金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌感染小鼠胃黏膜损伤的研究

目的:探讨金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌(Hp)感染小鼠胃黏膜损伤的影响及机制。方法:C57BL/6小鼠以109 CFU/mL Hp(0.3mL)灌胃,并将建模成功小鼠随机分为Hp组、金合欢素低(金合欢素-L,30mg/kg)、高剂量(金合欢素-H,75mg/kg)组、阳性对照[奥美拉唑(400μg/kg)、克拉霉素(7.15mg/kg)及阿莫西林(14.25mg/kg)]组以及金合欢素-H+Prostratin(75mg/kg金合欢素+0.5mg/kg Prostratin)组,并以灌胃0.3mL生理盐水的小鼠为对照组,随后检测血清中胃肠激素[胃动素(MTL),胃饥饿素(Ghrelin),5-色羟胺(5-HT)]指标;分离胃组织,检测其病理学变化、评分,并检测组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白(ZO-1)mRNA表达、细胞凋亡变化及凋亡蛋白Bax、Bcl-2、p-NF-kB p65、NF-kB p65表达。结果:与对照组相比,Hp组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05);与Hp组相比,金合欢素-L、金合欢素-H组、阳性对照组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著增加,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著降低,不同金合欢素组间有差异(P<0.05);与金合欢素-H组相比,金合欢素-H+Prostratin组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05)。结论:金合欢素可通过NF-κB信号通路改善Hp感染小鼠胃黏膜损伤。

腹腔镜胃癌D2根治术的安全性、肿瘤根治性以及术后早期疗效

目的观察腹腔镜下胃癌D2根治术的安全性、肿瘤根治性以及术后早期疗效。方法将72例胃癌患者按照入院先后顺序随机分为2组各36例。其中对照组采取传统开腹胃癌切除术,观察组实施腹腔镜胃癌D2根治术,比较2组早期疗效、肿瘤根治性及手术安全性。结果观察组手术时间显著长于对照组,切口长度、术中出血量、胃肠功能恢复时间、下床活动时间及平均住院时间均显著短于或少于对照组(P<0.05或<0.01);2组淋巴结清扫数目、肿瘤近切缘长度和远切缘长度差异均无统计学意义(P>0.05);观察组术后并发症发生率为11.11%(4/36),显著低于对照组的27.78%(10/36)(P<0.05)。结论腹腔镜下胃癌D2根治术近期疗效好,安全性高,且手术创伤小,有利于患者的术后恢复,具有较好的临床应用价值。

甲状腺高功能腺瘤伴甲状腺乳头状癌1例

患者男，40岁，因阵发性四肢乏力，伴恶心、呕吐、大汗淋漓6天，于2007年9月4日入住我院心血管内科。查体：Bp100／70mmHg，神志清，言语流利。心肺腹未见明显异常，双下肢肌力0级，肌张力低，腱反射减弱，病理征阴性。甲状腺有叶可触及大小约2cm×2cm肿物，质中、边界清、随吞咽上下活动，无血管杂音。白发病以来无吞咽困难及声音嘶哑，体重无明显变化。

胃癌组织中NRP-1的表达与临床病理特征及预后的相关性

目的检测胃癌组织中神经纤毛蛋白-1(NRP-1)的表达,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系,探讨其对判断胃癌预后的价值。方法回顾性分析168例胃癌患者的临床病理资料及预后情况,采用免疫组化法检测癌组织及相对正常组织NRP-1的表达,研究NRP-1的表达与临床病理及预后之间的关系。结果(1)NRP-1在胃癌组织中表达高于相对正常组织(66.7%vs.8.33%,P<0.05)。(2)NRP-1的表达与肿瘤大小、细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。(3)NRP-1高表达的患者的生存期短于低表达的患者(中位生存期28个月vs.64个月,P<0.05)。(4)COX比例风险模型进行多因素分析表明,NRP-1的表达为影响胃癌预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 (1)NRP-1在胃癌的发生、发展中起到重要作用,与胃癌的恶性生物学行为密切相关。(2)NRP-1高表达提示预后不良。(3)NRP-1有望作为判断胃癌生物学行为和预后的参考指标。

血清CEA、CA-199和CA-153联合检测在进展期胃癌化疗疗效评价中的临床意义

胃癌的预后与胃癌的病理分期、部位、组织类型、生物学行为以及治疗措施有关[1]。有研究[2]认为，进展期胃癌患者进行癌胚抗原（CEA）、癌抗原199（ClA-199）、癌抗原153（CA-153）联合检测，并进行改良FOLF0x6新辅助化疗，有助于病情延缓，临床效果确切。本院2010年1月-2013年1月对收治的进展期胃癌患者进行上述指标检测，并行改良FOLFOX6新辅助化疗方案治疗，效果满意，现报告如下。

参芪扶正注射液在进展期胃癌化疗过程中对患者免疫功能的影响

目的:探讨参芪扶正注射液在进展期胃癌化疗过程中对患者免疫功能的影响。方法:2012年1月至2013年1月选取68例胃癌患者为研究对象,根据随机数字表将患者分为观察组及对照组各34例,对照组给予改良FOLFOX6新辅助化疗治疗,观察组在对照组基础上给予参芪扶正注射液进行治疗,对比分析疗效治疗效果。结果:观察治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著高于对照组,而CD8+水平则低于对照组(P<0.05)。结论:参芪扶正注射液能有效提高胃癌患者免疫功能,改善患者生存质量。

原发性腹膜后肿瘤术后复发的原因分析

目的:分析原发性腹膜后肿瘤(PRT)术后复发的影响因素以减少复发,提高手术效果。方法:回顾分析1990年6月～2007年6月间收治的131例原发性腹膜后肿瘤手术患者,通过随访了解术后复发情况并进一步分析其与临床特征和病理类型之间的关系。结果:获随访的125例PRT患者术后1、3、5年复发率分别为20.00%(25/125)、32.65%(32/98)、43.84%(32/73);单因素分析显示手术方式(χ2=60.046,P=0.000)、肿瘤体积(χ2=53.362,P=0.000)、病理类型(χ2=16.965,P=0.000)对PRT术后复发均有影响(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明手术方式(χ2=35.080,P=0.000)、病理类型(χ2=11.373,P=0.001)、肿瘤体积(χ2=6.815,P=0.009)显著影响术后复发。结论:手术方式、肿瘤体积、病理类型与PRT患者的术后复发相关,其中手术方式是预测PRT患者术后复发最显著的因素。

影响胃癌肝脏转移患者外科治疗效果的相关因素分析

目的探讨各临床因素与胃癌肝转移患者外科治疗效果的相关性。方法统计82例胃癌肝转移患者的临床资料。患者均采用胃部全切或胃大部切除,部分患者辅助D2淋巴结清扫,肝脏转移病灶切除保证切缘在1cm以上。所有患者术后根据实际情况选择电话或门诊随访,随访日期截止至患者死亡或2017年5月31日,随访有效率100%,采用Cox风险比例分析模型进行多因素分析。结果所有患者存活时间为1～45个月,其中1年生存率为52.44%,2年生存率为28.05%,3年存活率为12.20%,中位生存时间为18.83个月;单因素分析结果显示,性别、年龄、肝内病灶分布、肝内病灶直径、肝脏切除方法、术后化疗等因素与患者外科治疗效果无关(P>0.05);组织学分级、淋巴结转移、肿瘤数目、术前化疗为影响患者的术后预后的影响因素(P<0.05);多因素分析结果显示,淋巴结转移、肿瘤多发、低分化肿瘤是影响外科治疗结果的危险因素(P<0.05)。结论胃癌肝转移患者中肝内肿瘤数目为单发、组织学分级为中、高分化、未出现淋巴转移的患者采取外科治疗,治疗效果更加显著。

改良FOLFOX6新辅助化疗与术后化疗治疗进展期胃癌的临床疗效比较

目的对改良FOLFOX6新辅助化疗与术后化疗治疗进展期胃癌的临床疗效进行对比分析。方法选取200例进展期胃癌患者,并将其随机分为2组,改良FOLFOX6新辅助化疗组和改良FOLFOX6术后辅助化疗组,以进行单纯手术的100例为对照组,对比观察术后的临床疗效以及围术期并发症情况。结果改良FOLFOX6新辅助化疗组治疗后患者的总有效率(87.00%)明显高于改良FOLFOX6术后辅助化疗组患者的总有效率(57.00%),统计学上有意义(P<0.05)。同时,改良FOLFOX6新辅助化疗组患者的手术后围术期并发症发生率(22.00%)明显低于单纯手术治疗组并发症发生率(49.00%),差异在统计学上有意义(P<0.05)。结论改良FOLFOX6新辅助化疗对进展期胃癌的临床治疗效果较改良FOLFOX6术后辅助化疗的治疗效果显著,围术期并发症较少,安全可靠,可以在临床上广泛应用。

快速康复对老年患者腹腔镜胃癌根治术后炎症反应及恢复的影响

目的:观察快速康复对老年患者腹腔镜胃癌根治术后炎症反应及恢复的影响。方法:将94例胃癌患者随机分为实验组与对照组,每组47例。两组患者均择期行腹腔镜胃癌根治术治疗。对照组给予常规护理措施,实验组患者给予快速康复措施护理。观察两组患者围术期的炎性反应指标变化情况、术后恢复情况及并发症发生情况。结果:两组患者术前CRP及PCT水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),两组患者术后1d上述指标较治疗前均增高,对照组患者增幅更加显著,组间比差异具统计学意义(P<0.05)。实验组患者术后排气时间及下床时间均早于对照组患者,组间比差异具统计学意义(P<0.05)。实验组患者术后并发症发生率低于对照组患者,组间比差异具统计学意义(P<0.05)。结论:老年胃癌患者在腹腔镜根治术后采用快速康复护理措施,显著降低患者炎性反应指标水平,术后下床早,排气早,并发症发生率低,临床应用前景广泛。

SM22α基因启动子区低甲基化与胃癌发生发展的相关性研究

目的探讨平滑肌蛋白22α(SM22α)基因启动子区甲基化状态及mRNA表达在胃癌发生中的作用,为胃癌早期诊断和治疗寻找新的靶点。方法甲基化特异性聚合酶链反应检测56例胃癌及其对应的正常癌旁组织中SM22α基因启动子区甲基化状态;荧光实时定量PCR技术检测胃癌组织及正常癌旁组织中SM22α基因mRNA的表达。比较胃癌组织和正常癌旁组织中SM22α基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的差异情况,并分析它们与胃癌患者临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织中SM22α基因启动子区甲基化率显著低于正常癌旁组织(P<0.05),其mRNA表达水平显著高于正常癌旁组织(P<0.05),且甲基化阳性的胃癌组织中SM22α基因mRNA表达量显著低于甲基化阴性的胃癌组织(P<0.05)。胃癌组织中SM22α基因启动子区甲基化状态及、mRNA表达水平与胃癌患者的淋巴结转移呈显著相关(P<0.05)。结论SM22α基因启动子区的低甲基化导致其表达升高可能在胃癌发生、发展中起重要作用,SM22α有可能成为胃癌分子诊断和治疗的重要靶点。

腹腔镜与“蓝碟”相结合手术治疗同时性双原发结直肠癌5例分析

目的探讨腹腔镜结合"蓝碟"行双原发结直肠癌手术技巧及临床疗效。方法回顾性分析2009年9月至2014年5月唐山市人民医院胃肠外科应用腹腔镜与"蓝碟"相结合对5例双原发结直肠癌患者实施双原发癌根治性手术的临床资料。结果 5例患者手术均获得成功,无1例中转开腹,无围手术期死亡,手术平均时间185min;术中平均出血115 ml,切除淋巴结总数平均为30个。术后恢复良好,无切口感染、吻合口瘘等并发症。结论对于无远处转移的同时性双原发结直肠癌应用腹腔镜与"蓝碟"相结合实施双原发癌根治性切除手术,安全、可行,可减轻对患者的创伤,并可以获得良好的治疗效果。

蒲公英甾醇通过NOD1/NF-κB通路对Hp相关性胃炎脾胃湿热证小鼠改善作用研究

目的:探讨蒲公英甾醇对Hp相关性胃炎脾胃湿热证(HAG)小鼠改善和炎症抑制作用及机制。方法:80只C57BL/6小鼠随机分为正常组17只和造模组63只,正常组小鼠给予正常饮食+常规环境+同步饲养,造模组小鼠给予肥甘饮食+湿热环境+Hp菌液,制备HAG小鼠模型。将48只造模成功的小鼠随机分为模型组、蒲公英甾醇组、iE-DAP组和蒲公英甾醇+iE-DAP组,每组12只。蒲公英甾醇组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5mg/kg,1次/d,连续灌胃4周;iE-DAP组小鼠腹腔注射iE-DAP,100μg/只,1次/周,连续注射4周;蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5 mg/kg,1次/d,腹腔注射iE-DAP,100μg/只,1次/周,连续给药4周。实验过程中观察小鼠一般情况;ELISA检测小鼠血清干扰素诱导蛋白10(IP-10)和干扰素β(IFN-β)水平;快速尿素酶实验检测Hp定植;HE染色镜检小鼠胃黏膜组织病理学变化;qRT-PCR检测小鼠胃组织中核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)mRNA和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达水平;Western blotting检测小鼠胃黏膜组织p65、p-p65蛋白表达水平。结果:正常组小鼠胃黏膜组织结构完整、排列整齐、无炎症细胞浸润及充血肿胀;模型组小鼠出现脾胃湿热证症状,胃黏膜充血肿胀、结构破坏、排列无序、固有层有炎症细胞浸润;蒲公英甾醇组小鼠症状较模型组好转,胃黏膜病理损伤减轻;iE-DAP组小鼠脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤较模型组加重,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠组脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤明显减轻。与模型组比较,蒲公英甾醇组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且HP定植减少(P<0.05),iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P<0.05);与蒲公英甾醇组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P<0.05);与iE-DAP组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且Hp定植减少(P<0.05)。结论:蒲公英甾醇可改善HAG小鼠脾胃湿热证症状,抑制炎症反应,作用机制可能与调控NOD1/NF-κB通路有关。

甲状旁腺腺瘤大小与甲状旁腺功能及甲状腺功能的相关性研究

目的分析甲状旁腺腺瘤(PTA)患者合并甲状腺疾病的情况,探讨PTA的大小与甲状旁腺功能及甲状腺功能的关系。方法选取华北理工大学附属医院收治的100例PTA患者,依据是否合并甲状腺疾病将患者分为合并甲状腺疾病组(n=55)和非合并甲状腺疾病组(n=45)。收集患者临床资料,分析年龄、病程以及术前碱性磷酸酶(ALP)、校正血钙、血磷、肌酐、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺激素(TT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状旁腺激素(PTH)水平与PTA大小的相关性。采用Logistic回归分析偏大腺瘤的危险因素,绘制受检者工作特征(ROC)曲线分析术前指标预测偏大腺瘤的临床价值。结果合并甲状腺疾病组患者较非合并甲状腺疾病组患者腺瘤的病程短(P<0.05)。PTA大小与校正血钙、PTH、血肌酐及病程呈正相关,与FT4呈负相关(P<0.01);术前PTH与校正血钙、ALP、肌酐水平及病程呈正相关,与血磷、TT4和FT4呈负相关(P<0.01);术前TT4水平与校正血钙、ALP、肌酐水平及病程呈负相关,与血磷、FT4水平呈正相关(P<0.05);术前FT4水平与校正血钙、FT3水平及病程呈负相关(P<0.01)。Logistic回归分析显示术前PTH高及病程长为预测偏大腺瘤的危险因素。ROC曲线提示术前PTH及病程联合检测可进一步提高预测偏大腺瘤的敏感度。结论PTA大小与术前PTH水平呈正相关性,术前PTH水平及病程的联合考虑可成为偏大PTA的预测因子,推测甲状旁腺功能亢进对甲状腺的功能起到抑制性的作用。

基于NF-κB信号通路Hp感染对胃癌小鼠炎症因子释放的促进作用

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染小鼠致胃癌模型中核因子-κB(NF-κB)的活化情况及对炎症因子的影响。方法灌胃Hp菌液感染小鼠,并设对照组,分别于感染后18、36、54、72周采用酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-10水平等;尿素酶试验及Giemsa染色观察Hp定植情况;苏木精-伊红染色观察胃黏膜病理学变化,并进行炎症评分;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃黏膜核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)、受体相互作用蛋白2(RIP2)、NF-κB p65 mRNA表达;Western blot检测胃黏膜NOD1、RIP2、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果模型组小鼠各时间点Hp检测均为阳性,血清IL-18水平、IFN-γ水平,炎症评分,以及NOD1、RIP2 mRNA及蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显高于对照组,且随时间延长而升高,IL-10明显低于对照组,且随时间延长而降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NF-κB在Hp感染小鼠致胃癌模型中活化,并可促进炎症因子分泌,损伤胃黏膜。

胃癌组织中神经纤毛蛋白2表达与肿瘤淋巴管新生和临床病理因素的相关性

目的：探讨神经纤毛蛋白2（NRP2）在胃癌组织中的表达及其与微淋巴管新生及临床病理因素的相关性。方法回顾性分析河北联合大学附属医院和唐山市人民医院2011年10月至2013年10月手术切除胃癌组织标本（每例患者分别取癌组织、癌旁组织及相对正常区组织）共65例资料，采用免疫组织化学法检测NRP2表达情况，选取D2-40单克隆抗体标记淋巴管，计数微淋巴管密度（ MLD），观测淋巴管形态。结果癌组织、癌旁组织及相对正常区组织各65例，其中胃癌组织NRP2阳性表达率高于癌旁组织和正常组织[61.5％（40／65）比49.2％（32／65）和4.6％（3／65），均P＜0.05]；胃癌组织和正常组织MLD值分别为（12±5）、（23±6）个／mm2，均低于癌旁组织[（44±13）个／mm2，均P＜0.05]，各组淋巴管形态也各不相同；同时癌旁NRP2的表达情况及MLD与肿瘤大小、细胞分化程度、组织浸润深度、淋巴管浸润、淋巴结转移及肿瘤TNM分期均相关（均P＜0.05）。NRP2的表达强度与MLD呈正相关（r＝0.517，P＝0.000）。结论 NRP2可能参与调节胃癌微淋巴管新生和淋巴道转移，在胃癌肿瘤发生、病期进展中具有关键作用，推断其可作为胃癌预后判断的相关指标。

miRNA-133b在胃癌组织中的表达及其对MMP-9的影响

目的探讨微小RNA-133b(miRNA-133b)在胃癌组织中的表达情况及其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法选取2015年12月至2018年1月于该院胃肠外科住院行胃癌根治手术的患者78例,留取胃癌组织及癌旁组织(距肿瘤边界6 cm以上),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miRNA-133b与MMP-9 mRNA在两组标本中的表达水平,免疫组织化学(IHC)方法检测MMP-9在两组标本中的蛋白表达,应用Spearman相关性分析法对miRNA-133b和MMP-9 mRNA的表达量进行相关性分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析胃癌组织中miRNA-133b表达水平对胃癌诊断的价值。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中miRNA-133b的相对表达量明显下调,MMP-9 mRNA及蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(1.01±0.30 vs.0.45±0.19,1.06±0.44 vs.2.03±0.55,20.51%vs.65.38%,P<0.05);且胃癌组织中miRNA-133b表达水平与MMP-9 mRNA表达量呈明显负相关性(r=-0.667,P<0.05)。胃癌组织中miRNA-133b表达水平预测胃癌的ROC曲线下面积为0.942(95%CI:0.909~0.974,P<0.05),最优截断点为0.78,预测胃癌的灵敏度和特异度分别为91.02%和80.77%。结论胃癌组织中miRNA-133b表达降低可能通过靶向上调MMP-9的表达,促进胃癌细胞的浸润和转移,从而在胃癌发生、发展中起作用,且miRNA-133b表达水平对胃癌的诊断有重要价值。

联合两种微创术式治疗直肠癌的临床疗效研究

目的评估腹腔镜下直肠癌切除术(LCRs)后进行经自然腔道标本取出术(NOSE)的患者的成功率和影响因素。方法回顾性分析2016年4月至2018年4月76例直肠癌患者LCRs之后尝试进行NOSE的资料。肛门入路作为第一选择,当此入路失败时,女性患者可尝试经阴道入路。如果两种入路都失败,则判定该患者不适合接受NOSE,并通过腹壁切口取出。记录手术指征,切除位置,实施程序,切口部位,吸引方法,标本大小和NOSE失败病例。采用SPSS18. 0软件对数据进行统计分析,NOSE成功与失败病例χ2检验;标本大小采用t检验。P <0. 05差异有统计学意义。结果 7例患者需要在手术切除时转为腹壁开放切口手术。在剩下的69例患者中,51例(73. 9%)成功完成LCRs后的NOSE,18例(26. 1%)失败。患者的标本经肛门和经阴道入路提取的数量分别是48例(94. 1%)和3例(5. 9%)。LCRs后,结肠病变严重和肿瘤体积大的男性患者NOSE成功率较低。经肛门和经阴道切除标本的平均大小分别为(3. 6±3. 2)和(5. 6±1. 5) cm,失败病例的平均肿瘤大小为(6. 6±4. 4) cm,(P <0. 05)。结论直肠癌患者在腹腔镜下直肠癌切除术后行经自然腔道标本取出术效果更好,较轻微的病变和女性患者具有较高的成功率。

RNA干扰神经纤毛蛋白-2基因对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响

目的探讨应用RNAi技术降低神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达后对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体lip2000分别将NRP2-siRNA和NControl-siRNA转染入HCT-8中作为转染组和阴性对照组,加入磷酸盐缓冲液作为空白对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法验证转染效果,采用细胞计数试剂盒(CCK)法、平板克隆实验和Ki-67蛋白染色实验检测3组细胞的增殖情况,吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)荧光染色实验检测3组细胞的凋亡情况。结果RT-qPCR和Western印迹法结果表明转染组细胞NRP-2 mRNA相对表达量和NRP-2蛋白含量降低(0.46±0.05比0.99±0.05和1.00±0.06,1.04±0.06比1.73±0.09和1.65±0.11)(均P<0.05),CCK法表明,转染组各时段的增殖能力较阴性对照组和空白对照组显著降低(24 h为0.53±0.04比0.82±0.07和0.87±0.07,48 h为0.54±0.05比1.00±0.09和1.17±0.05,72 h为0.75±0.05比1.31±0.13和1.50±0.03,96 h为1.05±0.04比1.46±0.09和1.86±0.06)(均P<0.05);平板克隆实验显示转染组细胞较其他两组克隆形成能力显著下降(134.67±8.74比245.33±19.14和300.33±14.01,P<0.05);Ki-67蛋白检测显示与对照组相比,转染组的细胞Ki-67含量显著下降(5.93±0.22比8.36±0.09和8.70±0.21,P<0.05);AO/PI实验显示转染组较对照组相比凋亡细胞/活细胞比例显著上升(0.43±0.07比0.14±0.04和0.11±0.04,P<0.05)。结论降低NRP-2表达可使结肠癌细胞HCT-8的增殖能力下降,凋亡能力上升。

NOD1基因在Hp感染小鼠炎性反应及免疫功能的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)基因对幽门螺杆菌(Hp)感染小鼠炎性反应及免疫功能的作用。方法将80只C57BL/6小鼠随机分为对照组和感染组,分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)和Hp灌胃,间隔48 h灌胃1次,共5次;末次灌胃后24 h,快速尿素酶试验鉴定是否感染成功,不同时间点处死小鼠,无菌获取胃组织、脾脏组织及血液,苏木素-伊红(HE)染色法鉴定感染小鼠胃组织炎症程度的变化;PCR检测小鼠胃组织中NOD1、受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清干扰素诱导蛋白10(IP-10)、干扰素β(IFN-β)水平;Western blot检测胃组织细胞核中核因子κB(NF-κB)p65表达水平;流式细胞技术分析CD4+、CD8^(+)T淋巴细胞百分比。结果感染组小鼠均Hp感染阳性。与对照组比较,感染组小鼠胃组织腺体结构破坏、减少、萎缩,肌层间质出现炎性细胞;胃组织中NOD1、RIP2 mRNA表达水平,细胞核中NF-κB p65表达水平在Hp感染48、72、120 h后明显升高(P<0.05),NOD1 mRNA表达水平在Hp感染48 h后达到峰值,RIP2 mRNA表达水平在Hp感染120 h后达到峰值,细胞核中NF-κB p65表达水平在Hp感染72 h后达到峰值;血清IP-10、IFN-β水平在感染8、12、16周后明显升高(P<0.05),Hp感染16周后达到峰值;小鼠脾脏组织CD4^(+)T淋巴细胞百分比在感染12、16周后明显降低(P<0.05),Hp感染12周后最低,CD8^(+)T淋巴细胞百分比在感染8、12、16周后明显升高(P<0.05),Hp感染12周后达到峰值。结论Hp感染可以诱导小鼠产生炎性反应,降低其免疫功能,可能与NOD1和NF-κB激活有关。