乳腺癌转移相关基因表达蛋白组织微阵列的研究

[目的]分析c鄄erbB2、p53和cyclinE在乳腺癌组织中的表达以及这些蛋白表达之间的相关性及与患者预后的关系。[方法]有淋巴结转移的乳腺癌病例100例,制作成组织芯片,进行c鄄erbB2、p53和cyclinE免疫组化染色,根据染色指数对乳腺癌原发灶和转移灶进行统计学分析,分析这些指标间相关性及与患者预后的关系。[结果]100例乳腺癌标本中,转移灶c鄄erbB2、p53和cyclinE的表达均高于原发灶肿瘤组织的表达(P<0.05)。这三者之间染色指数,统计学分析显示彼此之间具有相关性。c鄄erbB2、p53和cyclinE与患者之间的预后之间没有明确的相关性。[结论]c鄄erbB2、p53和cyclinE相关基因在调控乳腺癌转移上具有协同作用,c鄄erbB2、p53和cyclinE蛋白增加,促进了肿瘤的转移和浸润。

外用盐酸罂粟碱抑制植皮片术后挛缩作用机理的实验研究

目的:探讨外用盐酸罂粟碱抑制植皮片术后挛缩的作用机理。方法:取18只大鼠36侧移植皮片作为实验对象,将大鼠分成测量组及取材组,同一只大鼠的植皮片按左右侧对应位置进行配对,分成A(罂粟碱治疗组)、B(空白霜剂对照组)2组。A组每日在植皮片表面外涂2%罂粟碱霜2次,B组仅涂抹空白对照霜剂,术后90天后,A、B两组改为全部应用空白霜剂。最后观察两组术后10、20、40、60、90、120天收缩率变化及α-SMA免疫组化染色、天狼猩红染色的组织学变化。结果:外用盐酸罂粟碱霜可以有效地抑制大鼠植皮片术后挛缩,免疫组化染色显示:应用盐酸罂粟碱霜后,皮片创面中的肌成纤维细胞(MFB)数量较对照组明显减少。天狼猩红染色显示用药组皮片的Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较用药组降低。结论:外用罂粟碱霜剂能够抑制自体游离植皮片术后挛缩,其作用机理在于盐酸罂粟碱可以明显减少皮片下肌成纤维细胞(myofibroblast MFB)的数量并降低Ⅲ/Ⅰ型胶原比值从而抑制了植皮片的挛缩。

H5N1禽流感病毒感染小鼠和两种灵长类动物的肺组织病理学比较

目的比较H5N1禽流感病毒感染小鼠、恒河猴及食蟹猴急性期肺组织的病理学变化。方法在麻醉状态下对BALB/c小鼠、恒河猴及食蟹猴进行H5N1病毒滴鼻接种,在感染急性期实施安死术,取肺组织运用H&E结合免疫组化技术分析肺组织的病理变化。结果BALB/c小鼠感染急性期,肺组织以变质性炎为主,肺泡结构被广泛破坏,以单核细胞为主的炎细胞浸润,局部可见渗出性炎。而在恒河猴感染急性期肺组织病理改变以渗出性炎为主,同时可见变质性炎和增生性炎。在食蟹猴感染急性期肺组织病理改变以渗出性和变质性炎为主,同时亦可见上皮的新生。结论H5N1禽流感病毒感染小鼠与恒河猴、食蟹猴急性期肺组织的病理变化不同,这将为进一步认识禽流感的发病机制及研究针对性的治疗方法提供一些理论依据。

乳腺癌凋亡过程中细胞内Ca^(2+)的变化与Caspase3、Caspase8蛋白酶相关作用机制的研究

目的:探讨不同途径给药乳腺癌BCML-TA299移植瘤组织中Ca2+的变化与Caspase3、Caspase8蛋白相互作用的机制。方法:用а-干扰素不同给药途径处理BCML-TA299移植瘤组织。采用流式细胞仪、免疫组化技术分别测定乳腺癌BCML-TA299细胞的DNA含量、细胞周期变化及细胞内钙离子浓度水平变化与Caspase3、Caspase8蛋白表达相关性。结果:细胞形态学观察显示瘤内注射组出现典型的凋亡改变。瘤内注射组胞内Ca2+和Caspase3Caspase8蛋白表达明显高于皮下注射组和预防注射组(P<0.01)。结论:1)Caspase3、Caspase8和胞内Ca2+共同参与了乳腺癌BCML-TA299细胞的凋亡调控过程,可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用。2)不同途径给药对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8表达和Ca2+浓度可产生不同的影响。

禽流感病毒感染食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞亚型分析

目的分析禽流感病毒感染的食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞的不同亚型。方法收集中国医学科学院实验动物研究所病理室禽流感病毒H5N1亚型感染的食蟹猴肺组织蜡块标本,观察其病理学变化及运用免疫组织化学的方法进一步分析CD68、CD14及S-100在感染禽流感病毒食蟹猴肺组织中的表达。结果禽流感病毒感染的肺组织内肺间隔增宽伴巨噬细胞为主的炎细胞浸润,肺泡腔内可见血浆蛋白及纤维素渗出。部分肺泡间隔断裂,巨噬细胞及淋巴细胞浸润。肺组织内H5N1病毒抗原染色呈阳性。肺间隔及肺泡内可见大量CD68阳性细胞,局部可见散在CD14和S-100阳性细胞。结论禽流感病毒感染的食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞主要以巨噬细胞为主。

神经皮肤黑变病中黑色素的来源初探

目的探讨食蟹猴神经皮肤黑变病(NCM)中黑色素的来源。方法收集北京协和医学院比较医学中心病理室食蟹猴神经皮肤黑变病的病理学标本一例,复习其病理切片并辅助免疫组化及电镜技术对黑色素的来源做进一步探讨。结果皮肤病理检查显示真皮内黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑膜的组织病理学显示脑膜下黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑实质的组织病理学显示其黑色素由黑色素细胞和血管内皮细胞产生,CD31免疫组化染色显示含有黑色素的血管内皮细胞呈阳性着色。电镜检查结果同样显示血管内皮细胞内可见黑色素小体沉积。结论我们在世界上首次揭示了食蟹猴NCM大脑中血管内皮细胞可产生黑色素,这给内皮细胞增加了一项新的功能。

COX-2、VEGF在肺癌表达相关性的研究

目的 :探讨COX -2与VEGF在肺癌表达的临床意义及二者在肺癌浸润转移及与肿瘤血管生成的相关性。方法 :83例临床及预后资料完整的肺癌手术切除标本 ,研究COX -2、VEGF与MVD在不同肺癌临床分期、组织学类型、有无淋巴结转移的表达差别以及与性别、预后之间的关系。结果 :有淋巴结转移的肺癌COX -2、VEGF的表达及MVD计数要高于无淋巴结转移的肺癌组织 ,差别均具有统计学意义(P<0.01)。临床分期高的COX -2的表达、MVD计数要高于临床分期低的肺癌(P<0.05)。COX -2、VEGF的表达及MVD计数与患者的预后均呈负相关 ,并且COX -2的表达与CD34和VEGF的表达呈正相关。COX -2、VEGF的表达与肺癌的组织学类型无关。结论 :COX -2、VEGF及MVD三者在肿瘤血管生成及肿瘤浸润转移过程中可能起到协同作用 。

SARS-CoV N蛋白与Smad3相互作用并调节TGF-β信号通路的形态学初步研究

目的应用病理学实验技术,初步描述SARS-CoV N蛋白与TGF-β信号通路中Smad3蛋白之间相互作用的情况,及其对TGF-β信号通路下游转录产物生成的影响。方法对比观察SARS-CoV感染的恒河猴肺组织及正常猴肺组织的形态学特征,应用免疫组织化学染色法,观察猴肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及1型纤维蛋白溶酶原活化抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的肺组织表达;SARS-CoVNucleocapsid蛋白与Smad3双染观察二者在肺组织中的共定位情况;应用Masson染色法比较感染与正常猴肺组织中胶原含量的差异,结合分子生物学检测肺组织中TGF-β、PAI-1及Ⅰ型胶原α2链(α2 chain of typeⅠcollagen,COLlA2)的表达,探讨N蛋白影响TGF-β信号通路的影响。结果PCR结果显示TGF-β、PAI-1及COL1A2在SARS-CoV感染的猴肺组织中的表达量较正常猴肺有明显增高,免疫组织化学染色结果提示,在病毒感染的猴肺组织内TGF-β、PAI-1染色呈现强阳性,同时SARS-CoV Nucleocapsid蛋白与Smad3双染结果显示,二者在感染的猴肺组织中存在明显的共定位现象。Masson染色结果提示,病毒感染的猴肺组织胶原含量较正常猴肺组织显著增加。结论我们的研究结果为说明SARS-CoV Nucleocapsid蛋白参与调节TGF-β信号通路,促进肺组织纤维化提供了有力的形态学实验证明,为进一步理解SARS-CoV感染引起肺组织纤维化的机制提供了的较为明确体内实验数据。

不同来源的人脂肪干细胞体外成脂诱导分化能力的比较

目的:对同一个体不同部位来源的脂肪干细胞体外成脂诱导分化的能力进行比较,为脂肪干细胞的进一步应用提供实验依据。方法:实验于2004-11/2005-05在中国协和医科大学整形外科医院研究中心完成。提取5例女性临床吸脂患者(平均年龄32岁)8个部位(大腿前侧、臀上部;臀上部、上腹部;髂腰部;上腹部;背部、上臂)脂肪抽吸组织中的间充质干细胞,体外进行成脂诱导分化。在对照培养基(含体积分数0.1胎牛血清的DMEM培养基)中培养的第1代脂肪干细胞,以3×104细胞/皿接种到35mm培养皿中,将对照培养基更换为成脂诱导培养基,进行成脂诱导,每周换液2次,以加入对照培养基的培养皿设为阴性对照。继续培养2周,分别取诱导后的细胞和阴性对照细胞各两皿进行油红O染色,以证实细胞中有无脂滴形成。通过油红O染色及阳性细胞记数,分别对来源于3例患者的2个不同部位的脂肪抽吸标本中的脂肪干细胞向成脂细胞分化的能力进行定性和半定量检测,采用卡方检验对不同细胞的成脂诱导分化率进行测定。结果:①脂肪干细胞成脂诱导分化能力的测定结果:从不同个体的每100mL脂肪抽吸组织中提取的平均脂肪干细胞数目有所不同,从2.45×108个/100mL～1.25×109个/100mL不等;但从同一个体不同部位的脂肪中所获得的干细胞数目却比较近似;根据各例细胞成脂诱导分化率,可得出5例患者8个部位细胞的平均成脂诱导分化率为36.2%。经统计学分析证实同一个体不同部位来源的细胞具有不同的成脂分化能力,获得的平均干细胞数目与年龄无关(r=0.098,P=0.817),而细胞的成脂分化能力与年龄呈明显负相关(r=-0.568,P<0.01)。②成脂诱导后脂肪干细胞形态变化及油红O染色定性结果。脂肪干细胞经诱导后体积增大,分化为成脂细胞,细胞浆中可见许多大小不等的橙红色脂滴,多者可占整个细胞体积的80%～90%,细胞核缩小或偏于细胞的一侧,呈阳性;而在普通培养基中生长的对照细胞未见体积增大和脂滴形成,呈阴性。结论:患者年龄越大,成脂分化率越低,且同一患者不同部位来源的脂肪抽吸组织中的脂肪干细胞在成脂诱导分化能力上存在差异。提示利用脂肪干细胞进行相关实验时,在患者年龄和取材部位上应有所选择,进一步分析有可能找到获取脂肪干细胞的最佳部位。

MVD及VEGF、TGFβ_1表达与肺癌转移预后之间的关系

目的:探讨微血管密度(MVD)及VEGF、TGFβ1表达与肺癌转移和预后之间的关系,分析VEGF、TGFβ1共同表达在预测肺癌预后上的意义。方法:对病理确诊的原发性肺癌89例,按有无淋巴结转移、远处转移及5年生存期限分别分组,并进行MVD计数和VEGF、TGFβ1免疫组化染色。染色结果进行统计学分析,结合随访资料探讨MVD及VEGF、TGFβ1与肺癌转移预后中的作用。结果:MVD与淋巴结转移、远处转移密切相关(P<0.01),在肺癌5年生存期限上MVD的差别也有显著意义(P<0.01)。TGFβ1表达在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.01);有远处转移组TGFβ1、VEGF表达也明显高于无远处转移组肺癌的表达(P<0.01);VEGF、TGFβ1共同表达5年以上生存组明显低于5年以下生存组。结论:MVD及VEGF、TGFβ1表达是预测肺癌淋巴结转移和远处转移及预后的良好指标。VEGF、TGFβ1共同表达可以促进肺癌血管形成和肿瘤细胞转移。

瘢痕疙瘩相关基因的生物信息学研究

目的用基因芯片及生物信息学的方法确定瘢痕疙瘩致病的相关基因,探讨瘢痕疙瘩发生的分子机理。方法利用含有人约22000个基因的长寡核苷酸芯片,检测5例具有遗传家族史的瘢痕疙瘩与正常皮肤成纤维细胞的基因差异性的表达情况,采用非监督聚类的等阶聚类方法(Hierarchicalclustering)发现统计学意义上差异表达的基因,GO(geneontology)确定这些基因所属的功能群体,探讨其在瘢痕疙瘩发生发展中的重要作用。结果生物信息学分析表明,在5例瘢痕疙瘩成纤维细胞中表达趋势一致的上调基因有11个,下调基因有34个,其中与胶原代谢相关的差异表达基因数量最多。结论与正常皮肤成纤维细胞相比,瘢痕疙瘩发生过程中有多个基因的表达发生了明显地改变,其中代谢相关基因表达的改变可能在瘢痕疙瘩发生发展中发挥重要作用。

两个保守的snoRNA基因SNORA50和SNORA71在灵长类和啮齿类的转录活性及组织表达谱

核仁小分子RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)的主要功能是参与rRNA的修饰。最近研究表明,snoRNA可能具有广泛的生物学功能。大部分snoRNA比较保守,但也有一些snoRNA基因具有种属特异性。有意义的是,该研究发现,基因序列高度保守的snoRNA(SNORA50和SNORA71)呈现物种特异性的组织表达谱。SNORA50位于Cnot1基因内含子中,在脊椎动物中高度保守。表达谱分析发现,SNORA50在灵长类(人和恒河猴)和鸟类(鸡)的各种组织中广泛表达,但在正常发育的小鼠组织中检测不到。SNORA71位于一个非编码RNA基因snhg11的内含子中,在哺乳动物中比较保守。研究发现,SNORA71在灵长类各种组织广泛表达,而小鼠中主要在脑组织表达,与宿主基因snhg11表达谱一致。随小鼠脑发育过程的进展,SNORA71表达水平逐渐上调,提示其参与小鼠脑发育的调控。而在恒河猴从胚胎到成体的脑发育过程中,SNORA71表达没有显著的改变。这些结果表明,SNORA71对灵长类和啮齿类的神经发育可能存在不同的调控模式。基因序列保守的SNORA50和SNORA71呈现物种特异的表达模式,说明snoRNA在个体发育和系统进化中都发挥着重要的调控功能。

p53基因第72密码子多态性与部分中国人瘢痕疙瘩关系的研究

目的 探讨p53基因第72密码子多态性分布与部分中国人瘢痕疙瘩易发性的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法，检测60例瘢痕疙瘩组织和102例非瘢痕体质健康对照血液标本的p53基因第72密码子的基因型分布。结果 瘢痕疙瘩与非瘢痕体质患者血液标本p53基因第72密码子多态性分布无统计学意义（χ^2=2．910，P=0．233）；两组Arg和Pro等位基因分布频率也无统计学意义（χ^2=0．882，P=0．348）；中、日两国健康人群和瘢痕疙瘩人群的p53基因第72密码子多态性分布无统计学意义（χ^2=3．942，P=0．139；χ^2=3．260，P=0．196）；对于肩背部瘢痕疙瘩，与Pro／Pro基因型相比，Arg／Arg基因型具有统计学意义（P〈0．01）。结论 与非瘢痕体质患者相比，p53基因codon72部位多态性分布与中国部分人群瘢痕疙瘩发生无明显关系；但与其它基因型比较，Arg／Arg基因型可能对肩背部瘢痕疙瘩的形成具有影响，尚需进一步的研究调查p53基因codon72的多态性与不同部位瘢痕疙瘩发生的关系。

即使离去,她依然优雅

这是一位在我脑海里印象非常深刻的患者。这个女患者最初是因疼痛被送入医院的（2006年），经过全面的检查，被诊断为子宫平滑肌肉瘤III期。因为心脏功能方面的原因，在做完一次化疗之后，她就没有继续进行放、化疗。这之后，她的一般情况还好，然而到了2009年，她经常感觉腰腿痛，到医院检查，没发现大问题，诊断为筋膜类的疾病。