芍药苷抗炎作用机制研究进展

炎性反应是对外界刺激的异常免疫反应,可导致多器官组织功能损伤障碍。中医学运用芍药治疗炎性反应已有近千年历史,芍药苷是从芍药干燥根中提取的主要天然活性成分,具有广泛的抗炎和免疫调节作用,临床应用潜力巨大。本文对芍药苷在抗炎作用机制以及研究现状予以综述,以期为芍药苷抗炎作用机制提供理论依据,也为芍药苷进一步的开发和应用提供参考。

缺氧诱导基因1C在牦牛隐睾中的表达及其调控机制研究

旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持细胞分离培养、间接免疫荧光、RT-qPCR、Western blot、HIGD1C过表达与干扰载体构建及体外细胞转染等技术,探究HIGD1C对牦牛睾丸支持细胞凋亡的调控机制。结果显示:正常睾丸基底膜及间质组织完整,曲细精管、管周肌细胞及支持细胞等排列紧密,隐睾中曲细精管断裂萎缩且HIGD1C在牦牛隐睾组织中转录及蛋白的表达水平极显著于高于正常睾丸组织(P<0.01);HIGD1C蛋白主要分布在睾丸间质细胞和支持细胞;成功分离培养出牦牛睾丸支持细胞且HIGD1C蛋白定位于原代睾丸支持细胞胞核;HIGD1C过表达支持细胞后,Bcl-2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01),流式细胞术结果显示过表达HIGD1C组支持细胞凋亡率极显著上升(P<0.01);反之,HIGD1C敲除后,Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),流式细胞术结果显示HIGD1C敲除组支持细胞凋亡率极显著下调(P<0.01)。本研究结果表明:正常睾丸组织结构完整,隐睾间质疏松,且HIGD1C在牦牛隐睾组织中高表达。体外细胞试验表明上调HIGD1C,可以激活促凋亡蛋白,促进牦牛支持细胞凋亡;反之,下调HIGD1C表达水平会抑制支持细胞凋亡。提示HIGD1C参与调控牦牛睾丸支持细胞的凋亡,为揭示牦牛隐睾的发生机制提供了参考。

玉米赤霉烯酮影响绵羊卵母细胞体外成熟的分子机制研究

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理,TG1、TG2和TG3组分别在成熟液中添加10、20、30μmol/L ZEA进行体外成熟培养,qPCR技术检测减数分裂成熟和凋亡等相关基因mRNA的相对表达量,ROS检测试剂盒检测卵母细胞内ROS水平。结果表明:与CG组相比,当培养液中ZEA浓度达到20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,GPX、SOD1、SOD2、Caspase3、ATG3和ATG7的mRNA表达水平显著升高,而CDC20、GDF9和BMP15的mRNA表达水平显著降低,但LC3、BAX和BCL-2的mRNA表达水平在统计学上没有显著差异;与CG组相比,添加ZEA后卵母细胞内ROS含量极显著升高。以上结果提示,ZEA能通过诱导绵羊卵母细胞发生凋亡和氧化应激,抑制细胞分裂从而影响卵母细胞的体外成熟。

芍药苷对乳腺炎小鼠乳腺组织氧化应激损伤的信号通路研究

为探究芍药苷通过何种通路对乳腺炎小鼠氧化应激损伤的保护作用及作用机制,本研究选取产后6 d的BALB/c雌鼠,随机分为阴性对照组、模型组、芍药苷低剂量组(10 mg/kg)、芍药苷中剂量组(20 mg/kg)、芍药苷高剂量组(40 mg/kg)和地塞米松阳性对照组(5 mg/kg),每组10只,除阴性对照组外,其余小鼠均采用乳导管注入脂多糖(LPS)的方法建立乳腺炎模型,分别于造模前14 h、2 h以及造模后6 h对小鼠给药干预。造模结束24 h后剖检各组小鼠,观察乳腺组织形态变化,制备各组小鼠乳腺组织病理切片观察其病理变化。结果显示,与阴性对照组相比,模型组小鼠乳区红肿并伴有出血点,乳腺组织病变观察发现乳腺腺泡细胞内炎性细胞浸润明显,腺泡形态改变,表明乳腺炎小鼠模型可用于后续实验。取各组小鼠乳腺组织,采用荧光探针法测定小鼠乳腺组织中活性氧自由基(ROS)含量,采用免疫荧光组织化学技术测定小鼠乳腺组织中4-羟基壬烯酸(4-HNE)蛋白的表达水平,采用生化试剂盒检测小鼠乳腺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blot分别检测小鼠乳腺组织中Nrf2信号通路关键分子核因子-红细胞2相关因子2(Nrf 2)、血红素氧合酶1(HO-1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶(GCLC)、醌氧化还原酶(NQO1)mRNA的转录及蛋白表达水平。结果显示,与阴性对照组相比,模型组小鼠乳腺组织中ROS、MDA含量及4-HNE蛋白表达水平均极显著升高(P<0.01),GSH-Px和SOD酶活性及含量均极显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1、GCLC和NQO1 mRNA的转录水平均显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),其蛋白表达水平与mRNA转录水平趋势基本一致;与模型组相比,各给药组小鼠乳腺组织病理损伤明显减轻,小鼠乳腺组织中ROS、MDA含量以及4-HNE蛋白表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),GSH-Px、SOD含量极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05);Nrf2、HO-1、GCLC和NQO1mRNA的转录水平均显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),其蛋白表达水平与mRNA转录水平趋势基本一致。综上所述,本研究证实芍药苷能够治疗小鼠乳腺炎及小鼠乳腺组织氧化损伤,且高剂量芍药苷的治疗作用最佳,其具体作用机制与芍药苷显著激活宿主细胞中Nrf2信号通路拮抗氧化应激损伤有关,该结果为芍药苷在动物乳腺炎预防和治疗中的应用提供了科学依据。

脂磷壁酸激活奶牛乳腺中NUPR1表达及分布研究

为了探究NUPR1基因在奶牛乳房炎中的表达及分布规律,通过构建脂磷壁酸(LTA)诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)体外炎症模型,以奶牛核蛋白1(Nucleus Protein 1,NUPR1)基因为研究对象,利用免疫组织化学技术(IHC)测定NUPR1在患病奶牛乳腺组织中的分布情况。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(WB)检测炎症相关因子、NUPR1基因及其上下游基因在奶牛乳腺炎组织及乳腺上皮细胞炎症模型中的表达规律。qRT-PCR和WB结果显示,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α在乳腺病理组织及细胞炎症模型中均极显著上调表达(P<0.01),NUPR1在奶牛乳房炎病理乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症模型中均显著或极显著上调表达(P<0.05,P<0.01),同时,DNMT1下调表达,KLF4、SESN2和SOCS3基因上调极显著表达(P<0.01)。IHC结果显示,NUPR1主要表达于奶牛乳腺上皮细胞中,并且在奶牛患病乳腺组织中的表达量高于正常组。本研究结果为进一步探究NUPR1基因在乳房炎病理进程中的调控机理提供了试验和理论基础。

双峰驼精清诱导排卵活性因子的HPLC分离纯化及生物活性测定

利用C8 柱经HPLC对QHyperD柱分离的驼精清活性组分F3和F5进行分离纯化 ,大鼠垂体组织培养 ,RIA测定培养液中LH和FSH的浓度。实验结果表明 ,F3和F5经过HPLC纯化后 ,各得到 4个组分 ,分别以F3-1～F3- 4和F5 - 1～F5 - 4表示。其中F3- 3和F5 - 3可引起体外培养的大鼠垂体LH的释放显著增加 ,但均未引起FSH发生明显变化。用C18柱经HPLC或毛细管电泳对F3- 3进一步纯化 ,无论在HPLC或毛细管电泳仪中 ,F3- 3均呈现两个波峰 ,而且间隔非常靠近 ,说明F3-

双峰驼精清诱导排卵活性成分的DEAE-纤维素柱层析分离及其生物活性

选用 DEAE-纤维素离子交换柱对双峰驼精清进行分离 ,各层析组分用于大鼠垂体组织体外培养 ,并给母驼肌注有活性的组分 ,以 RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆中 LH及 FSH的浓度。结果表明 ,驼精清经 DEAE-纤维素柱分离后可得到 5个蛋白组分 ( L1～ L5) ,其中 L3在大鼠垂体培养时引起 LH的释放明显增加 ( P<0 .0 5) ,FSH则无明显变化。给卵巢上无大卵泡发育的母驼肌注有活性的组分 L3 ,可引起血浆中LH明显升高 ,FSH也无变化。由此表明 ,L3在体内外试验中均具有引起 LH释放的生物活性 ,它可能是诱导排卵的活性因子或其成分之一。

双峰驼促卵泡素放射免疫测定方法的建立

本试验以羊—羊FSH放射免疫分析方法为依据,建立了测定双峰驼外周血浆中FSH的异源性放射免疫分析方法,通过一系列实验表明,在目前尚难建立驼FSH同源性放射免疫分析方法的情况下,该方法是研究双峰驼生殖内分泌学的可靠手段之一。本研究还用此方法测定了肌肉注射精清诱导排卵前后母驼外周血浆中FSH的变化。

面向21世纪的兽医科技发展及人才培养

兽医科技虽然在本世纪取得了辉煌的成绩，但随着２１世纪的到来，兽医学存在的社会大条件将发生明显变化，人类生存环境的恶化倾向，科学与人文两种文化变化的不平衡等已构成对兽医学明显的挑战，本文就２１世纪兽医科学研究发展趋势及对人才的要求、２１世纪兽医实践及对人才的要求和２１世纪兽医教育及人才培养３个方面对兽医科学的发展和人才培养进行了讨论。

双峰驼精液的某些特点及化学成分分析

本研究从10峰公驼采精158次,研究了双峰驼精液的基本特征及主要化学成分。结果表明,双峰驼的射精量为4.35±1.86毫升,采精后精子活力为0.78±0.19,精子浓度为5.59±1.20亿/毫升,精液的pH为7.37±0.06。此外还对精清中的葡萄糖、乳酸、磷、钙、钾、钠、氯、镁及总氮含量进行了测定。

动物性别控制研究进展

一、精子性别的分离鉴定方法 根据精子所携带的性染色体的不同,可分为含X染色体和含Y染色体精子,它们之间由于DNA含量的不同而有一定的差异。根据这些差异人们建立了各种各样分离两类精子的方法,以期通过预先选择精子的性别来达到控制子代性别的目的。

4例公牛睾丸雌性化综合征的临床观察

睾丸雌性化综合征(Testicular feminization syndrome,Tfm)是哺乳动物的一种X连锁遗传性疾病,是由于睾酮的靶器官缺少雄激素(睾酮或双氢睾酮)的特异性受体导致在发育过程中雌性化的一种雄性假两性畸形。患病动物在遗传上为雄性。

抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库

以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料,分离Poly(A)+ RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段,将患乳房炎奶牛cDNA分成2组,分别与2种不同的接头连接,再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到610个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在250～750 bp 之间.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础,对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义.

The Acute Toxicity Test in Mice and Bacteriostasis in vitro of Yandureqing and Its Microemulsion

[Objective] The aim of this study is to evaluate the safety and bacteriostasis of Yandureqing(AEE)and its microemulsion(AEE-ME).[Method]The acute toxicity was tested in mice by intragastric administration,and median lethal dose(LD50)as well as its 95% confidence interval was calculated by modified Karber method;the bacteriostasis was investigated by cylinder plate method.[Result]LD50 of AEE in mice was 10.937 g/kg with the 95% confidence interval of 9.309-12.850 g/kg;and LD50 of AEE-ME in mice was 5.357 g/kg with the 95% confidence interval of 4.388-6.566 g/kg.The MICs of AEE to Escherichia coli O149 from swine,Staphylococcus aureus,Salmonella pullorum and Streptococcus agalactiae were 10.00,20.00,20.00 and 10.00 mg/ml,respectively;while the MICs of AEE-ME to the 4 kinds of bacteria mentioned above were 5.00,10.00,5.00 and 5.00 mg/ml in turn,and that to Pseudomonas aeruginosa is 20.00 mg/ml.[Conclusion]AEE is an actually nontoxic drug and AEE-ME belongs to the low toxic preparation.AEE and AEE-ME have obvious bacteriostasis,in which AEE-ME is superior to AEE.

奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析

本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。

川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

为了探讨川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用,以小鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,实验分为空白对照组、β-巯基乙醇(BME)阳性对照组和川芎嗪诱导组。采用荧光免疫化学和Western blot方法,分别检测神经干细胞巢蛋白(nestin)和经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达;RT-PCR检测诱导不同时间对神经细胞相关基因Nestin、NSE、β-微管蛋白III(β-Tubulin III)和核受体相关因子-1(Nurr1)mRNA表达的影响。结果显示川芎嗪诱导间充质干细胞24 h后,细胞形态发生显著改变,细胞突起形成且数目不等,形成神经元样细胞。细胞死亡率低于β-巯基乙醇诱导组。免疫荧光化学法和western blot结果显示:川芎嗪诱导后的细胞nes-tin和NSE蛋白表达呈阳性,且表达丰度显著高于β-巯基乙醇诱导组。川芎嗪作用不同时间的BMSCs表达神经细胞相关基因Nestin、β-Tubulin III、NSE和Nurrl。结果表明川芎嗪能定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,是较理想的诱导剂。

奶牛隐性乳房炎诊断新指标研究进展

乳房炎是造成奶牛业损失最严重的传染性疾病。目前应用于奶牛隐性乳房炎诊断的常用方法有加州乳房炎试验(CMT),乳汁体细胞计数(SCC)等,但在常规使用中都存在一定的局限性。奶牛乳汁中一些酶活性和急性期蛋白量的变化是监测隐性乳房炎很有价值的指标,可用于泌乳早期感染乳区的检测和选择感染奶牛进行干乳期治疗。结合珠蛋白(HP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)是奶牛最为敏感的急性期蛋白,它们在急性炎症时大量增加。概述了乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰基--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、乳过氧化物酶(LP)、碱性磷酸酶(ALP)、结合珠蛋白(HP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)等指标在奶牛乳房炎诊断中的应用研究进展。

临床型乳房炎与正常奶牛血浆的差异蛋白质组研究

【目的】检测和分析临床型乳房炎与正常奶牛血浆中差异表达的蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离血浆蛋白,凝胶用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色,PDQuest7.4软件自动检测分析差异表达蛋白斑点并经高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】凝胶图谱分析后得到3个差异蛋白斑点,鉴定为2种蛋白质(结合珠蛋白前体和乳腺球蛋白)。结合珠蛋白前体在临床型乳房炎奶牛血浆中表达量增加,可作为乳房炎诊断标记分子;而乳腺球蛋白的表达量下调。【结论】临床型乳房炎与正常奶牛的血浆中蛋白质的表达存在差异,对差异表达蛋白质的研究有利于探索机体的生理病理状态,可为疾病的诊断和治疗提供全面的信息。

红景天苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

背景:前期实验证明红景天苷能诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向分化,但是具体的影响方式尚不清楚。目的:以骨髓间充质干细胞为研究对象,进一步探讨红景天苷诱导其向神经元样细胞定向分化的作用方式和分子机制。方法:选取第2代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,按照不同的诱导剂分为维甲酸诱导组、红景天苷诱导组和对照组,通过不同的时间点对细胞进行观察。结果与结论:两诱导组细胞不同时间点神经干细胞标志物巢蛋白、神经细胞分化相关的兔抗微管蛋白和神经微管相关蛋白2表达阳性率均高于对照组(P<0.01);神经胶质纤维酸性蛋白阳性率维甲酸组显著高于红景天苷组(P<0.01)。RealTime-PCR结果显示,维甲酸和红景天苷诱导不同时间,两组细胞均有神经细胞相关基因神经元特异性烯醇化酶、神经微管相关蛋白2mRNA表达,与诱导时间有关且不完全相同,两组间神经胶质纤维酸性蛋白mRNA的高丰度出现于诱导早期;诱导后两组神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达随时间延长显著增加,兔抗微管蛋白表达出现于诱导早期。说明红景天苷能促进骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,其诱导效应与维甲酸相似,且向神经元样细胞定向分化方面优于维甲酸。

Ca^(2+)信号介导川芎嗪诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的定向分化

用含2.4 mg.mL-1川芎嗪提取液对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行诱导,探讨川芎嗪体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞的作用.应用EGTA(细胞外Ca2+螯合剂)、Nifedipine(L-型Ca2+通道阻断剂)和LY294002(PI3K阻断剂)等Ca2+阻断剂分别作用细胞,RT-PCR和Western blot技术研究Ca2+信号在川芎嗪诱导BMSCs分化为神经细胞过程中的作用.结果表明:川芎嗪作用不同时间的BMSCs均可见Nestin、β-Tubulin Ⅲ、NSE和Nurrl的表达;川芎嗪诱导后的细胞浆内Nestin和NSE蛋白表达呈阳性.EGTA、Nifedipine及LY294002分别阻断细胞外Ca2+、L-型Ca2+通道及PI3K后,NSE和Nurr1基因及NSE蛋白表达较川芎嗪诱导组显著上调.以上结果说明川芎嗪能使BMSCs定向分化为神经元样细胞,细胞内、外Ca2+的减少可促进川芎嗪诱导BMSCs向神经细胞的分化,Ca2+信号在川芎嗪诱导BMSCs向神经细胞定向分化过程中起负调控作用.