牛乳β-乳球蛋白变异体检测方法研究进展

β-乳球蛋白(β-LG)是牛乳中重要的天然活性营养物质,也是牛乳中主要的过敏原之一。β-乳球蛋白约为乳清蛋白总量的50%,是牛乳中主要的乳清蛋白,具有较强的热敏感性和致敏性,在优质乳品工业中起关键作用。其不仅作为牛奶热处理强度的评估指标,还作为食品中牛乳过敏原的标志蛋白,有效识别和检测牛乳β-乳球蛋白非常重要。已报道的牛乳β-乳球蛋白有13种变异体,其中A和B是牛乳β-LG的常见变异体,且含量最高。根据不同的检测原理,文章简述近年来牛乳β-乳球蛋白变异体的三大类检测方法,总结电泳法、色谱法和免疫法的原理、优缺点及部分应用实例,重点介绍液相色谱法和毛细管电泳法两种定量方法,并展望牛乳β-乳球蛋白未来的发展方向。

根管治疗慢性根尖周炎5年预后及影响因素分析

目的:探讨慢性根尖周炎经根管治疗后的牙生存率、拔除原因、根尖愈合率及预后影响因素。方法 :回顾性队列研究纳入由同一名医师完成根管治疗的102例根尖周炎患者。主要预测变量为根管治疗难度系数(difficulty assessment of root canal therapy,DARCT),即根据牙根长度、牙根弯曲度、根管钙化度确定根管治疗难度系数,分为根管治疗难度系数较低(DARCT=3~4)、根管治疗难度系数中等(DARCT=5~7)、根管治疗难度系数较高(DARCT=8~9)。主要结果变量为牙的5年生存率及根尖愈合率,其他混杂变量为性别、年龄、根管数量、根充质量、冠修复情况。采用SPSS 21.0软件包对数据进行χ2检验和多因素回归分析。结果:根尖周炎患牙根管治疗后的5年生存率为81.4%(83/102),根尖愈合率为77.1%(64/83)。根管治疗难度系数和牙的生存率显著相关(P=0.017),难度系数较高根管牙常因根折、深牙周袋、牙周脓肿而拔除(P=0.027);多根管的牙常因根尖周炎反复发作而拔除(P=0.004)。单因素分析显示,根管数量(P=0.021)、根充质量(P=0.006)、根管治疗难度系数(P=0.000)和根尖愈合率显著相关。多因素分析显示,根管治疗难度系数(P=0.000)与根充质量(P=0.033)与根尖愈合率相关。结论:根尖周炎患牙的预后受根管治疗难度系数和根充质量的影响。根管治疗难度系数和根管数量与牙的拔除原因相关。

不同卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞CD14、TLRs表达的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)和牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)对成骨细胞表达CD14和TLRs的影响。方法:10μg/mLP.e-LPS和P.g-LPS刺激MC3T3-E1细胞,应用RT-PCR检测不同时间(0、1、3、6、12及24h)后,细胞CD14、TLR2及TLR4 mRNA表达的变化;流式细胞术检测P.e-LPS和P.g-LPS作用24h后,细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:P.e-LPS作用1h后,MC3T3-E1细胞CD14和TLR4 mRNA的表达量明显增加,TLR2 mRNA的表达量随着P.e-LPS作用时间的增加并无明显变化。P.g-LPS作用于MC3T3-E1细胞后,其CD14、TLR2、TLR4 mRNA的表达量均明显增加;流式细胞术分析显示,P.e-LPS作用24h后,与未加LPS组相比,CD14和TLR4蛋白的表达量均显著增加,但TLR2蛋白的表达量无显著增加。P.g-LPS作用24h后,细胞CD14、TLR2、TLR4蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论:P.e-LPS可能是通过CD14和TLR4受体对成骨细胞发挥作用,而P.g-LPS对成骨细胞的刺激作用则可能依赖于CD14、TLR2和TLR4受体。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞CD14表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞CD14表达的影响。方法:在有血清和无血清存在的情况下,用10μg/mLP.e-LPS作用于MC3T3-E1细胞24h,流式细胞术检测CD14的表达;10μg/mLP.e-LPS刺激MC3T3-E1细胞后,观察不同时间(0、1、3、6、12及24h)后检测细胞膜结合型CD14mRNA表达的变化。应用SPSS13.0软件包对结果进行两样本t检验、单因素方差分析和Dunnettt检验。结果:流式细胞术分析P.e-LPS作用24h后,CD14蛋白表达量增加,但无血清组增加更明显;随着P.e-LPS作用时间的增加,MC3T3-E1细胞膜结合型CD14mRNA的表达量逐渐增加,作用3h时表达最明显,作用大于6h后表达量逐渐降低。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的CD14表达增强,表明P.e-LPS可能通过CD14对成骨细胞发挥作用。

贾舸的诗

彼岸花我在绝望中等待，你在岁月里盛开。

不同处理步骤对根管治疗诊间及术后疼痛的影响

目的观察不同根管治疗方法处理患牙后诊间急症和根充后疼痛的发生率。方法选择200例40岁以上患者共200颗牙髓坏死的磨牙随机分为A、B、C、D、E组,分别按照不同的根管治疗处理步骤进行治疗,A组开放2 d,封药1周,再行根管预备、根管充填;B组开放2 d,根管预备后封药1周,再行根管充填;C组开髓、拔髓后封药1周,根管预备后封药1周,再行根管充填;D组开髓、拔髓后封药1周,再行根管预备、根管充填;E组开髓、拔髓、根管预备后封药1周,再行根管充填。观察5组的约诊间疼痛和根充后疼痛的发生情况。结果 A、B组均未发生诊间痛,C、D组先行开髓,拔髓后诊间痛发生率最高分别为20.0%和22.5%,其中D组最高。结论对于易发生诊间疼痛和根充后疼痛的患者及患牙先行开放2 d,再行根管治疗可有效减少诊间急症和根充后疼痛的发生。

Mtwo、TFA、M3-L和Protaper机用镍钛锉在根管预备中的应用

评价4种临床常用镍钛锉Mtwo、TFA、M3-L及Protaper根管预备能力。方法 体外实验组:选择树脂模拟根管40个,分为4组分别选取Mtwo,TFA,M3-L,Protaper机用镍钛锉进行根管预备,记录根管预备前后形态,分析4组镍钛锉的中心定位能力、预备时间及损耗情况。临床试验组:选择临床需行根管治疗的慢性牙髓炎磨牙病例80例,随机分为4组,分别使用Mtwo、TFA、M3-L及Protaper机用镍钛锉进行根管预备,并前瞻性分析其在根管预备后疼痛、根管充填合格率方面的不同。结果 体外实验组:树脂根管弯曲段中心定位能力最好的为M3-L组,最差为Protaper组,组间比较有显著统计学意义(P0.000),在根管直段中心定位能力最好为M3-L组,组间比较有显著统计学意义(P0.000);根管预备时间最短为M3-L组(229.20±31.39秒),组间比较有统计学意义(P0.001),根管预备过程TFA器械出现器械分离。临床试验组:4组机用镍钛锉预备后的磨牙根管充填合格率组间比较无统计学意义(P0.500),根管预备后24小时各组均有疼痛病例出现,但组间比较没有统计学意义(P0.199)。结论 4种机用镍钛锉在临床上磨牙根管治疗过程中都能取得良好的治疗效果,但体外实验证明M3-L镍钛锉的中心定位能力最好,根管预备所用时间最短,值得临床推广使用。

NF-κB在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞白介素6表达中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)诱导小鼠成骨细胞株MC3T3-El白介素6(IL-6)表达中的作用。方法:10 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞不同时间后,应用免疫荧光方法检测NF-κB核易位情况和BAY-117082对NF-κB核易位抑制情况,反转录聚合酶链反应(RT—PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAY-117082对MC3T3-El细胞的IL-6基因和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行多因素方差分析和Dunnett t检验。结果:在静息状态下,NF-κB定位在胞质中,10 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞30 min后即引起NF-κB快速的核易位;60 min后,大部分NF-κB重新定位在胞质里,10μmol/L BAY-117082预处理1 h可抑制P.e-LPS引起的NF-κB核易位,降低P.e-LPS诱导MC3T3-El细胞IL-6 mRNA表达水平和IL-6蛋白的分泌水平,其中,蛋白分泌水平从(774.983±6.585)ng/L降低至(377.384±14.620)ng/L(P<0.O1),而BAY-117082单独刺激组与空白对照组无显著差异。结论:P.e-LPS可诱导MC3T3-El细胞中NF-κB的核易位,P.e-LPS可通过激活NF-κB信号途径诱导MC3T3-El细胞产生IL-6。

不同氢氧化钙制剂对牙髓卟啉单胞菌的杀菌效果

目的:比较Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种氢氧化钙制剂对牙髓根尖周主要致病菌牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)活性的影响。方法:(1)通过动态比浊法比较在直接接触条件下不同氢氧化钙制剂不同作用时间对牙髓卟啉单胞菌的抑制作用。(2)选取新鲜拔除的人单根管牙85颗,经根管预备、高压消毒灭菌后,置入P.e菌悬液,建立牙髓卟啉单胞菌感染模型。将模型采用抽签法随机分为5组,即Endocal组、Calxyl组、国产氢氧化钙糊剂组、Vitapex组、无菌去离子水对照组。分别于封药前和封药7d后,用无菌纸捻在根管中取样,细菌培养计数菌落,并完成细菌24h回复实验。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex均能有效减少牙髓卟啉单胞菌的数量(P<0.05),细菌清除率均达95%以上。动态比浊法检测结果显示,Endocal、国产氢氧化钙糊剂抑菌作用优于其他组,有显著性差异(P<0.05);细菌培养法结果显示,Endocal组细菌清除率显著大于Vitapex组(P<0.05)。结论:Endocal、Calxyl、国产氢氧化钙糊剂、Vitapex 4种药物对牙髓卟啉单胞菌均有较好的抑制作用,其中,Endocal的抗菌作用优于Vitapex。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶1、2表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平的变化。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:10μg/mL的P.e-LPS刺激后,成骨细胞内p38迅速被活化,5～30 min为激活高峰(P<0.01),60 min后基本恢复至正常水平;ERK1/2磷酸化水平在P.e-LPS刺激5 min后明显增加,15 min后磷酸化水平最高(P<0.01),30 min后磷酸化水平下降。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的p38和ERK1/2蛋白表达增强,Pe-LPS可能通过p38和ERK1/2对成骨细胞发挥作用。

离子色谱-串联质谱检测牛奶和婴幼儿配方乳粉中的氯酸盐和高氯酸盐

为建立高效阴离子交换色谱-串联质谱法检测牛乳和婴儿配方粉中高氯酸盐和氯酸盐的方法,通过优化沉淀蛋白试剂和婴儿配方粉的纯化条件,用乙腈沉淀蛋白,离子色谱前处理柱净化上清液,使用Dionex IonPac AS19高效阴离子色谱柱分离,以氢氧化钾淋洗液进行梯度洗脱,流速0.35 mL/min,进样体积50μL,柱温30℃,采用质谱检测器检测。结果表明:在该试验条件下,高氯酸盐和氯酸盐能够很好地分离,且在较宽的浓度范围与其对应的定量离子峰面积呈良好的线性关系(R2>0.999)。高氯酸盐和氯酸盐的检出限分别为7 ng/L和1.7 ng/L,定量限分别为20 ng/L和5 ng/L。牛乳和婴儿配方粉的加标回收率在88.95%~102.33%范围,RSD在1.86%~3.21%范围。该方法样品处理简单,具有较低的检出限与定量限,较好的稳定性,良好的重复性与回收率,能广泛用于牛奶及婴幼儿配方奶粉的检测。

CD-14和Tool样受体在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞白细胞介素6表达中的作用

目的探讨CD-14和Tool样受体（Toll like receptors，TLR）在牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas erutodontalis，Pe）脂多糖诱导小鼠成骨细胞白细胞介素6（IL-6）表达中的作用。方法用10mg／L的Pe-脂多糖分别作用于小鼠成骨细胞MC3T3-E1不同时间，未加Pe-脂多糖的MC3T3-E1为空白对照组。反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附试验检测细胞IL-6基因和蛋白的表达，RT-PCR和流式细胞术检测细胞表面CD-14、TLR-2及TLR-4基因和蛋白的表达变化。抗小鼠CD-14、TLR-2及TLR-4抗体预处理细胞后，采用RT-PCR法检测Pe-脂多糖诱导细胞IL-6mRNA表达的变化。应用SPSS11．0统计软件对结果进行单因素方差分析Dunnett-t检验。结果Pe-脂多糖作用于细胞后，与空白对照组比较细胞IL-6mRNA和蛋白的表达明显增加，6h时IL-6表达[（36．534±0．574）ng／L]显著高于空白对照组[（11．696±0．672）ng／L）]，P〈0．01；空白对照组中CD-14和TLR-4mRNA呈弱表达，CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别为（39．038±3．131）％和（11．438±0．385）％，加入Pe-脂多糖后CD-14和TLR-4mRNA表达明显增加，CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别增加至（62．407±1．800）％和（21．367±2．271）％，但TLR-2的表达未见明显变化；中和抗体实验证明CD-14或TLR-4抗体均可部分抑制细胞IL-6mRNA的表达，TLR-2抗体则无此作用。结论Pe-脂多糖作用于成骨细胞MC3T3-E1诱导其炎症因子IL-6的产生依赖于CD-14和TLR-4受体，与TL-一2无关。

口腔致病菌膜表面相关受体研究进展

能引起牙体牙髓病和牙周病的细菌有多种,其致病因子在进入机体后,与宿主细胞膜表面的相关受体结合,如CD14和Toll样受体,传导炎症信号,产生炎症介质,导致组织炎性破坏。不同致病菌或相同致病菌的不同致病因子作用于宿主细胞的表面受体不尽相同,产生炎症反应各不相同。因此,研究这些不同口腔致病菌的膜相关受体对牙体牙髓病和牙周病的治疗具有重要指导意义。本文就多种口腔致病菌的膜表面相关受体进行综述。