maspin基因启动区的初步鉴定

目的:研究maspin基因表达的调控机制。方法:利用PCR技术扩增maspin基因5'上游启动区860bp(-765～+95bp)不同的缺失片段,并将它们分别与荧光素酶(LUC)报告基因相连,构建了6种maspin-LUC报告基因表达质粒,通过转染实验检测maspin启动区不同长度片段在雄激素依赖性前列腺癌细胞(LNCaP)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞(PC-3M)中驱动荧光素酶表达的活性。并转染雄激素表达受体(AR)到PC-3M细胞,观察雄激素及其受体对不同片段表达活性的作用。结果:maspin基因启动区(-312～247bp)之间含有与雄激素受体相关的负性调控元件,在(+14～95bp)之间含有一个功能性的中文(Sp1)调控元件。结论:maspin基因的表达受雄激素受体及Sp1的调节。

雄激素及其受体对maspin启动子的抑制作用

目的:检测雄激素及其受体对maspin基因启动子的作用。方法:构建含maspin基因5侧启动子区846-759+87bpDNA的荧光素酶报告基因表达载体pGL3-mP,然后与雄激素受体表达载体hAR共转染雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3M,用或不用雄激素处理细胞,48h后应用双荧光素酶测定系统,检测荧光素酶的表达活性。结果:hAR可抑制maspin启动子的表达活性,其抑制作用是雄激素配体非依赖性的。结论:maspin启动子区可能含有与雄激素受体结合的负性调控元件。

9-顺维甲酸对人肺癌组织CyclinD1、Cdk4、P16转录的影响

目的:检测9-顺维甲酸(9-cis-RA)处理前后体外培养的人肺癌组织及其对照组织细胞周期蛋白因子CyclinD1、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk4、细胞周期蛋白酶抑制因子P16转录水平的变化。探讨其抑制肺癌组织细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析CyclinD1、Cdk4、P16转录的变化。结果:9-cis-RA既可降低体外培养的人肺癌组织Cdk4的转录,又可升高其P16的转录。对肺癌组织和正常肺组织CyclinD1的转录的影响无统计学意义。对正常肺组织Cdk4、P16的转录的影响也无统计学意义。结论:9-cis-RA抑制肺癌组织细胞增殖的作用机理与其调节Cdk4、P16的转录有关。

《政府会计制度》创新研究及改进展望

2016年8月,财政部颁布了《政府会计制度——会计科目和会计报表》(征求意见稿)。政府会计制度依据基本准则确立的"双基础"、"双体系"、"双报告"核算模式,在会计科目、会计业务处理、会计报表等内容的设计上采用了双科目、双分录、双报表,致使本制度创新多、篇幅长、内容复杂、逻辑严密、操作性强。本文对制度的创新进行深入分析,对制度的不足之处提出完善建议,对制度的下步研究提出展望,为政府会计改革顺利推进献计献策。

试论移动互联网环境下高职院校学生党建工作

基于移动互联网环境下,高职院校学生的学习生活方式发生了深刻的变化。本文运用移动网络工具有效地破解了高职院校学生党建工作中遇到的难题,课题组根据广泛的调查数据,就目前移动互联网环境下高职院校学生党建工作的现状与存在的问题进行了分析,并有针对性地提出了构建高职院校学生党建工作新举措,推动高职院校学生党建工作的发展。

财务比率的发展与创新

随着社会经济的迅速发展,各种财务指标也在不断的发展变化中。其中,财务比率引起了人们越来越广泛的关注,应用范围空前扩大。因此,了解财务比率的发展过程,深入研究财务比率的创新和应用已成为现实的需要。

新公共管理理论、政府会计改革与利益相关者

新公共管理理论作为当今加强国家治理的热门理论,为我国政府会计改革和政府会计理论框架建立提供了全新的思路,不仅政府会计目标的设定、政府会计信息的质量要求、政府会计要素的选择吸取了受托责任观的思想,而且政府会计核算模式、政府会计报告内容也充分考虑了利益相关者的会计信息需求。文章探讨了新公共管理理论、政府会计改革和利益相关者之间的关系,重点分析了政府会计的主要利益相关者如政府会计主体自身、社会公众和债权人,结论中建议政府会计报告审计制度、公开制度制定过程中进一步分析以上利益相关者的信息需求。

c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用

目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。

高职院校二级财务管理创新发展研究

随着高职院校规模的扩大,权责发生制政府综合改革的推进,高职院校财务管理面临新的发展机遇与挑战,新的财务管理体制的建立和完善亟待进一步研究和探索.本文中梳理了高职院校采用二级财务管理面临的问题,提出了一套适合高职院校二级财务管理的新模式,促进高职院校加强财务管理、理清支出责任、提高管理效益.

有色金属上市公司财务风险预警模型及应用——以J铜业公司为例

有色金属制造业是我国重要基础产业之一,是实现制造强国的重要支撑。当前,我国有色金属工业生产总体保持平稳运行,但仍然面临自主创新能力不足、发展质量效益不高、资源环境压力加大、要素配置有待优化等诸多发展瓶颈。与此同时,新冠肺炎疫情对全球经济造成严重冲击,贵金属市场价格下跌、有色金属制造业产能过剩、原材料价格不断攀升等问题比较突出,有色金属制造业财务风险日益增加。

NKX3.1基因上游一个30bp负调控区结合蛋白的初步鉴定

目的:鉴定NKX3.1基因上游30bp负调控区的结合蛋白。方法:人工合成30bp负调控序列,用末端转移酶对其进行地高辛标记;提取细胞核蛋白,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)方法,检测细胞核提取液中与30bp负调控序列特异结合的核蛋白。结果:在LNCaP细胞及其他不同肿瘤细胞系核提取液中,检测到与30bp负调控序列特异结合的核蛋白,但在不同的细胞系中有不同种类的结合蛋白。结论:NKX3.1基因上游的30bp负调控机制在不同的细胞中普遍存在,不同的细胞核中有不同的结合蛋白,可能涉及不同的调控机理。

E2F陷阱DNA对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的诱导

目的:为观察转录因子E2F陷阱DNA对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体lipofectam ine将E2F decoy DNA、ARE decoy DNA和control decoy DNA分别转染PC-3M细胞,MTT检测其对细胞增生的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,并进行染色体DNA断裂的测定;通过RT-PCR检测转染的PC-3M细胞中c-Myc mRNA、cyc lin D1 mRNA表达水平的变化,通过W estern b lotting检测细胞中c-Myc蛋白、cyc lin D1蛋白表达水平的变化。结果:E2F decoy DNA转染后的PC-3M细胞的生长受到明显抑制;转染后的细胞形态变化符合凋亡的典型改变,染色体断裂明显,细胞凋亡率为26.35%;c-Myc、cyc lin D1的表达受到抑制。结论:E2F decoy DNA可诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M凋亡和抑制细胞增殖,其机制可能涉及到c-Myc mRNA、cyc lin D1的表达变化。

传统运输企业向现代物流企业转型的对策分析

目前,我国的运输业已呈现多元化发展态势,传统运输企业向现代物流企业转型已成为大势所趋。科学分析传统运输企业向现代物流企业转型的模式,积极探索传统运输企业发展的对策,不但有利于运输企业的健康发展,而且也能为运输行业的结构调整和运输组织方式的改善提供参考。

平衡计分卡(BSC)导向战略管理

平衡计分卡自诞生12年来,不仅经受住了时间的考验,而且应用范围进一步扩大,特别是在战略管理中发挥的作用越来越大。本文试图从平衡计分卡基本思想和近年来的发展及战略管理基本理论出发,研究两者如何进行有效链接,旨在对平衡计分卡在实践中的运用作一些探索。

维甲酸β受体的表达介导肺腺癌细胞系A549凋亡的研究

目的:研究RARβ在肺癌细胞的增殖、分化和诱导细胞凋亡中的作用。方法:应用脂质体将RARβ的表达载体pcDNA3.0-RARβ瞬时转染到RARβ表达下降的肺腺癌细胞A549中,观察形态学变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR检测细胞RARβ、p53、cdk4、cyclinD1的表达水平。结果:试验组出现细胞皱缩、粘附性降低、染色体凝集和边集现象,细胞凋亡率为65.8%,DNA断裂成片状。RT-PCR显示凋亡细胞中的RARβ表达明显升高(P<0.01)、p53的表达无明显变化、cdk4和cyclinD1的表达明显降低(P<0.01)。结论:9-顺-维甲酸通过RARβ受体诱导细胞凋亡并且显著降低cdk4、cyclinD1的表达;9-顺-维甲酸不影响细胞中p53的表达;9-顺-维甲酸在p53表达正常的细胞中引起凋亡。

人同源盒基因Nkx3.1启动子的克隆及活性测定

目的:克隆Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段,构建pGL3-1.06 kb载体,测定其启动子活性?方法:采用PCR方法从人基因组DNA中扩增Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic 载体中,与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性?结果:PCR扩增的1.06 kb片段经测序正确无误;pGL3-1.06 kb转染LNCaP细胞48 h后,双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7, 为pGL3-control 活性的1.5倍,为pGL3-basic活性的50倍?结论:克隆的人Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段具有较强的启动子活性?

雄激素应答元件陷阱DNA抑制PSA基因启动子的作用并诱导LNCaP细胞凋亡(英文)

目的:研究雄激素应答元件陷阱DNA(AREdecoy)对前列腺特异抗原(PSA)基因启动子的抑制作用及其对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响,为前列腺癌的基因治疗寻求新的策略。方法:联合运用报告基因和陷阱DNA策略,构建含PSA基因5’侧启动子区640bpDNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,ARE陷阱DNA共转染前列腺癌细胞株PC3-M。应用双荧光素酶测定系统,检测荧光素酶的表达活性。然后,应用2mg/LAREdecoy转染LNCaP细胞,通过相差显微镜观察细胞超微结构变化,MTT比色法检测细胞生长活性,DNAladder和流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡以研究AREdecoyDNA对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响。同时提取LNCaP细胞核蛋白,应用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测AREdecoyDNA与雄激素受体的特异结合。结果:AREdecoyDNA显著抑制报告基因荧光素酶的表达,抑制率可达95%。EMSA显示AREdecoyDNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染AREdecoyDNA后,镜下观察部分细胞出现凋亡形态学的改变,细胞体外生长受到抑制,染色体DNA凝胶电泳可见明显梯形条带。转染48h的凋亡率为22.4%。结论:实验表明AREdecoyDNA能竞争结合雄激素受体(AR),阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡,有可能为前列腺肿瘤的治疗提供新的策略。

雄激素应答元件陷阱DNA诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡

目的:研究雄激素应答元件陷阱DNA(AREdecoyDNA)对前列腺癌细胞LNCaP生长活性和凋亡的影响。方法:人工合成双链硫代AREdecoyDNA并提取LNCaP细胞核蛋白,应用电泳迁移率变动分析(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)检测AREdecoyDNA与雄激素受体的特异结合。2μg/mlAREdecoyDNA转染LNCaP细胞,48h后相差显微镜观察细胞超微结构变化;MTT比色法检测细胞生长活性;DNALadder检测细胞凋亡;流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率。结果:EMSA显示,AREdecoyDNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染AREdecoyDNA后,镜下可见部分细胞出现凋亡形态学的改变,有凋亡小体形成,细胞体外生长受到抑制,DNALadder可见明显梯形条带。转染后48h的凋亡率为22.5%。结论:AREdecoyDNA能竞争结合雄激素受体(androgenreceptor,AR),阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡。