急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险因素研究

目的探讨急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险因素。方法选取2009年10月—2016年1月云南省第一人民医院收治的急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤患者167例,根据手术结果分为手术成功组(n=131)和术后死亡组(n=36)。采用回顾性研究方法,收集两组患者的一般资料[包括性别、年龄、是否吸烟、是否行经皮冠状动脉介入术(PCI)、是否行胸部手术及有无慢性阻塞性肺疾病(COPD)、外周血管疾病、胸痛、恶心/呕吐、腹痛、低血压]、实验室检查指标(包括血红蛋白、血小板)及术中停循环时间、弓部处理方式。结果两组性别、吸烟率、PCI率及外周血管疾病、恶心/呕吐发生率间差异无统计学意义(P>0.05),而年龄、胸部手术率及COPD、胸痛、腹痛、低血压发生率间差异有统计学意义(P<0.05)。两组血红蛋白水平间差异无统计学意义(P>0.05),而血小板计数及其分布间差异有统计学意义(P<0.05)。两组术中停循环时间分布及弓部处理方式间差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、胸部手术、胸痛、腹痛、低血压、血小板计数、术中停循环时间、术中弓部处理方式是急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡的风险因素(P<0.05)。结论患者的年龄越大,既往行胸部手术,术前出现胸痛、腹痛和低血压,术前血小板计数偏低,术中停循环时间延长及弓部采用三分支吻合方式增加了急性Stanford A型主动脉夹层动脉瘤手术死亡风险。

基于模板保留的快速并行细化算法

快速并行算法(FPA)是经典算法中比较好的一种细化算法,但其存在固有缺陷,可能产生信息丢失。为了克服这个缺点,首先验证了FPA映像算法,在此基础上,提出了FPA重合算法,最后为了减少计算时间和冗余信息,提出了基于模板保留的FPA算法。实验结果表明,基于模板保留的FPA算法运行速度快,对手写体汉字能很好地得到中心骨架,没有断点,较好地保持了原图像的拓扑结构,且细化为只有一个像素宽的图像。

过表达GATA-4骨髓间充质干细胞分泌的外泌体促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

背景:前期证明,过表达心脏基因转录因子GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体(BMSCs GATA-4-exosome)可以促进BMSCs向心肌样细胞分化,提示其可以修复心肌梗死,另外还发现BMSCs GATA-4-exosome中及心肌梗死局部心肌组织中有miRNA-673-5p明显高表达且功能涉及细胞分化,可能是BMSCs GATA-4-exosome修复心肌梗死的关键分子。目的:探讨BMSCs GATA-4-exosome促进BMSCs向心肌样细胞分化的分子调控网络。方法:在小鼠BMSCs培养体系内加入miRNA-673-5p模拟物(miR-673-5p-mimic)作为实验组(BMSCs miR-673-5p-mimic),将BMSCs GATA-4组、BMSCs GATA-4-空载体组、BMSCs组、BMSCs miR-673-5p-inhibitor组作为混杂因素对照组,提取各组分泌的外泌体与BMSCs直接共培养24 h,采用免疫荧光定性检测和RT-PCR定量检测各组BMSCs中心肌特异性分子α-actin、Desmin、cTnT、Cx43的表达。根据microRNA靶基因预测结果,采用Western blot检测miRNA-673-5p对应靶基因TSC-1、ERK1/2及Mef2c转录蛋白表达。结果与结论:BMSCs miR-673-5p-mimic-exosome+BMSCs组荧光强度最强,心肌细胞特异性分子α-actin、Desmin、cTnT、Cx43的表达最高(P<0.05),TSC-1的表达最低(P<0.05)。结果表明BMSCs GATA-4-exosome通过miRNA-673-5p抑制TSC-1蛋白表达促进BMSCs向心肌样细胞分化。

骨髓间充质干细胞SCA-~1+/CD45^+/CD31^+亚群的归巢能力

背景:自2003年,美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞各亚群在心肌修复中的归巢能力。方法:以小鼠心肌干细胞表面分化抗原筛查小鼠骨髓间充质干细胞,再以CD45、CD31为标准分选得到小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群。采用Transwell小室检测各亚群组细胞的归巢能力。将各亚群细胞注入心肌梗死48 h小鼠体内,注射后48,96 h及7 d处死小鼠取其心脏完成小动物活体成像并检测其荧光强度。结果与结论:小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1+/CD45+/CD31+亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h,96 h及7 d时SCA-1+/CD45+/CD31+亚群平均荧光强度优于其他亚群,SCA-1+/CD45+/CD31+亚群迁移率最高,说明SCA-1+/CD45-/CD31-群体有向受损心肌归巢的趋势。

支气管动脉介入治疗中脊髓损伤病例分析

通过对284例次的肺癌支气管动脉介入治疗的方法和疗效的分析，详细论述了脊髓损伤，尤其是高位截瘫并发症的成因及预防方法，为肺癌支气管动脉介入治疗的安全化、规范化打下了基础.

过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞通过分泌外泌体增强其抗凋亡能力的研究

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否通过分泌外泌体(Exosome)增强其细胞抗凋亡能力,进而提高心肌梗死后心功能。方法 2017年1—12月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠45只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs构建过表达GATA-4小鼠BMSCs并加入基因开启剂强力霉素(DOX),而后采用Exo Quick-TC提取BMSCs分泌的Exosome,并检测Exosome纯度、电镜下观察其形态。体外实验:与过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为A组(体外),与空载体BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为B组(体外),与BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为C组(体外),低氧(1%)无血清条件下培养的心肌细胞为D组(体外),正常条件下单独培养的心肌细胞为E组(体外),各组均培养48 h,后采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C表达水平。体内实验:选取12只小鼠建立心机梗死模型,造模成功48 h后经尾静脉注射80 000μg的Exosome,其中A组(体内)注射过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome,B组(体内)注射空载体BMSCs分泌的Exosome,C组(体内)注射BMSCs分泌的Exosome,另取3只心肌梗死未处理小鼠作为D组(体内),3只正常小鼠作为E组(体内)。于注射Exosome后48 h采用心脏超声仪(PHILIPS EPIQ 7C)评估各组小鼠心功能。完成心脏彩超后采用原位免疫组化法评估心肌梗死小鼠心脏凋亡细胞数量。结果 Exosome表达量为0.272 5,Exosome纯度为5.25×108个,电镜可见Exosome大小40~100 nm。A组(体外)细胞凋亡率低于B组(体外)、C组(体外)、D组(体外),但高于E组(体外)(P<0.05)。A组(体外)Caspase 8、细胞色素C表达水平低于B组(体外)、C组(体外)、D组(体外)及E组(体外)(P<0.05)。A组(体内)小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)前后差值高于B组(体内)、C组(体内)、D组(体内)及E组(体内)(P<0.05)。A组(体内)小鼠心肌细胞凋亡细胞数量高于E组(体内),而低于B组(体内)、C组(体内)、D组(体内)(P<0.05)。结论过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome可以通过增强BMSCs抗凋亡能力,进而有效改善心肌梗死后小鼠的心功能。

小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群在心肌梗死中的作用

目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)亚群SCA-1+/CD45+/CD31+在心肌修复中作用。方法:以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测mBMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到四个亚群。各亚群及未分选群和心肌细胞共培养后检测α-actin、Cx43、Desmin、cTnI的表达。将SCA-1+/CD45+/CD31+注入心梗小鼠体内完成心功能测定及心脏DIR成像检查。结果:各组均表达心肌特异性分化抗原。SCA-1+/CD45+/CD31+表达的量更多。心脏彩超及心脏DIR成像提示SCA-1+/CD45+/CD31+改善心功能方面优于其他亚群及未分选群。结论:mBMSCs为一多克隆的细胞群体。SCA-1+/CD45+/CD31+向心肌定向分化及改善心功能方面优于其他亚群。

过表达心肌细胞转录因子骨髓间充质干细胞分泌外泌体抗心肌细胞凋亡的分子调控机制

目的过表达心肌细胞转录因子(GATA-4)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体(BMSC^ATA-4-exosome )可能是修复心肌损伤的关键分子,文章探讨过表达GATA-4小鼠BMSC分泌外泌体(BMSC^ATA-4exosome)抑制心肌细胞凋亡的分子调控网络。方法在过表达GATA-4小鼠BMSC培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome与心肌细胞在低氧无血清条件下培养24h作为实验组(过表达miR-330-3p组),将过表达GATA-4组、空载体组、BMSC组作为混杂因素对照,同时将在低氧无血清条件下单独培养24h的心肌细胞及在正常条件下单独培养24h的心肌细胞作为阳性及阴性对照组。采用流式细胞技术检测各组心肌细胞的凋亡率。采用RT-PCR检测各组心肌细胞内miR-330-3p的表达量。并根据microRNA靶基因预测结果采用Western blot检测miR-330-3p对应靶基因Ap2m1及Cnot4转录蛋白表达。结果超过90%小鼠的BMSC表达CD29(表达率为99.71%)、CD44(表达率为97.28%)和SCA-1(表达率为99.4%),仅0.1%的细胞表达CD11b。过表达miR-330-3p组心肌细胞早期凋亡率[(7.90±0.34)%]较阴性对照组[(2.30±0.09)%]高,但较阳性对照组[(51.48±0.40)%]、BMSC组[(18.32±3.03)%]、空载体组[(16.99±2.93)%]、过表达GATA-4组[(10.22±0.35)%]明显降低(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内的miR-330-3p的表达[(396.10±1.02)%]较阴性对照组[(1.37±0.33)%]、阳性对照组[(0.26±0.32)%]、BMSC组[(1.40±0.42)%]、空载体组[(1.41±0.27)%]、过表达GATA-4组[(3.80±0.62)%]明显增高(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内Ap2m1、 Cont4的表达较阴性对照组、阳性对照组、BMSC组、空载体组、过表达GATA-4组明显下降(P<0.05)。结论过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体通过miR-330-3p抑制Ap2m1蛋白表达抗心肌细胞凋亡。

过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞修复心肌损伤的效果研究

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4-BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX),采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染72 h后过表达GATA-4-BMSCs中GATA-4 m RNA表达水平,并以未转染为阴性对照组。建立小鼠心肌梗死模型,经尾静脉注射BMSCs(n=3)、空载体-BMSCs(n=3)、过表达GATA-4-BMSCs(n=3)500μl,并将心肌梗死未处理组(n=3)及正常小鼠(n=3)同时给予喂食含有DOX的液体作为对照1组及对照2组。通过心脏彩超检测给予干预措施72 h后心功能改善情况。选取正常小鼠正常喂养(n=3)作为对照3组。采用小动物活体成像检测心脏区域荧光强度,番茄凝集素评估心肌梗死局部心肌血管数量,免疫组化检测心肌梗死局部C-kit阳性细胞数量。结果小鼠BMSCs CD29表达率为98.0%,CD44表达率为100.0%,CD11b表达率为0.1%,SCA-1表达率为99.5%。过表达GATA-4-BMSCs组GATA-4 m RNA表达水平为(78.17±1.32),高于阴性对照组的(0.57±0.34)(t=2.576,P<0.05)。各组小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)变化值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组EF、FS改善幅度高于对照1组、对照2组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05)。各组小鼠心脏区域荧光强度、心肌血管数量、C-kit阳性细胞数量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组心脏区域荧光强度、C-kit阳性细胞数量多于对照1组、对照2组、对照3组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05),心肌血管数量多于BMSCs组和空载体-BMSCs组。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强"归巢"效应、促进心肌梗死局部血管增生、有效动员C-kit阳性细胞修复心肌损伤。

过表达GATA-4骨髓间充质干细胞以外泌体修复心肌损伤的相关microRNA

背景:GATA-4是与心脏发育特异相关的锌指样转录因子,前期实验发现过表达GATA-4的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosome)与BMSCs共培养时可以促使BMSCs表达出更多的心肌特异性抗原。当其与心肌细胞在低氧环境下培养可以抑制心肌细胞的凋亡。目的:探讨过表达GATA-4的BMSCs分泌exosome修复心肌损伤的相关microRNA,从分子水平对其生物学效应进行探讨。方法:(1)通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4小鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素,然后采用ExoQuick-TC法提取分泌的exosome;(2)实验设5组:GATA-4-BMSCs-exosome+BMSCs共培养组、空载体-BMSCs-exosome+BMSCs共培养组、BMSCs-exosome+BMSCs共培养组、BMSCs单独培养组、心肌细胞单独培养组。培养24 h采用Q-PCR定量检测心肌特异性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin的表达;(3)实验设5组:GATA-4-BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、空载体-BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、BMSCs-exosome+心肌细胞共培养组、心肌细胞单独培养组,在低氧(体积分数为1%)无血清培养条件下培养24 h诱导细胞凋亡。以正常条件下单独培养的心肌细胞作为阴性对照组,采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;(4)采用Agilent microRNA芯片检测过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的microRNA。结果与结论:(1)Q-PCR和流式细胞技术检测结果显示:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以有效促进BMSCs向心肌细胞转化且具有极强的抗凋亡能力;(2)Agilent microRNA芯片检测结果显示:涉及细胞分化的关键microRNA:mmu-miR-199a-3p(microRNA为上调);mmu-miR-1894-5p(microRNA为下调)。涉及细胞抗凋亡的关键microRNA:mmu-miR-199a-3p、mmu-miR-20a-5p、mmu-miR-330-3p,这3个基因均为上调。其中mmu-miR-199a-3p即涉及细胞分化又涉及细胞抗凋亡,为重点首先需要验证的microRNA。

过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞改善异位移植心脏存活

目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)改善大鼠腹腔异位移植心脏的存活机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO基因转染大鼠骨髓间充质干细胞构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞。建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞处理:(1)利用超声心动图检测移植心脏心功能变化。(2)采用小动物活体成像系统评估移植心脏局部荧光强度。(3)再取各组受体大鼠的脾脏,采用流式细胞技术检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、Treg细胞的表达情况。(4)取各组移植心脏,采用HE染色评估炎性细胞浸润情况。(5)利用液相芯片检测各组血清IL-1ɑ、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3因子的变化情况。结果:(1)给予相应细胞处理,可见过表达IDO-BMSCs处理后2 d移植心脏的EF、FS较其余各组有提高。(2)采用小动物活体评估可见过表达IDO-BMSCs组移植心脏局部荧光强度最强。(3)给予干预措施后2 d可见过表达IDO-BMSCs组脾脏细胞CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达降低,而CD274、Treg细胞的表达增高。(4)采用液相芯片检测各组提取血清可见在2 d时,过表达IDOBMSCs组血清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18是降低的;IL-10、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3表达量是升高的。HE染色证实过表达IDO-BMSCs组炎性细胞浸润少于其他组。结论:过表达IDO的BMSCs可以通过有效调节免疫DC、T细胞及细胞因子,从多个免疫层面改善移植心脏存活。

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。

直视下冠脉结扎法制做小鼠心肌缺血模型初步探讨

目的探讨如何成功建立心肌梗死小鼠模型,减少动物病死率。方法 39只C57BL/6小鼠,随机分为两组,实验组28只小鼠,对照组(即假手术组)11只小鼠。实验组采用直视下结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死,对照组小鼠除不结扎冠状动脉外,其余步骤同实验组。分析各操作过程中的细节问题对小鼠死亡率的影响。结果左前降支冠脉结扎成功率为100%。28只心肌梗死组小鼠,术中死于心室颤动和心跳呼吸骤停4只,术后7 d内死于心力衰竭2只,死于肺部感染2只,存活4周小鼠共20只,存活率为71.4%。11只假手术组小鼠全部存活。结论采用较常用的冠状动脉结扎制作心肌梗死模型的方法,并在手术过程中作了相应的改进,该方法操作简单、模型成功率高,结果可靠,为进一步研究心肌梗死,奠定了坚实的基础。

成人法洛四联症60例外科治疗体会

目的:探讨成人法洛四联症(TOF)外科手术治疗。方法:成人TOF外科治疗60例,全组均有右心室流出道狭窄,15例肺动脉瓣狭窄,其中4例重度狭窄行成型术不满意或无法成型,而行跨环补片,2例因冠状动脉畸形而行(20～22)号牛颈静脉带瓣管道。结果:本组术后死亡5例,病死率8.3%。死于严重低心排出量综合征2例,无法停机2例,灌注肺1例。结论:成人TOF手术效果确切,患者术后生活质量明显改善。

感染性心内膜炎患者手术死亡相关风险因素研究

目的探讨感染性心内膜炎(infecfine endocarditis,IE)手术死亡风险因素。方法选取2008年1月至2018年1月云南省第一人民医院收治的IE患者80例,根据手术结果分为手术成功组(n=60)和术后死亡组(n=20)o采用回顾性研究方法,收集两组患者的一般资料(包括性别、年龄,有无外周血管疾病,是否吸烟,是否行胸部手术,有无腹痛、胸痛、恶心及低血压)、实验室检查结果及术中停止循环时间。结果最终入选80例IE患者,其中手术成功组60例(75%),术后死亡组20例(25%)。两组年龄[手术成功组(46.2±0.3)岁,术后死亡组(51.3±1.9)岁,P=0.013]、胸痛发生率(手术成功组18.3%,术后死亡组90.0%,P=0.000)、腹痛发生率(手术成功组8.3%,术后死亡组55.0%,P=0.000)、低血压发生率(手术成功组3.3%,术后死亡组75.0%,P=0.000)及血小板计数(PLT)发生率(手术成功组76.7%于60×10^9/L﹤PLT≤150×10^9/L,术后死亡组75.0%于43×10^9/L≤PLT≤59×10^7L,P=0.000)、术中停止循环时间(手术成功组85%60 min矣停止循环时间名120 min,术后死亡组85%120 min<停止循环时间专250 min,P=0.000)比较差异有统计学意义(P<0.05);而性别、吸烟率及外周血管疾病、恶心/呕吐发生率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistic回归分析结果表明,年龄(B=-0.0441,P=0.0021)、胸痛(B=-0.0321,P=0.0000)、腹痛(B=-0.0125,P=0.0311)、低血压(B=-0.2818,P=0.0312)、PLT(B=-0.1631,P=0.0025)、停止循环时间(B=-0.2513,P=0.0000)与死亡有独立的关联。结论感染性心内膜炎患者的年龄>60岁,术前出现胸痛、腹痛和低血压,术前PLT越低,术中停止循环时间延长,均能增加手术死亡风险。

GATA-4在心肌损伤修复中的作用机制研究进展

GATA-4是调控心脏基因表达的重要转录因子,参与了心脏正常发育、功能基因表达和心肌肥大的病理过程。GATA-4在心脏发育的早期起重要作用,抑制胚胎干细胞中GATA-4的表达可阻断胚胎干细胞向心肌细胞分化,增强GATA-4的表达则增加胚胎干细胞向心肌细胞分化。并且GATA-4还具有抗细胞凋亡的作用,GATA-4在心肌肥大期间成体心肌细胞的凋亡过程中具有重要的作用。通过增加促存活基因的表达,可改善细胞的存活。其在心肌损伤修复、缺血性心脏病治疗等方面成为目前研究的热点。

瓣膜置换手术同期直视射频消融治疗房颤影响因素分析

目的探讨瓣膜置换手术同期直视射频消融治疗房颤影响因素。方法2010年1月至2013年12月共完成100例瓣膜疾病手术治疗，同时术中直视射频消融治疗房颤，术后随访6—33个月，平均（19．8±8．7）个月，其中70例患者维持窦性心率，304例患者再次转为房颤心率。回顾两组患者的左房直径、房颤病史的长短、年龄、性别、随访时间、瓣膜置换类型。结果两组患者年龄、性别、随访时间、瓣膜置换类型均无显著性差异（P〈0．05）；两组患者左房直径、房颤病史的长短具有显著性差异（P〈0．05），窦性心律组的左房直径、房颤痛史均较房颤心律组明显较小、较短。结论左房直径（〈60mm）、房颤病史的长短（〈7年）是影响房颤治疗效果的主要因素。

外泌体对过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化能力促进作用的研究

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过外泌体促进BMSCs向心肌细胞分化的能力。方法 2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX)。采用Exo Quick-TC提取分泌的外泌体。将GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(A组)、空载体-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(B组)、BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养(C组)、BMSCs单独培养(D组)及小鼠心肌细胞单独培养(E组)72 h,采用荧光染色定性检测和反转录聚合酶链式反应(qPCR)定量检测肌钙蛋白T(cTnT)、α肌动蛋白(α-actin)、Connexin 43、肌间线蛋白(Desmin)的表达。结果免疫荧光定性检测结果显示,A组GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养72 h可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;B、C、D组可见细胞核被DAPI染为蓝色,没有表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;E组可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin。qPCR法检测结果显示,5组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较A组升高;A组和E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较B组、C组和D组升高(P<0.05)。结论过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化。

小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群自身抗凋亡基因研究

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)亚群SCA-1^+/CD45^+/CD31^+抗凋亡的分子基础。方法以小鼠心脏干细胞表面分化抗原检测BMSCs后以CD45、CD31为标准分选得到4个亚群。体外将4个亚群采用无血清低氧(5%)培养,流式细胞术检测各组的凋亡率。分别将细胞注入心梗48 h小鼠体内于注射后48 h完成心功能测定。可见SCA-1^+/CD45^+/CD31^+组抗凋亡能力最强,心脏彩超提示心功能恢复亦优于其他各组。采用基因芯片完成Agilent小鼠全基因4×44K芯片从分子水平对SCA-1^+/CD45^+/CD31^+亚群抗凋亡能力进行探讨。结果将SCA-1^+/CD45^+/CD31^+与其他组有关于凋亡基因进行聚类分析及Network结果共同比较可见两者无交集,以上述差异基因4倍表达为标准,因而以Network结果为主。可见NFk B1、RB1、E2F1为感兴趣基因。结论小鼠BMSCs为一多克隆的细胞群体。SCA-1^+/CD45^+/CD31^+抗凋亡及改善心功能方面优于其他亚群;其分子机制在于NFk B1、RB1、E2F1基因表达较其他亚组多见。

过表达IDO骨髓间充质干细胞分泌外泌体改善移植心脏存活

目的探讨过表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外泌体(exosome)改善大鼠腹腔异位移植心脏存活机制。方法构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞,而后提取分泌的exosome。同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞分泌的exosome后检测如下指标:移植心脏心功能变化;移植心脏局部荧光强度;受体大鼠脾脏细胞表面CD40、CD86、CD80、主要组织相容性抗原-Ⅱ(MHCⅡ)、CD274(PDL-1)、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达及Treg细胞数量。并采用苏木精-伊红(HE)染色评估移植心脏局部炎性细胞浸润情况。结果 (1)大鼠异位心脏移植模型建立后,给予相应细胞分泌exosome,过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏的射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)较其余各组有提高;(2)过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏局部Dir荧光最强;(3)采用流式细胞技术证实过表达IDO-BMSCs-exosome组受体脾细胞CD86、CD40、CD80、主要组织相容性抗原-Ⅱ(MHCⅡ)、CD45RA+CD45RB、CD45RA、OX62表达量下降,而CD274(PDL-1)表达增高同时Treg细胞数量较其他组增多;(4)HE染色证实过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏局部有较少炎性细胞浸润。结论大鼠BMSCs分泌的exosome可以有效调节DC细胞表面抗原分子表达、促进Treg细胞增生,从而在多个免疫层面改善心脏移植排斥。