人工合成HIV多肽的抗原性比较研究

为了建立检测HIV感染的敏感方法,根据文献报道的HIV-1和HIV-2基因组核苷酸序列、氨基酸序列,利用计算机分析其亲水性和抗原决定簇位点,自行设计合成了HIV-1gp41、gp120、P24和HIV-2pg36区域的10条多肽,以此多肽作抗原包被反应板,建立了检测HIV抗体的间接ELISA方法。

庚型肝炎病毒感染的初步研究

1995年Simons和Yoshiba分别报道,在非A-E型肝炎患者血清中检测出一种与肝炎有关的新的病毒RNA序列,即GBV-C RNA。并经基因克隆和DNA测序确定了其核酸及蛋白质一级结构。该病毒与Simons等在实验感染肝炎病人血清的狨猴(tamarin)血液中分离出的二种新病毒GBV-A和GBV-B不同。

1例地方非典型肺炎病例病理及病原学发现

目的 研究非典型肺炎 /严重的急性呼吸综合征 (SARS)的病理学特点 ,并探讨其病原 ,为临床防治提供依据。方法 采用光镜、透射电镜、组织化学和免疫组织化学技术方法 ,对 1例地方SARS死亡病例 (属国家卫生部公布的死亡病例之一 )进行观察研究。结果 该例SARS的肺部病变为严重的急性间质性渗漏出性炎 ,肺泡间隔为以淋巴细胞为主的炎细胞浸润 ,伴 2 0 %～ 30 %肺泡腔内透明膜形成 ;弥漫性肺泡上皮损伤 ,呈凋亡及脱失改变 ;光镜下偶见肺泡上皮内病毒包涵体样结构 ;组织化学染色显示 ,超过 30 %的肺泡上皮细胞病毒包涵体染色阳性 ,而衣原体包涵体染色阳性细胞不足 5 %。肺外器官主要表现为淋巴结、脾脏等免疫器官较广泛的出血坏死性炎 ,组织细胞反应性增生及噬红细胞现象 ,双侧肾上腺局灶性出血坏死性炎。电镜观察 ,肺组织内I、II型肺泡上皮细胞、血管内皮细胞 ,部分心肌细胞及淋巴结内组织细胞和淋巴细胞内均查见较多病毒样颗粒 ,大小为 10 0～ 15 0nm ,有光晕或花环状包膜 ,病毒样颗粒主要分布于细胞胞质内 ,少部分见于扩张的内质网内 ;肺外肝等组织内较易查见衣原体样颗粒 ,但肺泡组织内鲜见。死者本人及源自广东省的SARS患者恢复期血清IgM和 (或 )IgG与其肺组织呈阳性反应。结论 肺部明显的急性间质?

混合型生物人工肝治疗HBV相关慢加急性肝衰竭患者的初步探讨

目的利用自行构建的混合型生物人工肝系统,探讨其治疗HBV相关慢加急性肝衰竭患者的安全性和有效性。方法采用转染人肝再生增强因子(hALR)的HepG2细胞为生物材料,构建中空纤维生物反应器。以2009年5月-2011年8月住院的HBV相关慢加急性肝衰竭患者作为治疗对象,随机分为2组,每组10例,治疗组进行混合型生物人工肝治疗,对照组进行普通血浆置换治疗。两组间均数比较采用成组t检验,治疗前后比较采用配对t检验。结果治疗组10例患者中,7例经住院治疗临床好转出院,其余1例因肝性脑病死亡,1例因肝肾综合征死亡,1例出院后死于肝衰竭。对照组10例患者中存活5例,其余1例肝移植,4例因肝衰竭死亡。2组患者治疗前MELD评分分别为24.26±2.54及24.71±2.79,差异无统计学意义(t=1.971,P=0.064)。治疗组治疗3 d、1、4周MELD评分平均分别为21.71±2.92、22.10±4.46、19.90±5.43。跟踪随访1 a,治疗组和对照组患者血清甲胎蛋白平均值分别为14.24、11.32 ng/ml,腹部B超检查均未发现肝脏占位性病变。结论自行构建的混合型生物人工肝支持系统治疗HBV相关慢加急性肝衰竭患者具有一定安全性和有效性。

多肽抗体免疫富集-质谱法检测肝癌患者血清多肽标志物

血清多肽是癌症诊断信息的重要来源。近年来针对其复杂多样、丰度低、易降解的特点,多种多肽组技术得到快速发展。建立并优化了检测多肽标志物的免疫质谱方法,用于检测血清中的肿瘤多肽标志物。方法的线性范围为1～40pmol;检出限为0.5pmol;对5pmol合成肽5标准品平行检测3次的相对标准偏差(RSD)为9.5%。采用本方法检测出浓度为35.2nmol/L的血清多肽标志物。本方法适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。

SARS冠状病毒致多器官感染的在体研究

目的 研究体内SARS冠状病毒(SARS CV)感染的靶细胞 ,为SARS CV致多器官损伤寻找依据。方法 依据SARS CV基因序列 ,合成 3个代表性寡核苷酸探针 ,采用核酸原位杂交和透射电镜观察相结合的方法 ,对 2例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例进行系统的SARS CV定位、分布及数量研究。结果 SARS病例多器官组织细胞中观测到SARS CV。肺组织内SARS CV主要位于终末细支气管黏膜上皮 ,Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮 ,部分巨噬细胞和毛细血管内皮细胞及个别淋巴细胞胞质内 ,原位杂交示呈全浆型或包涵体型分布 ,肺组织内平均阳性细胞数为每个 2 0 0倍视野 80± 2 5个 ;电镜下病毒颗粒大小为 10 0～ 15 0nm ,低电子密度核心 ,日晕或花环状包膜 ;肾组织内大约 15 %肾小管上皮细胞呈SARS CV阳性 ,以髓质较多 ,肾上腺组织内少部分实质细胞及窦状毛细血管内皮细胞内呈阳性杂交信号 ;胃、肠黏膜上皮及腺上皮细胞内检测到SARS CV颗粒 ,其中浅表 2 / 3黏膜检出率较高 ;电镜下少数心肌细胞内可见较多SARS CV颗粒 ,原位杂交示阳性心肌细胞呈灶性分布 ;胸、腹腔淋巴结内组织细胞 ,窦内皮细胞及极少数淋巴细胞内见SARS CV ;此外 ,少数睾丸曲细精管上皮及间质细胞内检测到SARS CV。结论 SARS CV在体内存在多种靶细胞 ,SARS CV可致以肺脏为?

严重急性呼吸综合征患者血清中存在抗肺组织抗体

目的 :建立特异性的检测严重急性呼吸综合征 (SARS)相关抗体的血清学方法。 方法 :制备 SARS患者肺组织包被抗原 ,采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测 SARS患者血清中特异性抗体。 结果 :SARS患者血清中存在 SARS相关的抗人肺组织抗体 ,其阳性率达 92 .86 %(2 6 / 2 8) ,正常献血员为 11.4 3%(12 / 10 5 ) ,统计学分析表明 ,SARS相关抗体的检出率在患者和献血员之间存在明显差异。 结论 :SARS患者血清中存在抗肺组织抗体 ,该抗体的存在提示机体免疫反应可能参与了疾病病理损伤过程 ;检测该抗体可能有助于

乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义

目的:通过检测患者血清乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、HBV DNA以及乙肝病毒标志物(HBV M),探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义．方法:采用荧光定量PCR方法对254份HBV 感染血清的HBV DNA进行检测,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对HBV-LP、 Pre-S1蛋白及HBV M进行检测．结果:大蛋白的检出结果与HBV DNA的检出结果无明显差异．不同HBV M模式的HBV DNA与HBV-LP的检出结果均无显著性差异． HBV DNA拷贝数的对数值与HBV-LP表达具有相关关系(r=0．945,P<0．001),HBV DNA拷贝数的对数值变化的89%可以用HBV-LP A值为解释变量的线性回归模型来解释．结论:HBV-LP能够反应HBV的复制情况,血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性．

第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价

目的评价HIV（1＋2）抗原抗体联合检测试剂，了解其是否适合于血液筛查。方法用HIV抗原抗体联合检测试剂和第3代HIV抗体检测试剂平行检测HIV感染或疑似感染样本205份、吸毒人群样本1486份、有既往献血史人群样本427份、献血和献浆人群样本7237份和丙型肝炎患者样本176份，对两种试剂检测结果不一致样本进行HIV p24抗原或RNA的检测，并分析其特异性和灵敏度。结果联合检测试剂检测HIV p24抗原的分析灵敏度为（2．5～5．0）U／ml，检测HIV抗体的分析灵敏度与第3代HIV抗体检测试剂相当。共检测出8996份HIV抗体阴性样本和503份HIV抗体阳性样本，与第3代试剂相比其特异为99．67％，灵敏度为100％，而且2份HIV感染“窗口期”样本也能检出。结论该试剂在增加HIVp24抗原检测的情况下，对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有降低，可用于血液筛查以减少“窗口期”样本传播HIV的风险。

中药丁香体外抑制人巨细胞病毒作用研究

中药丁香体外抑制人巨细胞病毒作用研究１０００３９北京解放军第３０２医院刘洪貌盼勇洪世雯鞠连才白雁平关键词植物，药用；人巨细胞病毒；体外抗病毒作用中国图书资料分类号Ｒ２８２．７人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染播及广泛，它可引起肺炎、肝炎、胃肠炎、新生儿疾病...

谷胱甘肽S转移酶的研究进展及其与肿瘤的相关性

药物代谢是细胞解毒机制的重要组成部分之一,其中主要涉及两种酶:Ⅰ和Ⅱ相药物代谢酶。谷胱甘肽S转移酶(GST)是一种重要的Ⅱ相药物代谢酶,可与Ⅰ相药物代谢酶一起催化药物形成高水溶性终产物。所以,GST能够抵御内源性和外源性亲电子物质的损害,并在抗肿瘤过程中发挥重要作用。编码GST的基因至少分布在7条染色体上,构成了一个超基因家族,编码具有GST活性的蛋白。GST有许多功能,传统观点认为,细胞中的GST可发挥防御内、外源性毒性化合物损害的作用。另外,GST在肿瘤细胞中高表达,可介导谷胱甘肽结合至大量抗癌药物底物上,导致肿瘤耐药的发生。

我国部分地区1049例职业献血员庚型肝炎病毒感染状况的研究

应用庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽抗原和ＰＣＲ引物，对我国部分地１０４９例职业献血员进行了ＨＧＶ抗体和ＨＧＶＲＮＡ检测。抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性率为３．５３％（３７／１０４９）。５条抗原多肽反应性不同，检测结果有交叉和重叠。其特异性较好，除ＳＰ２外，阻断率均在９０％以上。３７例抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性者中，ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４３．２４％（１６／３７）。证明在我国职业献血员中存在着较高的ＨＧＶ感染率。

军队医院医疗保障综合评价体系设计与应用

目的利用多种综合评价方法对某区域随机抽取的18所军队医院的医疗保障水平进行评价,同时验证四种综合评价方法的科学性和适用性。方法通过文献分析法和系统分析法确定了所要研究的指标体系的维度。通过变异系数确定各指标的权重,采用综合指数法、加权TOPSIS法、功效系数法和加权秩和比法对军队医院医疗保障水平进行综合评价。结果确定了评价指标的四个维度:保障指标、管理指标、质量指标和同病同治指标,建立了包含21个指标的评价体系。四种方法评价结果具有较高的一致性,2013年该区域医疗保障水平较好的医院编号是15、3、5,较差的医院编号是12、18、10。结论四种方法联合应用,结果可靠,应用价值较大。

96例急性乙型肝炎患者HBV多聚酶区的耐药变异分析

目的检测未接受过核苷(酸)类似物(NA)治疗的急性乙型肝炎患者感染的HBV是否存在耐药变异。方法收集96例急性乙型肝炎患者住院早期血清,提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV反转录酶(RT)全基因,对PCR产物进行DNA双向测序,对RT/S基因序列进行分子进化树分析反基因分型,对rt80、rt173、rt180、rt181、rt184、rt202、rt204、rt236和rt250等位点上的耐药相关变异进行分析,并用克隆测序法进行验证,每个样本测定10～20个克隆。结果用直接测序法检出NA耐药变异8例(8.3%),C型6例,B型2例。其中6例为拉米夫定(LAM)耐药变异,包括4例rtM204I、1例rtL80I+rtM204I和1例rtL180M+rtM204I;另2例检出与阿德福韦酯(ADV)耐药相关的rtA181V变异。变异株多数与野生型病毒株共存。克隆测序法的结果与直接测序法的结果大体相符,部分样本中有2种或多种耐药变异株共存,其中1例患者的样本中除LAM变异株外,还检出了ADV和恩替卡韦(ETV)耐药变异株,变异形式分别为rtA181T+rtN236T和rtL180M+rtS202G+rtM204V。结论未接受过NA治疗的急性乙型肝炎患者可以感染NA耐药株病毒,NA耐药病毒可以在人群中传播引起急性乙型肝炎,变异病毒的传播致病不只局限于LAM耐药株。

抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定

目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2

利用减毒沙门菌递送的柯萨奇病毒A16型VP1基因重组质粒的构建和鉴定

目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表达情况及抗原活性,并将该质粒通过电转化构建重组减毒伤寒沙门菌。结果:构建了表达CoxA16 VP1蛋白的重组质粒,转染vero细胞后检测到CoxA16 VP1蛋白的表达并具有抗原活性;获得能稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌。结论:成功构建稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,为口服CoxA16疫苗的研究打下了基础。

成人麻疹基础研究进展

麻疹是由麻疹病毒引起的呼吸道传染病，在20世纪50年代以前，每隔2—3年会有1次麻疹大流行，人群中易感者超过40％即可引起大流行。自1963年世界各国开始推广使用麻疹疫苗，麻疹的流行情况一度得到了控制，在21世纪最初10年中地球上全面消灭麻疹已成为世界各国奋斗的目标。但是从20世纪70年代以来，麻疹发病年龄上升，成人麻疹逐渐增多，增加了人群感染的可能，为全面消灭麻疹增加了难度。

免疫质谱法检测肝癌血清多肽标志物

建立免疫亲和富集分离与质谱分析相结合的免疫质谱法用于血清多肽标志物pep5的检测。多克隆抗体与蛋白A琼脂糖颗粒偶联用于捕获pep5,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测标志物。本方法的线性范围为1～48 nmol/L,检出限0.2 nmol/L;回收率为93.0%～103.1%,相对标准偏差(RSD)为6.4%～11.8%;反复冻融3次pep5,检测结果稳定;检测临床肝癌/正常血清样本灵敏度为78.0%、特异度为90%。该方法方便、快速、准确,适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。

包涵体蛋白3种纯化方法的比较

目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。