ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法利用逆转录病毒载体系统,构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4,以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector各组细胞的生长情况。采用0.1μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后,检测细胞凋亡相关指标,采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9,caspase-8和PARP切割带的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector细胞中Akt磷酸化水平。结果免疫印迹法检测结果显示,BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BONVector(P=0.013),稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快(P<0.05)。相比较于载体对照组BON-Vector,BON-ELF4细胞在0.1μmol/L表阿霉素处理24 h后caspase-8,caspase-9的蛋白前体降低,而caspase-8,caspase-9切割成熟体升高(P<0.05);同时,相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果,6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高(P<0.05),而Akt总蛋白的水平基本未受影响(P>0.05)。结论ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤细胞增殖和抗凋亡。

空斑试验在微生物实验教学中的改进及应用

目的通过更换侵染病毒来改进制作“空斑试验”示教板,以得到更鲜明的“空斑试验”结果,使其更好地服务本科实验教学。方法用不同滴度的寨卡病毒和登革病毒感染培养于12孔细胞培养板的Vero细胞,置37℃吸附2 h。吸附后,用1%甲基纤维素Eagle氏覆盖液进行覆盖步骤,置细胞于37℃培养6~7 d将细胞固定和染色后,用自来水冲洗,待干。结果感染寨卡病毒的未死亡脱落的Vero细胞被结晶紫染色,紫色背景明显。肉眼可看到寨卡病毒感染细胞产生的无色空斑,空斑呈圆形,清晰完整,边缘整齐。空斑数量随着病毒浓度的升高而增加,复孔产生空斑数量趋势一致。感染登革病毒的未脱落Vero细胞被染成紫色,形成较鲜明的紫色背景,登革病毒感染细胞产生了无色空斑,但是空斑的形成数量较少,且不是所有复孔都产生了空斑。随着病毒稀释倍数增加,产生的空斑数量无明显减少趋势。结论用寨卡病毒感染Vero细胞能得到更典型的空斑试验结果,该方法更适用于本科教学制作示教结果用。