中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因的克隆及序列分析

根据GenBank中公布的牛磷脂酶C zeta(PLCζ)基因序列设计引物,通过RT-PCR方法对中国美利奴绵羊的PLCζ基因进行扩增,以了解其分子生物学特征。测序表明,美利奴绵羊PLCζ基因开放阅读框全长1 905bp,共编码634个氨基酸。生物信息学分析所扩增的中国美利奴绵羊PLCζ基因具有典型的EF-hand钙结合结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶X结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Y结构域、蛋白激酶C2保守区域,其170和215氨基酸位点为组氨酸活性位点。与牛、猪、犬、人、猴、鼠、兔和原鸡的PLCζ基因核苷酸同源性分别为97.32%、88.19%、73.93%、81.42%、83.05%、73.65%、72.42%和65.07%。氨基酸序列的系统进化树表明中国美利奴绵羊PLCζ基因与牛的亲缘关系最近。

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究

旨在构建PLCζ真核表达载体,初步研究其在体细胞系中的表达特性。本研究用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,鉴定无误后,将构建了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ转染293T细胞和绵羊成纤维细胞,在倒置荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察重组质粒在细胞中的表达和分布。经酶切与测序证明,本试验成功的构建了pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体,并且成功与绿色荧光蛋白融合表达。本试验实现了pEGFP-N1-PLCζ在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达,这将有利于进一步通过核移植来研究其重组蛋白对卵母细胞的激活作用。

猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析

为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。

结核分枝杆菌CFP10基因真核表达质粒的构建及表达

为研究结核杆菌毒力因子CFP10在结核杆菌感染细胞过程中的功能,本研究根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的CFP10基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到CFP10基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将CFP10基因亚克隆至pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒pEGFP-N1-CFP10,分别转染293T细胞和U937细胞。经western blot分析表明CFP10-EGFP融合蛋白在293T细胞和U937细胞中均获得了表达。通过激光共聚焦显微镜观察显示在293T细胞和U937细胞,CFP10-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质。本研究为进一步研究毒力因子CFP10在感染宿主细胞中的作用奠定了基础。

亚临床酮病奶牛血液生化指标的测定

检测荷斯坦奶牛亚临床酮病血清中的生化指标,研究新疆亚临床酮病奶牛血液中生化指标的特点。选择产后1d^15d的荷斯坦亚临床酮病奶牛,通过应用自动生化分析仪、紫外分光光度计和酶联免疫分析法测定血清中BHBA、NEFA、GLU、BUN、TP、ALB、AST、ALT、TBI、TG、CT含量。结果表明,血清中GLU、ALB、CT的含量极显著低于对照组水平(P<0.01);血清中BHBA、BUN、NEFA、TG、AST和ALT含量极显著高于对照组水平(P<0.01);血清中TP显著低于对照组水平(P<0.05)。血清中TBI显著高于对照组水平(P<0.05)。由此提示,血清中各生化指标的含量均高于报道水平,可将血清中BHBA的含量1.40mmol/L作为诊断亚临床酮病的标准。血清中GLU、TG、NEFA等的含量可作为诊断亚临床酮病的辅助参考指标。

酮病对荷斯坦奶牛抗氧化系统和一氧化氮含量的影响

[目的]研究新疆荷斯坦奶牛酮病血清中的部分生化指标的变化及其酮病致病机理的探讨。[方法]以新疆荷斯坦奶牛为试验动物,用酮粉法和改良的水杨醛检测法对其血清进行检测,应用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;应用DTNB显色法测定血清中GSH-Px活力,应用黄嘌呤氧化法测定血清中T-SOD活力,应用硫代巴比妥酸法测定血清中MDA含量。[结果]酮病奶牛血清中GSH-Px活力极显著降低(P<0.01),T-SOD活力显著降低(P<0.05),血清中MDA含量显著增高(P<0.05);对照组奶牛血清中的NO含量和NOS活性均显著高于阳性组。[结论]酮病不但影响奶牛的抗氧化系统而且也会降低一氧化氮含量和一氧化氮酶的活性,对于揭示奶牛酮病的发生机理具有重要意义。

湖羊FecB基因在新疆细毛羊胎儿成纤维细胞中的表达

为培育携带FecB多胎基因的高繁殖率新疆细毛羊,本研究提取了湖羊卵巢的总RNA,在此基础上反转录为cDNA,通过PCR扩增得到了湖羊的FecB基因,再与pMD19-T载体连接,构建了pMD19-T-FecB重组质粒。通过双酶切与真核表达载体pEGFP-N1连接,得到了pEGFP-N1-FecB真核表达载体。经测序与酶切证明,成功构建了pEGFP-N1-FecB真核表达载体,并转染新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,通过药物筛选获得了表达湖羊FecB基因的阳性新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,为培育高繁殖率的新疆细毛羊奠定基础。

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达

构建美利奴绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化,为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,亚克隆到原核表达载体pCzn1中,导入Arctic Express TM(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,收样后进行SDS-PAGE电泳或Western blot检验PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示,重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在Arctic Express TM(DE3)表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74ku的融合蛋白,符合预期大小。成功构建pCzn1-PLCζ原核表达载体,表达并纯化了其融合蛋白,Western blot试验表明其蛋白分子的完整性良好,这将有利于对PLCζ蛋白进行深入的研究。

对教师行政奖励的思考

对教师行政奖励的思考贺志锐１９９２年，国家教委颁发的《教师和教育工作者奖励暂行规定》，是教育系统授奖的法规性文件。它的贯彻实施，进一步发挥了行政奖励的激励和导向功能，有力地推动了教育改革的发展，带来了大面积教学质量、教学管理的提高，激发了教师以及教育...

血清铅与冠心病关系的meta分析

目的探讨冠心病患者的血铅浓度和一般人群是否有差异。方法检索纳入国内外有关微量元素与冠心病关系的文献4篇,采用meta分析的方法,应用随机效应模型进行综合定量分析,计算合并效应值及可信区间,利用倒漏斗图定性评价发表性偏倚。结果合并效应量等于0.03,总的可信区间[0.01 0.06],冠心病患者血铅浓度要高于对照组。由于meta分析结果不符合要求,所以未进行倒漏斗图分析。结论铅为本次研究的危险因素,提示微量元素铅和冠心病间可能存在关联。