构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。将花生主要过敏原Arah 2基因序列进行颠换,并将颠换后的序列进行合成,再将合成后的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;利用Isopr...构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。将花生主要过敏原Arah 2基因序列进行颠换,并将颠换后的序列进行合成,再将合成后的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;利用Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside(IPTG)诱导表达;通过Ni2+亲和层析纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的过敏原性。测序结果表明合成后的序列成功整合到原核表达载体pET-32a(+)上。重组的目的蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明经基因工程改造的Ara h 2(F-Ara h 2)蛋白与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏患者混合血清中IgE显著降低。成功构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原性。展开更多
目的从花生中分离、纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取花生粗提液,通过Affi-Gel Blue Gel亲和层析和SuperdexTM75分子筛层析,纯化得到目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果对花生总...目的从花生中分离、纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取花生粗提液,通过Affi-Gel Blue Gel亲和层析和SuperdexTM75分子筛层析,纯化得到目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果对花生总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析结果显示,其相对分子质量为12 000～70 000。组份C对绿色木霉有抑菌活性,对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉、产黄青霉均无抑菌活性。活性组份C层析得到的组份23对绿色木霉有抑菌活性。对活性组份23进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析结果显示,组份23相对分子质量为24 000。结论花生中存在抗真菌活性蛋白。展开更多
目的:评价传统肩关节查体试验和俘获试验在诊断肱二头肌长头腱(long head of biceps tendon,LHBT)及滑车(pully)损伤中的能力。方法:回顾性分析在单一研究中心(大连大学附属新华医院)216例因肩关节疼痛就诊并进行关节镜手术的的患者,进...目的:评价传统肩关节查体试验和俘获试验在诊断肱二头肌长头腱(long head of biceps tendon,LHBT)及滑车(pully)损伤中的能力。方法:回顾性分析在单一研究中心(大连大学附属新华医院)216例因肩关节疼痛就诊并进行关节镜手术的的患者,进行多种传统的肩关节查体试验,如Yergason试验、Speed试验、Upper cut试验、BT试验等,同时提出一种新的检查方法——俘获试验。以关节镜下探查结果作为金标准,比较各项试验在诊断LHBT损伤、滑车损伤方面的灵敏度、特异性、阳性似然比、阴性似然比,以及确定各项查体试验对临床诊断的预测价值。结果:共有216例患者参与本项研究并接受手术干预,其中男性101例,女性115例,年龄范围22~71岁。在诊断LHBT方面,俘获试验具有最高的灵敏度0.77(P<0.05),在特异性上较Speed试验表现出优势(0.57 vs.0.68,P=0.016),而较其它三项查体试验无显著差异(P>0.05)。在诊断滑车损伤方面,俘获试验具有最高的灵敏度0.84(P<0.05),在特异性上较Speed试验表现出优势(0.44 vs.0.61,P=0.017),而较其它三项查体试验无显著差异(P>0.05)。俘获试验在诊断LHBT损伤以及滑车损伤中均表现出最低的阴性似然比(0.40/0.36)(P<0.05)。回归性分析结果显示,在诊断滑车损伤方面,俘获试验OR=29.85(P<0.05),Yergason试验OR=0.43(P=0.006),BT试验OR=3.82(P=0.014),Upper cut试验OR=1.2、Speed试验OR=0.59(均P>0.05)。在诊断肱二头肌长头腱损伤方面,俘获试验OR=30.1(P<0.05),Yergason试验OR=0.034(P<0.05),BT试验OR=4.472(P=0.006),Upper cut试验OR=3.34、Speed试验OR=0.07(均P>0.05)。结论:在诊断肱二头肌长头腱和滑车损伤方面,与传统查体相比,俘获试验具有最高的灵敏度和最低的阴性似然比,可以作为肱二头肌长头腱及滑车损伤的筛查试验。展开更多
文摘构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。将花生主要过敏原Arah 2基因序列进行颠换,并将颠换后的序列进行合成,再将合成后的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;利用Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside(IPTG)诱导表达;通过Ni2+亲和层析纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的过敏原性。测序结果表明合成后的序列成功整合到原核表达载体pET-32a(+)上。重组的目的蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明经基因工程改造的Ara h 2(F-Ara h 2)蛋白与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏患者混合血清中IgE显著降低。成功构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原性。
文摘目的:评价传统肩关节查体试验和俘获试验在诊断肱二头肌长头腱(long head of biceps tendon,LHBT)及滑车(pully)损伤中的能力。方法:回顾性分析在单一研究中心(大连大学附属新华医院)216例因肩关节疼痛就诊并进行关节镜手术的的患者,进行多种传统的肩关节查体试验,如Yergason试验、Speed试验、Upper cut试验、BT试验等,同时提出一种新的检查方法——俘获试验。以关节镜下探查结果作为金标准,比较各项试验在诊断LHBT损伤、滑车损伤方面的灵敏度、特异性、阳性似然比、阴性似然比,以及确定各项查体试验对临床诊断的预测价值。结果:共有216例患者参与本项研究并接受手术干预,其中男性101例,女性115例,年龄范围22~71岁。在诊断LHBT方面,俘获试验具有最高的灵敏度0.77(P<0.05),在特异性上较Speed试验表现出优势(0.57 vs.0.68,P=0.016),而较其它三项查体试验无显著差异(P>0.05)。在诊断滑车损伤方面,俘获试验具有最高的灵敏度0.84(P<0.05),在特异性上较Speed试验表现出优势(0.44 vs.0.61,P=0.017),而较其它三项查体试验无显著差异(P>0.05)。俘获试验在诊断LHBT损伤以及滑车损伤中均表现出最低的阴性似然比(0.40/0.36)(P<0.05)。回归性分析结果显示,在诊断滑车损伤方面,俘获试验OR=29.85(P<0.05),Yergason试验OR=0.43(P=0.006),BT试验OR=3.82(P=0.014),Upper cut试验OR=1.2、Speed试验OR=0.59(均P>0.05)。在诊断肱二头肌长头腱损伤方面,俘获试验OR=30.1(P<0.05),Yergason试验OR=0.034(P<0.05),BT试验OR=4.472(P=0.006),Upper cut试验OR=3.34、Speed试验OR=0.07(均P>0.05)。结论:在诊断肱二头肌长头腱和滑车损伤方面,与传统查体相比,俘获试验具有最高的灵敏度和最低的阴性似然比,可以作为肱二头肌长头腱及滑车损伤的筛查试验。
