油菜角果裂角力的定量测定

油菜的角果容易开裂，造成产量损失，同时也不利于油菜的机械化收获。定量测定油菜角果的开裂力对油菜裂角性的研究和选育耐裂角油菜十分必要。采用了拉裂法定量测定油菜角果的开裂力。为了保持不同测定值的可比性，收获的油菜角果在25℃，50％湿度的环境下平衡2周，使测定材料含水量保持相对一致；测定时，在离角果基部2．5cm处，用金属线缠绕固定角果，使不同的测定，都拉裂2.5cm长的角果。使用物性仪，拉裂角果，角果开裂时，物性仪探头受到的最大力即为角果开裂的力。用拉裂法，测定了47个甘蓝型油菜品种，结果表明甘蓝型油菜角果的开裂力在0．77～3．7N之间，裂角性存在很大的遗传变异，因此，在甘蓝型油菜中选育适宜于机械化收获的耐裂角油菜品种是可行的。

不同抗生素对油菜种子萌发的影响

试验分别比较了卡那霉素(Kan)、除草剂(PPT)和潮霉素(Hyg)对宁油12号、宁油14号和宁油16号甘蓝型油菜种子萌发的影响。结果表明,这3个油菜品种种子的萌发对卡那霉素有较高的耐受性,对除草剂最为敏感。此外,萌发过程中,油菜基因型的不同会引起对抗生素耐受性的差异。

蓝细菌血红蛋白基因的克隆及其向甘蓝型油菜中的转化

血红蛋白存在于动物、植物、细菌、真菌、酵母、藻类、原生动物等生物体中。利用PCR方法克隆了蓝细菌Synechocystis sp.PCC 680的血红蛋白基因SLR2097,该基因属于"truncated"血红蛋白家族,大小为375 bp,编码123个氨基酸残基。数据库搜索的结果显示所有的血红蛋白都有一个保守基序,即"F-[L]-x(4)-[G]-G-[T]-x(2)-[Y]-x-[G]-[R]-x-[M]-x(3)-H","truncated"血红蛋白家族也有该结构,表明它们的进化祖先相同。将获得的SLR2097连接到双元载体pCAMBIA1300-CaMV35S上,并转化甘蓝型油菜品种宁油12。转基因油菜表型分析表明,血红蛋白基因SLR2097在油菜中的表达促进油菜的生长并缩短发育期,引起早熟,这些表型对改良油菜的农艺性状有重要的应用价值。

农杆菌介导的油菜子叶瞬时表达

实验以甘蓝型油菜宁油16为材料,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,建立了农杆菌介导的油菜子叶瞬时表达系统。我们构建了GFP表达载体pB2GW7.0-gfp,并成功转化农杆菌。实验中通过添加P19来提高GFP在油菜子叶中的瞬时表达量。并提取了注射有P19和pB2GW7.0-gfp农杆菌混合液的油菜子叶RNA,经RT-PCR鉴定,发现在4～8 d GFP均能表达。激光共聚焦显微镜分析表明农杆菌介导的油菜子叶瞬时表达系统能够转化油菜子叶的表皮细胞和保卫细胞。甘蓝型油菜子叶瞬时表达方法简便、快速、可靠,从种子播种到获得荧光蛋白表达,全过程只需要20 d。表明在研究油菜基因的表达和功能方面有潜在的应用前景。

甘蓝型油菜无花瓣品系的选育研究

对品种间杂交选育成的甘蓝型无花瓣品系及其有花瓣的近等基因系初步研究表明，无花瓣品系的花器组成明显比有花瓣品系增大，除一次有效分枝和一次有效角果略多外，农艺性状较差，有待继续提高。幼蕾蛋白质反相高效液相色谱分析表明，无花瓣品系花蕾较有花瓣品系多一种蛋白，其他几种蛋白含量也有明显变化。

油菜种子特异表达启动子NAPIN的功能鉴定

构建了在油菜中新克隆的种子特异表达启动子NAPIN驱动GUS的植物表达载体pB I121 NAPIN-BAR,并利用真空渗透法转入拟南芥基因组中。转基因拟南芥后代卡那霉素抗性发生分离,选取具有3∶1分离比的后代自交,产生纯合的具有单拷贝插入的后代,并通过PCR确认有植物表达载体特有的BAR基因启动子35S序列的插入。转基因后代GUS染色结果表明,GUS染色主要出现在角果皮位置,幼苗期只有子叶能被染色。新克隆的NAPIN启动子控制基因只在和种子有关的部位和种子衍生的部位表达。

油菜应用的研究进展

油菜作为世界范围内主要的油料作物 ,其油主要食用 ,其饼粕主要饲用。近年来人们对油菜的品质不断改良并且菜籽油也大量应用于化工、能源领域 ,转基因油菜也用来生产可降解塑料的原料和生产昂贵的多肽、蛋白等药物 ,由于油菜用途的不断拓展 ,对其研究也不断深入。笔者对油菜产量、质量的提高 ,抗病性的加强 。

一个与甘蓝型油菜无花瓣性状基因连锁的RAPD标记

以无花瓣和有花瓣姊妹系油菜为材料,结合近等基因系法和集群分离法这两种分子标记策略,对184个RAPD随机引物进行筛选,得到了与控制花瓣性状基因紧密连锁的分子S352-580,并通过无花瓣品系和有花瓣品种对所得标记进行了验证.

舟形藻生长、品质特性及转化筛选标记研究

研究了舟形藻(Navicula tenera)细胞表型和积累模式,利用索式抽提法和气质联用(GC-MS)方法对其进行总油脂含量和脂肪酸组分的分析,并研究了舟形藻对氨苄青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan)、草胺膦(PPT)、庆大霉素(Gen)、链霉素(Str)、遗传霉素(G418)、潮霉素(Hyg)以及氯霉素(Cm)这8种常用抗生素的敏感性。结果显示,舟形藻细胞以沉积底部的生长模式积累;其总油脂含量占其干物质重量的8.31%,脂肪酸种类主要有C16∶0,C16∶3(n-4)和C20∶5(n-3)(EPA),分别占总脂肪酸的64.13%、15.87%和19.62%;舟形藻对Cm和G418非常敏感,对Hyg较敏感,而对不同浓度的Amp、Kan、Gen、Str以及PPT极不敏感。为舟形藻基因工程筛选标记的确立,进而建立其遗传转化系统奠定了基础。

芥菜型和甘蓝型油菜及其杂种后代种子硫甙组成差异的研究

用高效液相色谱技术分析了芥菜型油菜（Brassicajuncea）和甘蓝型油菜（Brassicanapus）种间杂种后代及其亲本的硫甙组成。结果表明，与亲本农艺性状相似的后代，那么其硫甙组成与亲本亦相似。各后代中疏甙组成与亲本相比，虽发生了不同程度的变化，但都有倾向母本的趋势。芥菜型油菜烯丙基硫甙含量高，2-羟基-3-丁烯基硫甙和3-丁烯基硫甙含量低，而甘蓝型油菜2-羟基-3-丁烯基硫甙和3-丁烯基硫甙含量高,烯丙基硫甙含量低。所以通过杂交和定向选育有可能有成上述3种硫甙含量均低的品种。我们初步育种实践表明这是一条可能创造出低流甙种质的新途径。

从萌发的油菜种子中制备脂肪酶

测定不同萌发期油菜幼苗的脂肪酶活性,采用"盐析→超滤→M-Bondapak-C18柱层析"的工艺路线,建立一种简单且高效的油菜脂肪酶纯化方法。结果表明:通过测定不同培养时间的油菜幼苗的脂肪酶比活力,发现培养6d的油菜幼苗脂肪酶比活力最高,此时期的油菜幼苗适合作为脂肪酶提取的材料;对脂肪酶比活力为1.89U/mg的油菜蛋白粗提物采用盐析法沉淀脂肪酶时,得到脂肪酶的比活力为2.07U/mg,回收率为82.47%;采用截留分子质量为10000D的超滤膜对脂肪酶盐析物进行脱盐和除去小分子杂蛋白处理,得到的脂肪酶的比活力为2.46U/mg,回收率为75.84%;进一步采用M-Bondapak-C18柱层析纯化超滤液,脂肪酶最高比活力为9.14U/mg,回收率为34.13%。所得到的脂肪酶的活性达到了商品化脂肪酶的水平。

油菜裂角的研究进展

油菜裂角造成产量损失,同时不利于机械化收获。近年来关于油菜角果开裂的过程、调控角果开裂的因子以及参与裂角过程的基因等方面的研究有了很大的进展,本文就该方面的研究情况做一综述,并展望未来的研究趋势和实际应用。

用于RAPD分析的油菜总DNA的快速提取

通过 CTAB法、纯化法和简便法所提 DNA质量效率和 PCR-RAPD扩增效果的比较 ,优化和建立了无液氮处理 ,可用于 RAPD分析的油菜总 DNA的提取方法。该方法能在油菜生长发育早期进行单株微量的提取 ,快速进行

油菜种子特异表达napin基因启动子的克隆及序列分析

通过PCR扩增 ,从油菜 (Brassicanapuscv XY15 )中克隆了种子特异表达napin基因启动子 ,序列分析表明 ,该启动子有 114 7个核苷酸 ,与已报道的序列比较 ,其核苷酸的同源性为 99 9%和 99 4 %。这是一个新的napin基因启动子 ,已将其登录到GenBank ,登录号为AF4 2 0 5 98。

油菜种子萌发期和形成期脂肪酶活性的动态变化

探讨宁油16号油菜品种种子萌发过程中脂肪酶活性与苗生长速率之间的关系以及低、中、高含油量油菜品系角果、种子发育过程中脂肪酶活性与种子油份代谢之间的关系。结果显示:油菜种子萌发期的相对生长速率和脂肪酶的活性呈正相关;在种子形成前期、中期,角果皮和种子中都检测到了脂肪酶活性,此时脂肪酶维持叶绿体活力,从而保持了油脂的合成;在种子形成后期,脂肪酶主要降解种子中的油脂,此时,高含油量品系种子的脂肪酶活性比低含油量品系低。推测在种子萌发期,脂肪酶通过降解种子中存储的油脂为苗的生长发育提供了碳源和能量;在种子形成前期和后期,通过降解油脂影响着种子的发育及油份积累。

油菜脂酰CoA合成酶基因pXT166的鉴定和功能分析

长链脂酰CoA合成酶(LACSs)在脂肪酸的合成代谢与分解代谢中起着重要的作用,它把游离脂肪酸活化为脂酰CoA硫酯。pXT166经证实具有编码长链脂酰CoA合成酶活性。本研究通过酵母互补实验验证了pXT166具有LACS的酶活性。分析该基因编码蛋白的底物偏好性显示,长链饱和脂肪酸是其优先底物。RT-PCR分析表明,在不同油脂含量的油菜品系种子中,授粉后35d,该基因在高含油量的种子中表达更强,表明pXT166参与了油菜种子中油脂的合成,与种籽含油量相关。

油菜长链酰基辅酶A合成酶基因(LACS4)的电子克隆和表达分析

长链酰基辅酶A合成酶(LACSs)把游离脂肪酸活化成为酰基辅酶A硫脂,在油脂的合成和降解途径中发挥着重要的作用。通过电子克隆的方法,发现了1个油菜(Brassica napus)LACS基因。该基因长2270 bp,包含2004 bp的开放阅读框,预测编码1个含有667个氨基酸残基的蛋白质,命名该蛋白为BnLACS4,序列分析显示,BnLACS4具有典型的LACS分子特征。表达分析显示BnLACS4在成熟油菜的根、茎、叶和花中都有表达。在授粉后(DAP)35 d,不同含油量的角果皮和种子中,BnLACS4的表达也存在差异。表达谱说明,BnLACS4可能参与油脂的生物合成以及油菜种子中的油脂积累。

甘蓝型油菜WRKY基因家族碱基组成及密码子使用特性分析

WRKY转录因子广泛地参与植物的抗逆防卫反应。通过对甘蓝型油菜WRKY基因家族碱基组成和密码子用法的分析,发现其碱基组成不仅对密码子的偏好性选择有重要影响,而且与基因的表达水平参数(Nc、CAI、CBI等)显著相关。通过对密码子RSCU值的分析,得到了TTA、CTT、AGA等29个偏好密码子,且多以碱基A或T结尾。ENc-plot分析表明,除了碱基组成之外,自然选择等其它因素对密码子偏好性也有影响。

大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因GmLACS在酵母中的表达

在LACS缺陷型酵母YB525中对已经克隆的大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因(GmLACS)进行表达,并对其功能进行了预测。进化树比对分析显示大豆长链脂酰辅酶A合成酶(GmLACS)与其它植物的LACSs具有高度的同源性;酵母互补测试显示GmLACS蛋白能够互补LACS缺陷型酵母YB525,具有长链脂酰辅酶A合成酶活性;底物偏好性分析显示GmLACS偏好活化大豆中的重要的长链脂肪酸。以上研究结果表明:大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因GmLACS编码的蛋白属于LACS家族,能够活化外源脂肪酸并参与了脂肪酸相关的脂类代谢。

甘蓝型油菜BnCOP9基因的克隆及其环境信号响应分析

植物COP9(Constitutively photomorphogenic 9)信号体(CSN)是一个多亚基复合体,而CSN8是这个复合体必不可少的亚基。为了克隆油菜CSN8基因并分析其在各种环境信号下的表达变化,以甘蓝型油菜中双9号为材料,采用同源克隆法克隆油菜CSN8(BnCOP9)cDNA。序列分析表明,BnCOP9编码的蛋白含有197个氨基酸残基,在其蛋白质中部含有1个PCI结构域,与Arabidopsis thaliana CSN8(AtCOP9)有92%的相似性。定量RT-PCR分析显示,Scle-rotinia sclerotiorum、伤处理以及甲基茉莉酸快速激活BnCOP9的表达,苯丙噻重氮抑制其表达,表明BnCOP9作为各种环境信号的响应基因在水杨酸和茉莉酸信号的交叉谈话中及油菜对S.sclerotiorum和机械伤害反应的网络中起作用,这些结果为研究BnCOP9在油菜抗逆中的作用提供线索。