0.05);在肺鳞癌细胞系中,相比于H520细胞株,SFTA1P在SK-MES-1细胞株中相对低表达(P<0.05);细胞功能实验结果发现,过表达SFTA1P可抑制肺鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05),敲低SFTA1P可增强肺鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);差异分析、相关性分析和功能富集分析结果表明,SFTA1P在肺鳞癌中可能抑制MYC、G2m检查点和E2f等信号通路。结论SFTA1P在肺鳞癌中具有抑癌功能,其可能通过抑制MYC、G2m检查点和E2f等信号通路影响肺鳞癌细胞的生物学功能。

长链非编码RNA LINC00324对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响

目的观测长链非编码RNA LINC00324在非小细胞肺癌中的表达情况,探讨其对非小细胞肺癌细胞系生物学功能的影响。方法通过qRT-PCR检测LINC00324在65对配对肺癌组织及癌旁正常组织中的表达,检测不同非小细胞肺癌细胞系(4株非小细胞肺癌细胞系:A549、SPCA1、H460和H1299; 1株支气管上皮细胞系:HBE)中LINC00324基因的表达;构建LINC00324基因的过表达载体,构建LINC00324过表达细胞系;采用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测过表达LINC00324基因后对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响。结果 LINC00324在肺癌组织中较癌旁正常组织低表达(P <0. 05);以HBE作为对照,LINC00324在A549和H460细胞系中相对低表达(P <0. 05),在H1299和SPCA1细胞系中相对高表达(P <0. 05);成功构建LINC00324过表达A549和H460细胞系,LINC00324基因在A549和H460过表达细胞系中表达均升高(P <0. 05); CCK-8实验显示,过表达LINC00324基因能够抑制H460和A549肺癌细胞的增殖(P <0. 05); Transwell实验显示,过表达LINC00324基因较空质粒对照组能够显著降低H460和A549肺癌细胞的侵袭和迁移(P <0. 05);流式细胞术检测结果显示,过表达LINC00324基因较空质粒对照组能够显著增加H460和A549肺癌细胞的凋亡(P <0. 05)。结论长链非编码RNA LINC00324可能通过调节肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,在肺癌的发生、发展中起着重要的抑癌基因作用。

miRNA基因单核苷酸多态性与非小细胞肺癌易感性的关联研究

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生风险的关系。方法通过生物信息学方法筛选出13个位于miRNA基因序列上的潜在功能性的SNPs位点。采用病例-对照研究设计,纳入新发NSCLC患者626例,对照为736例同期门诊体检人群。提取研究对象外周血细胞基因组DNA,采用SNPscan^(TM)对筛选的13个SNPs位点进行基因分型,多因素Logistic回归分析SNPs与肺癌发生风险的关联性和关联强度。结果发现3个SNPs,即rs62085660(位于miRNA AC145343.1)、rs11597888(位于miRNA AL391839.1)和rs16867808(位于miRNA AL021918.2)与NSCLC发生风险显著相关,但此种关联只限于特定的亚组人群。rs62085660(C/G)位点与肺鳞癌的发生风险相关(加性模型,校正OR=0.79,95%CI=0.62~1.00,P=0.049;显性模型,校正OR=0.72,95%CI=0.53~0.98,P=0.035)。rs11597888(G/A)和rs16867808(T/C)位点只在吸烟人群中与肺癌易感性相关(rs11597888:显性模型,校正OR=1.42,95%CI=1.03~1.96,P=0.033;rs16867808:加性模型,校正OR=0.58,95%CI=0.40~0.84,P=0.004,显性模型,校正OR=0.53,95%CI=0.35~0.81,P=0.004)。结论 rs62085660位点与肺鳞癌发生风险相关,rs11597888位点和rs16867808位点与吸烟相关性肺癌发生风险相关。

长链非编码RNA LINC02163在肝细胞肝癌中表达上调并促进肝癌细胞迁移和侵袭

目的研究长链非编码RNA LINC02163在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及肝癌细胞系中的表达及对肝癌细胞迁移、侵袭的影响。方法利用Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测LINC02163在5株肝癌细胞系(HuH-7、HCCLM3、MHCC-97H、SNU-182和SMMC-7721)、正常肝细胞系(L02)和60例肝癌组织及其配对癌旁组织中的差异表达情况,分析LINC02163的表达水平与肝癌患者临床病理参数的关系;利用LipofectamineTM 2000转染LINC02163小干扰RNA(siRNA)至HuH-7、HCCLM3肝癌细胞内敲低LINC02163表达;通过Transwell实验检测敲低LINC02163后肝癌细胞迁移、侵袭能力的改变。结果 LINC02163在肝癌组织中的表达水平明显高于配对癌旁组织(P<0.001);LINC02163在肝癌组织中的表达与TNM分期、微血管侵犯(MVI)明显相关(P<0.01);与正常肝细胞系(L02)比较,LINC02163在5株肝癌细胞系中高表达(P<0.001),其中在HuH-7细胞系中表达最高,其次是HCCLM3细胞系;肝癌细胞HuH-7、HCCLM3敲低LINC02163的表达后迁移和侵袭能力明显降低(P<0.01)。结论 LINC02163在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达上调,其可促进肝癌细胞的迁移和侵袭,故可能与肝癌的发生、发展密切相关。

ADAP2基因与肺鳞癌患者预后及肿瘤微环境免疫细胞浸润的关联研究

目的分析ADAP2基因与肺鳞癌患者预后及其与肿瘤微环境免疫细胞浸润的关联。方法下载TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库肺鳞癌患者临床信息和癌组织ADAP2基因转录水平,运用KM生存曲线和Cox比例风险模型分析ADAP2基因和患者预后的关联;采用xCell数据库分析ADAP2基因表达和肿瘤微环境免疫浸润的关系;利用免疫荧光双染实验观察ADAP2蛋白与M2型巨噬细胞标志物CD163的空间共定位。结果多因素Cox分析结果显示,ADAP2表达是肺鳞癌患者独立的预后因素,其高表达与肺鳞癌患者不良预后密切相关(HR=1.533,95%CI:1.139~2.064,P=0.005)。ADAP2基因与肿瘤微环境评分呈正相关(r=0.609,95%CI:0.550~0.661,P<0.001),与免疫评分也同样呈正相关(r=0.596,95%CI:0.536~0.650,P<0.001)。ADAP2基因与肺鳞癌单核吞噬细胞系统(巨噬细胞、巨噬细胞M1、巨噬细胞M2、单核细胞)的浸润呈高度正相关(r=0.737、0.718、0.603、0.631,P<0.001)。ADAP2与CD163存在共定位,主要表达于细胞膜。结论ADAP2有望成为预测肺鳞癌患者预后和免疫治疗效果的潜在生物标志物。

长链非编码RNA OSER1-AS1在非小细胞肺癌细胞中的功能研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)OSER1-AS1在非小细胞肺癌细胞株中的表达及对非小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。方法采用qRT-RCR检测25对肺癌组织和癌旁正常组织中lncRNA OSER1-AS1的表达水平;运用Kaplan-Meier plotter网站分析lncRNA OSER1-AS1的表达与总生存率的关联;设计并构建OSER1-AS1过表达载体,转染构建OSER1-AS1过表达细胞模型;通过CCK-8实验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达OSER1-AS1对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果肺癌组织中lncRNA OSER1-AS1的表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。lncRNA OSER1-AS1低水平表达与较差的预后相关;通过转染成功构建了OSER1-AS1过表达H1299、SPCA1细胞系;过表达OSER1-AS1可以抑制H1299和SPCA1细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01),并促进凋亡(P<0.05)。结论 lncRNA OSER1-AS1可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡,在非小细胞肺癌的发生、发展中可能起到抑癌基因的角色。