海洋微塑料对海水青鳉毒性效应研究进展分析

海水青鳉是研究微塑料对海洋生物毒理作用的理想模式生物。文章围绕微塑料在海水青鳉中毒性研究,通过查阅相关文献,对已发表文献年度变化和地区分布进行了统计分析;通过分析实验所用微塑料种类、颗粒大小和实验浓度、暴露时间和方式以及不同生长阶段海水青鳉实验对象选择,总结归纳微塑料在海水青鳉体内代谢、肠道损伤、生长和发育毒性、生殖毒性、遗传毒性以及对其他海洋污染物的放大或缓解效应6个方面的研究结果,并以分析结果为基础,建议在后期研究海洋微塑料对海水青鳉毒性效应,应重点考虑实验时间长短、实验材料选择和实验设计、毒理作用机制分析等因素。

Forskolin处理真鲷胚胎条件的研究

研究Forskolin处理真鲷胚胎的条件。对加药时期以及Forskolin浓度进行了优化,得到了处理真鲷胚胎的加药时期为受精后6h,Forskolin的浓度为0.01mmol/L和0.02mmol/L,在此条件下处理过的胚胎体节由正常的V型变成U型。该研究结果将有利于研究Hh信号对真鲷成肌因子的影响。

酵母基因组的提取

酵母是低等真核生物,被广泛应用于食品生产和基因工程。提取酵母基因组对于应用酵母进行实验研究非常重要,本文摸索出了一套简单、经济、高效的酵母基因组的提取方法,为进行酵母研究提供方便。

斑马鱼GSTM单核苷酸多态性与低温耐受性的相关分析

为分析谷胱甘肽硫-转移酶M基因(glutathione S-transferases M,GSTM)与鱼类低温耐受性的相关性,本实验运用PCR-SSCP技术研究了130尾斑马鱼(Danio rerio)GSTM基因5?UTR、3?UTR和第一内含子序列的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs),同时分析了筛选到的基因型与其低温耐受性状的关联性。结果显示,在其5UTR区域检测到AB、BC、AC 3种基因型个体,共A、B、C 3个等位基因,其观测杂合度和期望杂合度分别是1.000和0.570,多态信息含量为0.472,所检测群体在该座位偏离了Hardy-Weinberg平衡;第1内含子中检测到DD、DE和EE 3种基因型个体,共D、E两个等位基因,其观测杂合度和期望杂合度分别为0.408和0.477,多态信息含量为0.362,群体在该座位符合Hardy-Weinberg平衡。3'UTR区域中没有发现多态性。上述2个SNP座位与斑马鱼低温耐受性状的关联分析结果表明,5'UTR区3种基因型与低温耐受性状均没有显著相关性(χ2=4.029,P>0.05)。而第1内含子3种基因型与低温耐受性状显著相关(χ2=8.498,P<0.05):DD基因型在耐低温群体中占优势(50.00%),并表现为对受低温胁迫斑马鱼的保护性因素(OR=0.520,95%CI=0.255–1.061),而DE基因型在不耐低温群体中占优势(51.31%),表现为低温胁迫下斑马鱼的危险因素(OR=3.012,95%CI=1.413–6.419)。研究结果为GSTM基因SNPs位点与斑马鱼低温耐受性能关联分析提供了依据,也将为海水经济鱼类抗寒标记筛选育种提供参考。

肉碱的生理功能及其应用前景

概述了L 肉碱的生理功能 ,及其在机能性食品、饲料添加剂。

大菱鲆四倍体的人工诱导研究

大菱鲆(Scophthalmus maximus)为我国北方沿海主要的海水经济品种,其四倍体的获得对种质改良和三倍体的规模化生产具有重要的价值。到目前为止,有关大菱鲆四倍体的人工诱导尚未见报道。本文采用静水压抑制受精卵卵裂的方法,进行了四倍体诱导条件的摸索。结果显示,在14.8—15.5?C培育时,在卵裂前15min用67.5MPa处理6min可获得较好的诱导效果,其孵化率最高可达72%,染色体制片计数法计算其原肠胚期诱导率可达70%,初孵仔鱼流仪检测诱导率最高为73%。诱导组胚胎发育与对照组在形态学上基本一致,仅发育孵化时间比对照组略有滞后。

重组牙鲆生长激素基因片断在毕赤酵母中的表达

为了开发一种有效的重组牙鲆生长激素(r-fGH)的方法,利用PCR的方法从牙鲆cDNA文库中克隆得到了牙鲆生长激素(fgh)的cDNA片断。接着将这个fgh片断克隆到整合型质粒pAO815,它可以在甲醇诱导启动子的调控下表达外源蛋白。利用这种包含一个fgh插入片段的克隆来构建含有2个和3个头尾顺序排列的fgh表达框的表达质粒。利用氯化锂转化的方法将所构建的质粒转化到毕赤酵母GS115,然后进行筛选、培养和0.5%甲醇诱导表达,最后得到重组表达的牙鲆生长激素。

大菱鲆两种转基因方法的比较研究

对外源基因导入大菱鲆(Scophthat musmaximus)的两种方法进行了研究,采用经过改进的电脉冲方法以及哺乳动物细胞中常用的转染法导入外源基因,并对两种方法进行比较。电脉冲最佳导入条件为:脉冲电压为300V/cm,脉冲次数为5,外源DNA质量浓度为20mg/L;转染法的最佳操作时间为受精后50min。应用上述两种方法进行批量转基因鱼实验,得到外源基因的导入率分别为20%～28%和60%～70%。实验表明利用转染试剂jetPEI处理单细胞期的大菱鲆受精卵能得到较高的孵化率及较高的转基因效率。

室内培育条件下青岛文昌鱼性腺的年周期发育

青岛文昌鱼(Branchiostoma japonicus)采自于青岛沙子口海区,在室内进行周年培育。每月采集样品,经测量、固定以及组织切片观察,研究了其周年卵巢和精巢的发育规律。结果表明,室内培育的文昌鱼一周年内全长没有明显变化,仅体质量在繁殖期即其性腺发育至Ⅴ期时有明显增大(P<0.05=,精卵排空后则恢复原来体质量。文昌鱼1 a内在夏季6～7月繁殖1次,能自行排放卵和精子,排空后个体的卵巢或精巢,在适宜的条件下,经历Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期的发育过程,进行下一轮的性腺发育。文昌鱼精巢在Ⅳ期前先于卵巢发育,两者在Ⅳ期前发育都不同步,精巢处于Ⅳ期时间较长,一般从3月持续到5月,而卵巢处于Ⅳ期一般是在4月～5月。

测定巴豆甜菜碱的新方法及其在肉碱研究中的应用

通过对巴豆甜菜碱紫外吸收特性的研究，建立了一种快速、简便的检测方法。最大吸收波长为265nm，检测范围为0.25～3.5g/L。由于L-肉碱是由巴豆甜菜脱水酶作用下不对称水化合成的，转化液主要成分为肉碱与巴豆甜菜碱，而在265nm处肉碱的光吸收相对巴豆甜菜碱而言极低，因此265nm光吸收检测方法也可应用于肉碱在科研、生产上的快速测定，较一般的肉碱检测方法具有简便、经济的优点。

牙鲆Myogenin蛋白在大肠杆菌中重组表达的研究

采用大肠杆菌表达系统及pProEXTMHTc表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子myogenin基因进行了体外重组表达研究。通过对诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导温度的优化,确定了最佳诱导条件为:诱导温度31℃,IPTG终浓度0.6mmol/L,诱导时间2 h。在该条件下,重组蛋白表达量最高且是可溶性的。Myogenin融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础。

牙鲆NPY的体外表达及体内检测

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)被普遍认为是一种重要的促食因子,在调节鱼类的摄食行为方面起着至关重要的作用。为进一步研究牙鲆NPY蛋白的生物学功能,作者克隆了牙鲆NPY成熟肽序列(m-NPY)及含有信号肽的全长序列(f-NPY),利用原核表达系统分别进行体外重组表达,筛选出诱导剂IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L及最佳诱导时间3 h;此外,根据牙鲆NPY第49-64位氨基酸序列制备了多克隆抗体并通过Western blot验证该多抗能够有效检验重组NPY及牙鲆体内NPY的表达。研究结果为研究重组牙鲆NPY蛋白在牙鲆水产养殖产业中的应用及检测提供了依据。

肉碱脱水酶突变株的获得及其休止细胞反应条件的优化

对一株产肉碱脱水酶的菌株用溴化乙锭进行诱变 ,并经肉碱选择性培养基进行筛选 ,获得了一株高活性酶活的菌株 ,并进行了休止细胞转化巴豆甜菜碱为L 肉碱的反应条件的研究。实验确定休止细胞的最适反应温度为 30℃～ 32℃ ,pH8.1、0 .0 1mol L磷酸缓冲液 ,时间 8.5～ 10h。最适底物浓度为 6 0mg ml,最适休止细胞浓度为 6 0mg ml(湿重 ) ,产率 4 0 % (摩尔比 )。建立了休止细胞酶反应的表观米氏方程 ,其中Vm =0 .0 0 12 2 5mol (min·15mg菌体 ) ,Km =0 .0 4 0 114mol L。

青岛文昌鱼室内养殖群体和野生群体性腺发育的对比观察

本文采用组织学方法对比观察了青岛文昌鱼Branchiostoma japonicum室内养殖群体和野生群体在2009年11月底,及2010年1月中、3月底、5月底及7月初的性腺发育情况。结果表明,室内和野生群体的全长和体重在群体和个体水平上都没有显著差异(P>0.05),2010年7月初两个群体的体重有明显的增加。室内雌文昌鱼卵巢在2010年5月全部处于Ⅳ期,此时野生文昌鱼的卵巢仍有50%处于Ⅲ期;室内雄文昌鱼精巢的发育在2010年3月快于野生文昌鱼,其余月份室内和野生雌雄文昌鱼的性腺发育基本一致。这可能与2010年3月外海海水温度远低于室内海水温度有关。较外海环境更稳定的室内环境对文昌鱼的长期培育是否有利也是值得深入探究的。

重组牙鲆MRF4在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体分析(英文)

MRF4 是肌肉发生调节因子家族的一员,其对肌肉的发育有重要的调节作用. 对于养殖鱼类,生长速度是很重要的经济指标,而肌肉的发育对鱼类的生长非常重要. 制备了 MRF4 的多克隆抗体以分析在鱼类中 MRF4 的功能. 通过采用大肠杆菌表达系统及 pET-30 表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子 MRF4 进行了体外重组表达. 所得到的 MRF4 重组蛋白为可溶性的. 在自然条件下,经金属离子螯合柱纯化后,得到了电泳纯的融合蛋白,通过免疫新西兰大白兔制备 MRF4 的多克隆抗体. 蛋白质印迹分析显示:重组蛋白能被抗组氨酸标签的抗体及所制备的多克隆抗体识别,而且这一多克隆抗体能检测到内源性的 MRF4 蛋白,从而进一步证明了抗血清中含有 MRF4 的抗体. MRF4 融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础.

牙鲆RAG2基因的质粒构建和体外原核表达

将牙鲆(Paralichthys olivaceus)RAG2 cDNA序列插入到体外表达质粒pProEXTM HT,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21中进行体外表达,分析了诱导时间和IPTG浓度对重组蛋白产生量的影响,确定了最佳诱导条件为:诱导时间为3 h,IPTG诱导浓度0.2 mmol/L。本研究同时对RAG2重组蛋白的可溶性进行确认,并利用BD TALONTM金属亲和柱纯化了RAG2蛋白。本研究结果为进一步深入研究RAG2蛋白的生物学功能奠定了良好的基础。

牙鲆Follistatin基因启动子克隆与分析

为研究海水鱼中Follsitatin基因的组织表达特异性,利用PCR方法获得牙鲆Follistatin基因启动子并进行序列分析,用RT-PCR和显微注射方法研究Follistatin基因与肌肉发育的关系.结果表明,所获得的启动子含有USF、E47、MyoD、NF-Y等多种转录因子结合位点;在牙鲆成体组织中,Follistatin基因在体肾、肠、心脏、头肾、脾中有表达,而在肌肉和肝脏中没有表达;显微注射证明Follistatin基因参与了肌肉的早期发育.

牙鲆17β-HSD1基因克隆及其表达调控的初步研究

17β-羟类固醇脱氢酶1(17β-HSD1)的主要作用是将雌酮(El)转化为发挥功能的雌二醇(E2)。作者从牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺转录组数据库获得该基因的开放阅读框(ORF)序列,对其进行了验证,并分析了该基因在高温、外源性激素处理条件下性腺分化期性腺组织中的差异表达以及c AMP和转录因子(NR5a2和NR0b1)在精巢原代细胞中对该基因表达的作用。结果显示,牙鲆17β-HSD1基因的ORF为873bp,编码290个氨基酸,与其他鱼类的有很高的相似性。半定量RT-PCR结果表明,该基因在卵巢中高表达,精巢有少量表达,并且在雌性个体的鳃、头肾、肾、脾、胃和肠中也有表达。实时定量RT-PCR结果显示,该基因在卵巢或精巢分化的关键时期表达量较高;在精巢原代培养细胞中,外源信号分子c AMP及转录因子NR5a2可以显著下调17β-HSD1基因的表达(P<0.05),且呈现剂量效应,转录因子NR0b1对该基因的调控也与剂量有关。作者推测牙鲆17β-HSD1基因在性腺分化中起一定的作用,其表达受到调控因子的作用,这些结果将有助于增加对鱼类性腺分化和发育的认识。

大菱鲆周期蛋白依赖激酶基因cdk1、cdk6克隆及表达分析

通过同源克隆以及5′/3′RACE的方法扩增得到大菱鲆(Scophthalmus maximus)细胞周期蛋白依赖激酶基因cdk1和cdk6的全长c DNA序列,在m RNA水平上分析了它们组织表达特征,并对比分析了静水压处理对其胚胎期表达的影响。结果显示,cdk1基因全长c DNA序列为1281 bp(Gen Bank登录号:KP339306),编码区为912 bp;cdk6基因c DNA全长1400 bp(Gen Bank登录号:KT186374),编码区长度为978 bp。组织RT-PCR分析表明,cdk1基因表达具有广泛性,在性腺、肾脏等生长发育较快的组织中表达量较高;cdk6基因也在多个组织中表达,在性腺中表达量最高。通过Real time RT-PCR检测基因在胚胎中的表达水平发现,静水压处理组cdk1、cdk6在胚胎发育中,总体变化趋势与对照组类似。大菱鲆胚胎对照组中cdk1在原肠期以前相对神经胚期及以后时期表达量较高,静水压处理组基因表达变化与对照组趋势相同;对照组中cdk6在原肠期出现表达高峰,但静水压处理组在原肠期表达量相对较低。静水压处理对cdk1和cdk6的表达量的影响不同,这可能与基因还有除调控细胞周期的其他功能有关。为解析这两个基因在大菱鲆胚胎发育中的作用及其机制提供了参考。