应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究

本文介绍了一种快速检测赭曲霉毒素A的胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条的检测限为10ng/ml,检测时间为10min,加上使用方便,经济适用,使之适合于赭曲霉毒素A现场快速检测之用。

应用抑制性消减杂交法筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因

为了筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因,应用抑制性消减杂交(SSH)构建了两个红曲菌的cDNA消减文库。利用分子生物学软件从这两个文库中找出八条同源序列,通过Blast软件对这八条序列进行分析,结果显示,它们可能是新的基因片段,递交后被Genbank接收。

我国干酪生产的研究动态

介绍了干酪的营养特点和传统生产工艺 ,并详细介绍了近年来在干酪成熟过程中微生物的变化、干酪成熟过程中蛋白质的变化、凝乳酶及其代用品和乳清综合利用等领域的研究进展。

红曲霉总RNA和mRNA的提取与测定

确定了红曲霉总RNA和mRNA的提取方法及测定方法。结果表明,所得到的总RNA和mRNA质优量足,可以满足后续实验的要求。

关于红曲霉产桔霉素规律的初步探讨

该研究将12株红曲霉分别接种于酵母浸膏蔗糖培养基(YES)和土豆葡萄糖培养基(PDA),采用高效液相色谱法(HPLC)检测了培养基中桔霉素的含量,同时从中选择产桔霉素量最大的红曲霉菌种AS3.4384作进一步研究。结果表明,桔霉素的生成量与菌种、培养基和培养条件密切相关。

赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较

本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同,适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。

红曲菌cDNA消减文库的构建

应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库.分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250～750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250～750bp的插入片断.所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础.

胶体金免疫层析法检测酱油中黄曲霉毒素B_1

采用胶体金免疫层析法检测酱油中的黄曲霉毒素B1。加标的酱油样品经提取后,以胶体金免疫层析法对其进行黄曲霉毒素B1测定,并与酶联免疫吸附法进行比较。结果表明,当酱油中黄曲霉毒素含量超过国家限量标准(5μg/kg),胶体金免疫层析法检测结果为阳性,说明该方法能够满足酱油样品中黄曲霉毒素B1监控的要求。

红曲霉培养过程中桔霉素积累规律的初步研究

选择不同的菌种、培养基和培养条件进行红曲霉产桔霉素的研究,结果表明,桔霉素的生成量与菌种、培养基和培养条件密切相关。

红曲霉产桔霉素的研究动态

红曲霉在食物中的应用已有千年的历史。近年来,由于它能够生成多种生理活性物质而备受各国的关注。然而,目前发现多种长期应用于工业生产的红曲霉在产生色素和生理活性物质的同时,还能分泌一种真菌毒素—桔霉素。桔霉素主要作用的靶器官是肾脏,它不仅可以致畸、导致肿瘤的发生,而且可以诱发突变。本文综述了近年来有关红曲霉产桔霉素的研究动态,其中包括桔霉素的理化性质、毒性、检测方法、桔霉素在红曲霉培养过程中的动力学研究以及抑制其生成的对策。

大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究

本研究将Oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌O157:H7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加Oxyrase酶的对照组相比,添加了Oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌O157:H7的浓度明显提高。实验结果表明,Oxyrase酶在大肠杆菌O157:H7快速培养中具有潜在的利用价值。

贮藏于4℃的家制酸奶中低浓度大肠杆菌O157:H7的存活研究

牛奶预热后分装并分别接种体积分数3%的酸奶和2.15(lg(CFU/mL))的大肠杆菌O157:H7,在45℃下发酵5h后贮藏于4℃的冰箱中。利用Pathatrix大体积循环系统中偶联了抗体的免疫磁珠特异性地捕获这些酸奶中的大肠杆菌O157:H7。免疫磁珠重悬于1%的蛋白胨水后涂布于添加了新生霉素(5mg/L)的山梨醇麦康凯固体培养基中,培养基在37℃恒温培养箱中放置24h。实验结果表明,酸奶中大肠杆菌O157:H7的数量逐渐减少,12d后才检测不到。因此乳制品加工及保存过程中,需要加强对大肠杆菌O157:H7污染的监测,以保证乳制品的安全性。

不同贮藏时间及温度下莱克多巴胺浓度变化的研究

研究猪尿中的莱克多巴胺浓度在不同贮藏时间及温度下的变化。猪尿中加入莱克多巴胺后分别在室温、冷藏和冷冻条件下立即贮藏。在贮藏1,7,14,21d后分别用酶联免疫吸附法对尿样中的莱克多巴胺进行定量检测。21d后,冷冻保存尿样中的莱克多巴胺的浓度从3.14ng/mL降到1.59ng/mL,比室温和冷藏条件下保存更加稳定。因此,尿样收集后应该尽快冷冻贮藏。

用PCR法检测小鼠胃粘膜中的幽门螺杆菌

选取合适引物 ,用多聚酶链式方法扩增小鼠胃粘膜DNA ,经琼脂糖凝胶电泳分析 ,感染了幽门螺杆菌的小鼠的胃粘膜DNA扩增产物显示有一条 2 98bp的区带。

免疫磁分离结合胶体金免疫层析法快速检测大肠杆菌O157∶H7

以抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体偶联磁珠制得免疫磁珠;以胶体金标记的抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体为标记抗体,抗大肠杆菌O157∶H7多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别作为检测线和质控线成分制备胶体金免疫层析试纸条。将免疫磁珠分离和胶体金免疫层析法相结合应用于大肠杆菌O157∶H7的现场快速检测中。结果表明:1 mL 7.6×103CFU/mL菌液经过免疫磁珠分离富集后,用胶体金免疫层析法检测可得到阳性结果。对于10 CFU/g大肠杆菌O157∶H7污染的食品样本,经过6 h预增菌,免疫磁珠分离和胶体金试纸条检测72 min即可检出。本方法的建立对于食品中有害物质的现场快速检测具有重要意义。

集成免疫磁珠富集和免疫层析的黄曲霉毒素M_1快速检测法

以喷涂了检测抗原黄曲霉毒素M1-BSA和驴抗鼠二抗形成检测线和质控线的硝酸纤维膜制备免疫层析试纸条,采用EDC/NHS法制备偶联了抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的免疫磁珠。免疫磁珠与待检样本混合,经捕获、磁分离后,浓缩重悬液直接用免疫层析试纸条检测,首次建立了集浓缩样本与免疫层析于一体的黄曲霉毒素M1快速检测法。该方法用于检测原料乳中黄曲霉毒素M1,检出限为0.1μg/L,低于我国制定的黄曲霉毒素M1限量标准(0.5μg/L),与其它真菌毒素和原料乳中常检违法添加物无交叉反应,分析结果与酶联免疫吸附法(ELISA)结果一致。本方法适合现场快速检测原料乳中黄曲霉毒素M1。

纳米银杀菌机理的研究进展

纳米银因其高效、广谱及不易产生耐药性等优点,已成为目前抗菌材料的研究热点,但其杀菌机理尚有待于进一步研究。本文综述了纳米银杀菌机理的最新进展,以期为纳米银抗菌材料的应用提供参考依据。

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B_1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。

基于荧光硅球的克伦特罗快速定量免疫层析试纸条的研制

采用荧光硅球为标记物制备了快速定量检测克伦特罗（CLE）的荧光硅球免疫层析试纸条。通过正交实验得到最优荧光硅球抗体标记量、硅球垫抗体标记物用量以及检测线抗原浓度。在最优条件下，试纸条线性范围为0．28-3.3μg／L。猪尿样品CLE加标回收率为81．7％～101％，表明此试纸条可实现猪尿中CLE残留的快速定量检测。

免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油中黄曲霉毒素B_1

将活泼酯法活化后的羧基化超顺磁珠与辛酸一硫酸铵法纯化的抗黄曲霉毒素B，单克隆抗体偶联，获得黄曲霉毒素B，（AFB。）免疫磁珠。比较不同粒径大小的免疫磁珠的富集效率，优化磁珠偶联抗体的条件以及富集AFB。的反应条件，初步建立了以免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油基质中的AFB，的方法。结果表明：酶联免疫吸附法在0．05～0．3gg／kg范围内具有良好的线性关系，相关系数为0．9842。在酱油中添加加1-7μg／kgAFB，的平均加标回收率为83．6％～104％，相对标准偏差为7．2％～13．7％。该方法具有快速简便、设备简单、灵敏度高、准确性好等优点，可很好地应用于酱油中的AFB，的快速检测。