肺结核治疗过程中IL-6血清表达水平变化分析

目的探究血清中白介素-6(IL-6)水平在肺结核治疗过程中的变化趋势及影响因素。方法分别收集56位肺结核患者治疗前、治疗2个月(强化期结束)和治疗6个月时血清,通过流式细胞术测量其中IL-6的表达水平。结果肺结核患者治疗期间血清中IL-6的表达水平呈降低趋势,且其表达水平差异具有统计学意义(P=0.000)。ROC曲线分析显示,治疗前和治疗2个月时,血清中IL-6表达水平差异的线下面积为0.627,界值为3.840,鉴别的灵敏度为71.40%,特异度为51.80%。二元logistic回归显示治疗2个月后血清中IL-6表达水平是否降低至3.840 pg/mL以下与治疗周期、年龄有关。治疗前IL-6的血清表达水平在有无空洞组、治疗周期为6个月组和12个月组、治疗2个月时对比未治疗前影像学病灶吸收组和无明显变化组、治疗前病原学检查结果阴阳性组之间的差异具有统计学意义。治疗2个月时,IL-6的血清表达水平在不同年龄组、不同治疗周期组、治疗前及治疗2个月时病原学检查结果阴阳性组之间的差异具有统计学意义。治疗6个月时,IL-6的血清表达水平在是否有糖尿病组、不同治疗周期组、治疗6个月时病原学检查结果阴阳性组之间的差异具有统计学意义。ROC曲线分析显示,将入组病例限制到治疗前病原学阳性时,治疗6个月和治疗2个月血清中IL-6表达水平差异的线下面积为0.805,界值为5.450,鉴别的灵敏度为81.25%,特异度为75.00%;当将入组病例年龄限制到44岁及以下时,治疗2个月和治疗前、治疗6个月和治疗2个月血清中IL-6表达水平差异的线下面积分别为0.726、0.721,界值分别为3.840、3.755,鉴别的灵敏度均为70.59%,特异度分别为70.59%、67.65%。结论肺结核治疗过程中IL-6在血清中的表达水平呈下降趋势,其水平与患者肺部有无空洞、病原学结果、年龄、病情进展、是否合并糖尿病等有关。

不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较

目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。

不确定环境下长江经济带区域经济韧性的时空演化研究

随着中国经济的快速发展和城市化进程的加快,长江经济带吸引了大量投资和产业布局。然而,这种快速的经济增长带来的压力对长江经济带及其周边环境产生了深远影响,城市扩张、资源紧缺、生态破坏及经济结构失衡等问题给长江经济带经济韧性带来新的挑战。长江经济带的高质量发展对于区域经济提出了更高的要求,而区域经济离不开区域经济韧性的发展研究,通过了解长江经济带区域经济韧性的时空演化规律,可以为政府决策者和企业提供有效参考,制定合理的政策和发展战略,以促进长江经济带的发展与协调。因此,本文将长江经济带11个省市及三个流域作为衡量对象,对其分别利用层次分析法进行区域经济韧性测算。测算结果发现:2014—2022年,区域经济韧性在整体上是增强的态势;时间演化上,各区域具有显著差异,但随着时间发展,这种差异逐渐均衡化;空间上,呈现地域差异性及圈层性。据此,本文提出了针对性的对策建议来提高区域经济韧性,以供参考。

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变与其他抗结核药物耐药的相关性

目的探讨不同抗结核药物对结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因突变的影响,以进一步准确理解结核分枝杆菌异烟肼耐药的分子机制。方法在广州地区分枝杆菌菌株库中选择异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、阿米卡星、克拉霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸等11种抗结核药物的药敏性试验临床测定结果明确的结核分枝杆菌分离株进行katG、mabA-inhA、oxy RahpC、kasA和ndh基因测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准序列为参照进行基因突变分析,应用卡方检验对比分析H^(-)(R/F/O)^(-)与H^(-)(R/F/O)^(+)、H^(+)R-与H^(+)R^(+)、H^(+)F^(-)与H^(+)F^(+)和H^(+)O^(-)与H^(+)O^(+)几大菌群之间5种基因突变发生总频率的差异(其中R、H、F、O分别代表利福平、异烟肼、左氧氟沙星与莫西沙星2种氟喹诺酮类药物和其他7种药物,“+”表示耐药、“-”表示敏感)。结果在143株异烟肼敏感结核分枝杆菌株中,H^(-)(R/F/O)-耐药表型株中5种异烟肼耐药相关基因的突变总频率为11.32%(12/106),在37株H^(-)(R/F/O)+耐药表型株中则为40.54%(15/37),两者间差异有统计学意义(χ^(2)=15.289,P<0.001);在224株异烟肼耐药结核分枝杆菌株中,H^(+)R-、H^(+)R^(+)、H^(+)F^(-)、H^(+)F^(+)、H^(+)O^(-)和H^(+)O^(+)六大菌群的突变总频率分别是47.87%(45/94)、93.85%(122/130)、68.64%(116/169)、89.09%(49/55)、55.56%(15/27)和77.16%(152/197),H^(+)R-与H^(+)R^(+)、H^(+)F^(-)与H^(+)F^(+)和H^(+)O^(-)与H^(+)O^(+)之间基因突变总频率差异有统计学意义(χ^(2)=60.778、11.99、5.841,P<0.001、0.001和0.016)。结论结核分枝杆菌INH耐药相关基因突变虽然取决于对INH的敏感性,但是否同时对其他抗结核药物耐药也可产生重要影响,值得人们深入研究。

肺结核患者治疗过程中血清IFN-γ表达水平变化分析

目的分析血清中干扰素-γ(IFN-γ)水平在肺结核治疗过程中的变化趋势,探讨其可能的影响因素,为明确肺结核治疗过程中血清IFN-γ水平监测的意义提供依据。方法收集2020年9月至2022年12月就诊于广州市胸科医院的56例肺结核患者的血清,利用流式细胞术检测患者治疗前、治疗2个月和治疗6个月血清中IFN-γ的浓度。不符合正态分布的计量资料组间比较采用Kruskal-Wallis和Mann-Whitney检验,配对样本使用Friedman检验。结果肺结核患者血清中的IFN-γ浓度在治疗过程中呈下降趋势,差异有统计学意义(P=0.004)。具有肺部空洞的肺结核患者治疗前血清中IFN-γ浓度高于无肺部空洞的患者,差异有统计学意义。受试者工作特征曲线(ROC)分析显示,血清中IFN-γ的浓度在区分肺结核治疗前与治疗2个月、治疗前与治疗6个月时曲线下面积分别为0.582和0.646,界值分别为1.520和2.345 ng/L,灵敏度分别为91.10%和44.60%,特异度分别为32.10%和69.60%。二元logistic回归分析表明,治疗2个月后血清中IFN-γ浓度是否降到1.520 ng/L以下与是否患有糖尿病有关。当将入组病例限制到治疗前病原学阳性时,ROC分析显示血清中IFN-γ浓度区分治疗前与治疗2个月、治疗前与治疗6个月的曲线下面积分别为0.762和0.770,界值分别为1.725和1.705 ng/L,灵敏度均为93.75%,特异度均为50.00%。结论治疗前肺结核患者血清IFN-γ的浓度与肺部有无空洞有关,治疗过程中总体呈下降趋势,其变化与患者是否合并糖尿病、治疗前患者病原学结果有关。

华南地区380株结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变情况分析

目的探讨华南地区异烟肼耐药结核分枝杆菌临床分离株katG、mabA-inhA、oxyR-ahpC、kasA和ndh基因的突变特点。方法在广州地区分枝杆菌菌株库中,选择异烟肼耐药性测定结果明确的380株来自华南地区结核病患者的结核分枝杆菌临床分离株,其中异烟肼耐药株236株和异烟肼敏感株144株,对380株结核分枝杆菌临床分离株的5种异烟肼耐药基因片段进行序列测定分析。描述性分析各基因突变出现的频率。结果在INH耐药株和敏感株中分别发现26个位点29种突变类型、16个位点17种突变类型,均以katG基因315AGC(S)→ACC(T)、mabA-inhA基因-15T→C最为常见,发生率分别为48.73%(115/236)、17.37%(41/236)和9.72%(14/144)、9.72%(14/144);在katG、mabA-inhA、oxyR-ahpC、kasA和ndh中分别发现3个位点5种突变、5个位点5种突变、11个位点13种突变、6个位点6种突变和11个位点11种突变,在INH耐药株和敏感株中5个基因突变的发生率分别为52.12%(123/236)、22.46%(53/236)、5.93%(14/236)、1.69%(4/236)、2.54%(6/236)和11.11%(16/144)、11.11%(16/144)、4.17%(6/144)、1.39%(2/144)、3.47%(5/144);在INH耐药株和敏感株中无基因突变、单基因突变、双基因以上突变发生率分别为27.12%(64/236)、61.44%(145/236)、11.44%(27/236)和76.39%(110/144)、21.53%(31/144)、2.08%(3/144)。结论华南地区异烟肼耐药结核分枝杆菌临床分离株耐药基因突变具有其特点,敏感株中基因突变发生率较高,值得进一步深入研究。

1034例利福平耐药结核杆菌对其它一线抗结核药物耐药性分布特征

目的了解广州市近17年来，结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药情况及对其它一线抗结核药物的敏感性分布特征。方法回顾性分析广州市胸科医院1992年2月-2008年7月期间门诊结核病人一线抗结核药物敏感性试验结果。结果10167例结核分支杆菌分离株中，耐R菌株1034例，耐H菌株2214例，耐S菌株1073例，耐E菌株622例，总体耐药率为25．80％；在1034例R耐药株中，H、R共同耐药者927例，占R耐药株总数的89．65％，却只占2214例H耐药株的41．87％；而R、S共同耐药者502例，R、E共同耐药者237例，分别占耐R株总数的48．55％及22．92％，明显少于R、H共同耐药者。结论耐RFP菌株绝大部分同时对INH耐药，但反之不然，现有的耐药机制难以解释此种现象，结核杆菌是否存在其它耐药机制有待进一步研究。

单耐利福平结核分枝杆菌株早中期培养滤液蛋白质／多肽谱分析

目的对比分析单耐利福平（RFP）结核分枝杆菌株与敏感结核分枝杆菌株早中期培养滤液蛋白质／多肽谱的差异，以寻找检测RFP耐药的检测标志物。方法利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对结核分枝杆菌参考株（ATCC27294）、10株单耐RFP结核分枝杆菌株的Middlebrook 7H9液体培养第7天和第14天培养滤液进行蛋白质／多肽谱分析。结果与Middlebrook7H9培养液蛋白质／多肽谱相比．结核分枝杆菌参考株、单耐RFP结核分枝杆菌株的第7、14天培养滤液中分别存在144、152、131和140种差异蛋白质／多肽；与结核分枝杆菌参考株的第7、14天培养滤液相比，单耐RFP结核分枝杆菌株的第7、14天培养滤液中分别存在39、72种差异蛋白质／多肽；与结核分枝杆菌参考株、单耐RFP结核分枝杆菌株的第7天培养滤液相比，其各自第14天培养滤液中分别存在82、64种差异蛋白质／多肽。结论RFP耐药分枝杆菌株的早中期培养滤液中存在与敏感分枝杆菌早中期培养滤液中相异的蛋白质／多肽，有望从中筛选到RFP耐药的检测标志物。

免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液MPB64对肺结核的诊断价值

目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏培养基法结核分枝杆菌培养,比较分析3种方法的检测结果。结果 MPB64免疫胶体金法与荧光定量PCR法、改良酸性罗氏培养基法的符合率分别为58.03%和57.51%;以临床诊断结果为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为61.95%、87.50%、72.54%。以荧光定量PCR法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为49.30%、63.11%、58.03%;以改良酸性罗氏培养基法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为48.21%、61.31%、57.51%。结论免疫胶体金法检测MPB64应用于支气管肺泡灌洗液对肺结核的临床诊断有辅助诊断价值,但检测的假阳性、假阴性值得进一步分析研究。

应用流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平敏感性的研究

目的 探究流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)利福平(Rifampicin,RFP)药物敏感性的可行性。方法 对结核分枝杆菌临床分离全敏株与耐RFP株菌悬液用12.5μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml的RFP液作用3 d、7 d或10 d后,经荧光素双醋酸酯(Fluorescein diacetae,FDA)染色;1.56μg/ml、6.25μg/ml、25.00μg/ml、100.00μg/ml的RFP液作用1 d、3 d、7 d后经碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(Meanfluorescence intensity,MFI)值,并计算其敏感指数(实验管MFI/对照管MFI),依据受试者工作曲线(Receiveroperating characteristic curve,ROC)统计各药物浓度及处理时间下FCM FDA鉴定MTB RFP敏感性的诊断性能,选定基于FDA和PI的FCM法鉴别MTB RFP敏感性的最佳条件与区分MTB RFP敏感或耐药的敏感指数界值。分别对95株和78株MTB临床分离株进行基于FDA和PI的FCM药物敏感性测定并与比例法药敏实验进行比较。结果 基于FDA的FCM检测MTB RFP敏感性的最佳条件是12.5μg/ml的RFP处理7 d,敏感指数界值为0.75,检测结果准确度为88.4%,灵敏度为90.2%,特异度为87.0%,与比例法比较差异无统计学意义(χ^2=0.364,P=0.549)。基于PI的FCM检测,MTB RFP敏感性的最佳条件是1.56μg/ml的RFP处理1 d,敏感指数界值为1.12,检测结果准确度为84.6%,灵敏度为85.7%,特异度为83.7%,与比例法比较差异无统计学意义(χ^2=0.083,P=0.774 5)。结论 基于FDA或PI的FCM法均可应用于MTB临床分离株的RFP敏感性检测。

广东地区MPT64阴性结核分枝杆菌基因序列特征分析

目的 了解广东地区MPT64阴性结核分枝杆菌临床分离株的mpt64基因序列特征。方法对保存于本院“广州地区分枝杆菌菌种保藏库”中的17株MPT64阴性和186株MPT64阳性结核分枝杆菌临床分离株培养增殖后进行mpt64基因序列测定与分析比对。结果 17例MPT64阴性株中有16例存在基因突变,其中14例在196-258位置存在63bp碱基缺失;1例存在196-258位碱基缺失与173位碱基G→C置换突变;1例存在196-258位碱基缺失与353位碱基A插入突变。186例MPT64阳性株中4例分别存在323位碱基C→G、127位碱基G→A、477位C→A、654位C→T碱基置换突变。结论 mpt64基因196-258位碱基缺失可能是广东地区结核分枝杆菌不表达分泌MPT64分子机制。

我国利福平敏感结核杆菌rpoB基因利福平耐药决定区序列循证分析

目的:了解我国利福平敏感结核杆菌rpoB基因利福平耐药决定区(rifampicin resistancedetermining region,RRDR)序列的多态性特征。方法:采用"rpoB AND Mycobacterium tuberculosis AND(China OR Hong Kong OR Macon OR Taiwan)"检索策略在Pubmed数据库中检索文献,循证分析Pubmed数据库中截止至2013年4月30日有关我国结核杆菌rpoB基因突变分子特征的研究文献。结果:36篇文献纳入研究,5 136株利福平敏感结核杆菌rpoB基因RRDR序列信息得以分析,38株(0.74%)rpoB基因RRDR序列呈现基因突变,涉及8个位点,分别为511(11株)、533(7株)、531(6株)、526(5株)、516(4株)、518(2株)、519(2株)、521(2株)等,其中1株涉及511/526双位点。结论:我国结核杆菌rpoB基因RRDR序列存在沉默突变现象,并非所有RRDR序列改变均与结核杆菌利福平药物敏感性有关。

结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌培养滤液、胸腔积液和血清蛋白质组分析

目的:寻找结核性胸膜炎特异性体液蛋白质标志物,以开发新型结核性胸膜炎实验诊断方法。方法:应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测5例结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌分离株Middlebrook 7H9液体培养早中期(7 d与14 d)培养滤液及其血清、胸腔积液蛋白质组,并进行描述性比较分析,寻找其共有蛋白质组分。结果:培养滤液蛋白质组蛋白质种类数量远多于胸腔积液和血清蛋白质组,4例患者胸腔积液蛋白质组蛋白质种类数量多于血清蛋白质组;5例患者3类样本蛋白质组中,存在种类数量各不相同的培养滤液-胸腔积液、培养滤液-血清、血清-胸腔积液和培养滤液-胸腔积液-血清共有蛋白质,但在所有患者培养滤液、胸腔积液、血清中均存在相对分子质量为2 660的蛋白质。结论:相对分子质量为2 660的蛋白质具备结核性胸膜炎特异性体液蛋白质标志物的表征,但尚需进一步大样本量研究予以证实。

营养支持治疗在结核病患者外科手术后的应用

目的 探讨肠外营养支持对结核病患者外科手术后患者营养状况的影响。方法 48例结核病大中手术后的患者随机分成研究组（25例）和对照组（23例），研究组在术后连续7d予肠外营养支持，提供非蛋白热卡（NPC）25～30kcaL／（kg·d），氮供给量为0．15～0．2g/（kg·d），对照组仅在术后予静脉补充葡萄糖溶液，两组均予普通饮食，观察两组手术前、手术后8d和14d营养指标和代谢指标的变化，并进行统计分析。结果 治疗前两组的各项营养和代谢指标均无明显差异。术后8d与术前比较，对照组的各项营养指标均降低，均P〈0．01，代谢指标ALT，BUN升高，均P〈0．05，而研究组ALB和BUN也较术前分别降低和升高，均P〈0．05。组内比较：TIE和ALB研究组均高于对照组，分别P〈0．05和P〈0．01，GLU研究组低于对照组（P〈0．05）。术后2周与术前比较，对照组的Hb，alb仍低于术前，均P〈0．01；研究组的营养指标和代谢指标，以及对照组的代谢指标均基本降至术前。组内比较：研究组的各项营养指标高于对照组，分别P〈0．05，P〈0．05和P〈0．01，BUN研究组低于对照组（P〈0．05）。结论 结核病患者术后早期即存在营养障碍，营养支持能明显改善结核病大中手术后患者的营养状况，降低术后的代谢反应，促进术后尽早康复。

初治肺结核患者CD3^+、CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞计数分析

目的通过分析初治肺结核患者CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数结果,透视初治肺结核患者的细胞免疫状况。方法对111例初治肺结核患者的全血样本进行CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数(/μl),依性别和<20、21～、31～、41～、51～、61～、71～、>81岁等8个年龄组别对计数结果进行分析。结果 (1)CD3+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为986±473、892±287、954±388、893±529、761±432、758±336、714±372和332±183,低于正常值者分别占66.67%、50.00%、87.50%、68.75%、72.73%、81.82%、85.71%和66.67%(总计72.29%);女性各年龄组别结果分别为1418±0、902±354、1039±515、712±399、584±271、778±234、723±234和107±0,低于正常值者分别占0、66.67%、50.00%、100.00%、100.00%、100.00%、75.00%和100.00%(总计75.00%)。(2)CD4+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为604±328、482±186、565±231、535±340、454±275、422±221、443±230和270±129,低于正常值者分别占66.67%、35.71%、37.50%、37.50%、36.36%、63.64%、57.14%和66.67%(总计46.99%);女性各年龄组别结果分别为896±0、474±202、626±335、446±311、333±208、426±182、460±280和66±0,低于正常值者分别占0、33.33%、33.33%、100.00%、100.00%、100.00%、75.00%和100.00%(总计64.29%)。(3)CD8+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为309±132、315±124、298±141、300±209、227±122、282±133、231±151和46±35,低于正常值者分别占83.33%、57.14%、100.00%、81.25%、81.82%、63.64%、85.71%和66.67%(总计77.11%);女性各年龄组别结果分别为463±0、323±134、314±169、189±49、196±104、286±91、220±149和28±0,低于正常值者分别占0、66.67%、33.33%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%和100.00%(总计75.00%)。结论初治肺结核患者多有CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数偏低,尤以老年龄组患者为甚,初治肺结核患者的低细胞免疫状态值得临床关注。

中国南方地区结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药特征分析

目的 分析中国南方地区一线抗结核药物耐药背景不同结核分枝杆菌吡嗪酰胺(PZA)耐药率差异,探讨影响其PZA耐药的可能因素,为进一步揭示结核分枝杆菌PZA耐药机制提供研究基础。方法 以2012年11月至2018年12月就诊于我院结核患者的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,依据其对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素(以下分别简称为H、R、E、S)耐药性分组,分析此四种药物耐药组合不同及利福平耐药特征不同结核分枝杆菌的PZA耐药率差异。结果 (1)耐0、1、2、3、4种上述抗结核药物结核分枝杆菌的PZA耐药率分别为3.75%、8.60%、28.21%、57.59%、75.74%,任意两组组间比较差异有统计学意义(P <0.005);(2)利福平耐药和敏感的结核分枝杆菌PZA耐药率为分别为56.03%和12.51%,组间比较差异有统计学意义(P <0.05);(3)四种药物全部敏感(Q),S、H、E、R、SE、RS、HS、RE、HR、HE、HSE、RSE、HRS、HRE、HRSE耐药结核分枝杆菌的PZA耐药率分别为3.75%、4.92%、11.36%、12.12%、17.78%、7.14%、18.00%、18.20%、37.50%、40.98%、48.57%、50.00%、50.00%、54.71%、70.18%、75.74%;15组耐药菌与全敏菌组间PZA耐药率比较差异显示:S、E、SE耐药菌与全敏菌的PZA耐药率差异比较差异无统计学意义(P> 0.003),余者组间比较差异有统计学意义(P <0.003)。结论 利福平耐药与否、一线抗结核药物耐药组合可能是影响结核分枝杆菌PZA耐药的重要因素。

中国氟喹诺酮耐药结核分枝杆菌gyr基因序列特征分析

目的明晰我国氟喹诺酮类药物耐药结核分枝杆菌株gyrA、gyrB基因突变的分子特征。方法以检索式"quinolones resistance AND Mycobacterium tuberculosis AND(China OR Hong Kong OR Tai Wan OR Macon)"和"结核AND喹诺酮耐药"分别在英文数据库(pubmed、Embase、SciFinder)和中文数据库(万方、中国知网、中国生物医学文献服务系统与维普期刊资源服务平台)中检索有关我国结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究文献,对符合纳入标准的文献中氟喹诺酮耐药基因gyrA、gyrB进行突变位点和氨基酸变化类型等计数资料的信息提取和分析。结果 32篇外文和23篇中文文献纳入研究,3 641株氟喹诺酮类耐药结核分枝杆菌的gyrA基因得到分析,其中1 958株同时分析了gyrB基因。3 641株耐药菌中,2 830株检测到gyrA基因突变(突变率为77.73%),共47种突变类型,均为氨基酸错义突变,其中单位点、双位点突变的发生率分别为75.83%和1.92%,94、90、91位密码子突变率分别为49.33%(1 796/3 641)、19.14%(697/3 641)、5.80%(211/3 641),出现频率最高的突变类型依次为Asp94Gly、Ala90Val、Asp94Ala、Asp94Asn、Ser91Pro、Asp94Try;1 958株耐药菌中,175株发生gyrB基因突变(突变率为8.94%),其中56株的29个突变类型为gyrB单基因突变,其余119株36种突变类型与gyrA基因突变共同发生,占gyrB序列突变的68%。结论我国结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药株gyrA基因突变以94、90、91位密码子单位点突变为主;gyrB基因突变位点较为分散,常与gyrA基因突变伴随发生。

广东地区结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因变异特征

目的探讨广东地区不同耐药表型的结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药基因rpoB变异特征,为更精准快速分子检测技术的研发提供依据。方法从分枝杆菌菌种保藏库中筛选利福平(R)、异烟肼(H)、乙胺丁醇(E)、链霉素(s)敏感性明确的结核分枝杆菌临床分离株373株。对373株临床分离株采用聚合酶链式反应技术扩增包含利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因片段并进行序列测定与分析。结果(1)373株菌株样本中,192株检测到rpoB基因变异,共发生225个突变包括碱基置换、插入、缺失在内的40种突变种类,531、526、511、516、533、515位点突变最为常见,占比分别为43.11%(97/225)、20.89%(47/225)、10.22%(23/225)、8%(18/225)、4.44%(10/225)、4%(9/225);(2)192例rpoB突变株中,159株仅发生单位点突变,33株发生双位点突变,其中D516V、H526L、H526D、H526R、S531W等14种突变种类只在单位点突变中出现,为单位点特有变异,M515T、H526Q、D516G、M515V、E541A等21种突变种类只在双位点突变中出现,为双位点特有变异,S531L、L511P、H526Y等5个种类突变为单双位点共有变异,不存在3个位点的同时变异。(3)对4个一线药物全敏感菌株(Q)、R敏感H耐药株(RSHR)、R耐药H敏感株(RRHS)和耐HR株(MDR)的rpoB基因突变率分别为4.67%(5/107)、28.42%(27/95)、90.62(29/32)、94.24%(131/139),除RRHS与MDR株间突变率不具统计学差异外(P>0.05),Q/R^(S)H^(R)、Q/R^(R)H^(S)、Q/MDR、R^(S)H^(R)/R^(R)H^(S)、R^(S)H^(R)/MDR间rpoB基因突变率具有统计学差异(均P<0.001)。结论广东地区结核分枝杆菌rpoB基因突变具有多样性、地域性特点,不同耐药表型可能对rpoB基因突变产生深远影响。

直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值

目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价。结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%;MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%)。结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究。

应用流式细胞术鉴定死活结核分枝杆菌的实验研究

【目的】探讨碘化丙锭(PI)和6-羧基荧光素二乙酸酯(6-cFDA)鉴别死、活结核分枝杆菌的性能,为应用流式细胞术定量检测与分析结核分枝杆菌药物敏感性和异质性耐药方法的创建提供基础性实验依据。【方法】应用PI和6-cFDA分别对10株1麦氏浊度结核分枝杆菌纯培养活菌悬液和其相应的1麦氏浊度85℃加热30 min的死菌悬液进行染色,应用流式细胞术检测其平均荧光强度(MFI),依据受试者工作特征曲线(ROC)确定区分死菌与活菌的MFI界值,然后对另外10株活菌悬液和10株死菌悬液进行相同实验,利用前述MFI界值进行细菌死活判定。【结果】①在确定MFI界值实验中:10份死菌悬液样本PI染色的MFI值呈非正态分布,其中位值为2 459,10份活菌悬液样本PI染色的MFI值呈正态分布,其均值为426±180,PI染色鉴定死菌的MFI界值为1 329;10份死、活菌悬液样本6-cFDA染色的MFI值均呈正态分布,其均值分别为49±4和7 144±4 512,6-cFDA染色鉴定活菌的MFI界值为1 021。②应用PI染色鉴定死菌的MFI界值和6-cFDA染色鉴定活菌的MFI界值检测另外10株活菌悬液和10株死菌悬液,其准确度分别为95%和100%,灵敏度分别为1.00和1.00,特异度分别为0.90和1.00,Yonde指数分别为0.90和1.00,阳性预测值分别为0.91和1.00,阴性预测值分别为1.00和1.00。【结论】PI染色能够良好鉴定结核分枝杆菌死菌、6-cFDA染色能够良好鉴定结核分枝杆菌活菌,基于PI、6-cFDA染色鉴定结核分枝杆菌活性将具有广阔的应用前景。