假单胞菌ND6菌株水杨酸羟化酶基因(nahG)的核苷酸序列分析和酶鉴定

水杨酸羟化酶是细菌萘降解途径中的关键酶,它能催化水杨酸脱羟和羟化,生成儿茶酚.假单胞菌(Pseudomonas)DN6菌株的萘降解基因位于102kb的质粒pND6-1上,以pUC18质粒为载体,制备了含有1～3kbpND6-1DNA随机片段的基因文库,通过DNA测序和DNA序列同源性分析,从基因文库中筛选出含有水杨酸羟化酶基因nahG的克隆.nahG基因的大小为1305bp,编码的水杨酸羟化酶(NahG)由434个氨基酸组成,与PseudomonasputidaNCIB9816-4菌株的水杨酸羟化酶基因相比,核苷酸序列的同源性为100%,与其它10种细菌的水杨酸羟化酶基因相比,核苷酸序列的同源性为32%～99%.酶学实验表明,ND6菌株的水杨酸羟化酶具有广泛的底物特异性,它不仅能代谢水杨酸,还能代谢多种水杨酸的衍生物,如乙酰水杨酸、黄基水杨酸、3-甲基水杨酸、5-甲基水杨酸和5-氯水杨酸等.

恶臭假单胞菌ND6菌株catA基因的克隆和表达及其儿茶酚裂解途径探讨

恶臭假单胞菌ND6菌株的萘降解质粒pND6-1中编码儿茶酚1,2-双加氧酶的catA基因在大肠杆菌中进行了克隆和表达,并研究表达产物的酶学性质。结果表明:酶的Km为0.019μmol/L,Vmax为1.434μmol/(min.mg);具有很好的耐热性,在50℃保温45min后仍能够保留酶活力的93.7%;Fe2+对酶活性有显著的促进作用,其比活力是对照反应的292%;酶对4-氯儿茶酚的催化活性非常低,属于Ⅰ型儿茶酚1,2-双加氧酶。以萘为底物生长时,ND6菌株的细胞提取液中既存在催化邻位裂解途径的儿茶酚1,2-双加氧酶活性,也存在催化间位裂解途径的儿茶酚2,3-双加氧酶活性。以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为唯一碳源生长时,ND6菌株细胞提取液的儿茶酚1,2-双加氧酶活性远远大于儿茶酚2,3-双加氧酶活性。表明ND6菌株既能通过儿茶酚间位裂解途径降解萘,也能通过儿茶酚邻位裂解途径降解萘,而以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为诱导物时只利用儿茶酚邻位裂解途径。

萘和苯酚降解菌中儿茶酚2,3-双加氧酶基因的类似性分析及杂种酶构建

从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PCR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2,3-双加氧酶,序列中都含有9个严格保守的氨基酸残基(Gly30、His153、Leu172、His199、His214、His246、Tyr255、Pro259、Glu265),均属于外切双加氧酶的I.2.A亚家族.通过盒式PCR,用各种萘和苯酚降解菌的C23O基因中心区替换恶臭假单胞菌ND6菌株pND6-1质粒中nahH基因的中心区,得到5个杂种C23O基因,这些基因在pET-E.coli BL21(DE3)系统中表达以后,均能检测到C23O活性,其中中心区来自假单胞菌ND24菌株C23O基因的杂种酶C23O-ND24,其比活力高于对照恶臭假单胞菌ND6菌株的野生型C23O.

应力性骨折的血清蛋白质组学分析

目的采用双向电泳-串联飞行质谱技术分析应力性骨折(SF)患者的血清蛋白质组变化,筛选可用于SF早期诊断的生物标志物。方法 SF组和正常对照组血清样本均为混合血清,各由21例平均年龄为19岁的SF战士和正常对照战士的血清分别混合而成。血清样本去除高丰度蛋白后进行双向凝胶电泳(2-DE),比较两组血清蛋白质谱图,寻找差异蛋白点。采用基质辅助激光解吸串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)技术,结合生物学软件和数据库检索对差异蛋白点进行鉴定。结果初步筛选出7个差异蛋白点,经质谱鉴定得到6种蛋白质,分别与新陈代谢、维持正常渗透压、免疫应答及氧化反应相关。在SF组中,对氧磷酶1、白蛋白对碘氧基苯甲醚CRA_h、血清白蛋白前体、白蛋白、甲状腺素结合前白蛋白表达量减少(P<0.05),而血红素结合蛋白前体表达量增加(P<0.05)。结论基于凝胶电泳的蛋白质组学分析可发现与SF相关的血清生物标志物;机体的免疫应答及氧化反应系统可能参与了SF的发生发展。

酚降解菌株的分离、鉴定和在含酚废水生物处理中的应用

从石油化工厂的活性污泥和废水混合物中分离到10个降解酚的细菌菌株,经16S rRNA基因序列分析,5个菌株(PD1、PD2、PD6、PD7和PD39)被鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.),4个菌株(PD4、PD5、PD8和PD9)为不动杆菌(Acinetobactersp.),1个菌株(PD3)为丛毛单胞菌(Comamonassp.).对假单胞菌(Pseudomonassp.)PD39菌株的酚降解特性、最适生长条件、降解底物的范围、儿茶酚1,2-双加氧酶(C12O)和儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)活性、含酚废水的生物处理等,进行了详细研究.结果表明,PD39菌株的最适生长和降解条件是,培养基的起始pH为7.0,培养温度为30℃,酚浓度为800 mg/L,对酚的最大降解浓度为1 200 mg/L.酚浓度为637 mg/L的工业废水经72 h处理酚的去除率达到99.96%.PD39菌株有很好的应用潜力来作含酚废水活性污泥处理系统的强化菌株.

Java异常处理

强大的异常处理机制是Java的一大优势 ,正确地使用Java异常处理能够使程序更健壮 ,但在实际应用中对Java异常处理存在很多不合理的地方。对Java异常处理机制和异常类层次作了简单介绍 ,并对异常处理中应该注意的事项作了一个总结。

武警新兵集训期间伤病发生情况分析

目的分析武警新兵集训期间伤病发生的时间、兵源地域和城乡分布特点,为预防和减少各种伤病的发生提供依据。方法采用分层随机整群抽样方法,按照国际ICD-10标准进行疾病分类。采用Epiinfo6.0录入数据,SPSS11.0进行数据分析。结果新兵集训期间,呼吸系统疾病占所有系统疾病的54.06%。就伤病总的时间趋势而言,开训前2周呈上升趋势,以后逐渐下降,第2周、第6周和第10周出现3个高峰,昼夜发病率分别达到12.66‰、8.45‰和7.00‰。上呼吸道感染在第2周和第10周出现2个发病高峰,分别为6.54‰和3.94‰。胃肠炎的昼夜发病率第8周(1.14‰)和第11周(0.83‰)较高。踝关节扭伤的发病率第2周和第6周较高,分别为0.70‰和1.14‰。来自于华东、华北、华中和东北4个地区的新兵发病率有显著差异(χ2=71.217,P<0.05)。4个地区间上呼吸道感染发病率不同(χ2=25.771,P<0.05),而胃肠炎和踝关节扭伤无显著性差异(P>0.05)。城乡新兵总发病率无显著性差异(χ2=0.021,P=0.884)。农村兵踝关节扭伤的发病率显著高于城镇兵(χ2=7.29,P=0.007)。上呼吸道感染和胃肠炎发病率在城乡新兵间无显著性差异。结论预防呼吸系统疾病对集训卫生防病工作意义重大;防病工作在不同训练期间应有所侧重;卫生防病预案的制定需要遵循疾病自身发病特点。

我国棉花抗枯黄萎病品种纤维品质遗传改良评价

对我国108个抗枯、黄萎病骨干品种的纤维品质进行了分析,整体表现纤维较长,27mm以下的品种较少;比强度平均值较低,但也有少数高强力品种;马克隆值较大,纤维较粗。20世纪60-90年代抗病育种对纤维品质未明显改进,纤维长度、比强度、马克隆值平均值均无显著增长;但纤维长度类型更加丰富,纤维长度最大值有所增加,最高强力品种的比强度值逐渐提高,90年代品种中有较细纤维类型。从中筛选出纤维长度在33mm以上,比强度在33.2cN/tex以上,纤维整齐度在87.1%以上,马克隆值在3.8-4.3之间的品种各10个,筛选出纤维品质指标综合优良的品种9个。

降解萘的假单胞菌ND24菌株的分离和萘污染土壤的生物修复

用富集培养法从石油工业废水中分离到高效降解萘的ND24菌株.该菌株能以萘为惟一碳源生长,在48 h内将无机盐培养基中2 g/L的萘降解98.4%.该菌株还能降解水杨酸、对羟基苯甲酸、邻苯二甲酸和苯乙酸.16S rRNA基因测序和同源序列比对表明,ND24菌株属于假单胞菌(Pseudomonassp.).将ND24菌株接种到含有0.2 g/dL萘的灭菌土壤中,经过14 d室温培养以后,萘的去除率为98.2%.

武警某部2008年新兵集训期间训练伤发生情况分析

目的分析新兵集训期间训练伤的发病特点,为训练伤的防治提供指导。方法用分层随机整群的抽样方法选取武警某部2000年新兵作为研究对象,分析其训练伤发生的时间趋势、伤类构成及其影响因素。用Epilnfo 6.0录入数据,SPSS 11.0软件分析数据。训练伤分类参照《中国人民解放军军事训练伤诊断分类标准》。结果新兵集训期间训练伤发生率为1.35‰。过劳性损伤发生率为0.28‰,其中创伤性关节炎占39.19%;急性损伤发生率为1.06‰,其中关节扭伤占其51.82%。开训后第6周出现训练伤发生高峰(2.86‰)。华东、华北、华中和东北4个地区来源的新兵中训练伤的发生率不同(χ2=9.998,P=0.019),城市新兵训练伤的发生率(1.11‰)低于农村新兵(1.43‰,χ2=5.945,P=0.015)。结论在集训前两周要特别重视新兵适应训练;训练科目的安排要循序渐进;重视农村新兵的身体协调性训练。

新兵集训期间呼吸系统疾病发病特点分析

目的分析新兵集训期间呼吸系统疾病的发病规律。方法对驻天津某部2008年入伍新兵采用分层随机的整群抽样方法获得样本。按照国际ICD-10标准进行疾病分类。采用Epiinfo6.0录入数据,用SPSS11.0进行数据分析。结果呼吸系统疾病发病率居首位,达到387.60‰,累计占到所有系统疾病的53.87%。上呼吸道感染、咽炎和扁桃腺炎位居呼吸系统疾病前3位,累计占到整个呼吸系统疾病的95.97%。集训期间,呼吸系统疾病在开训后第2周出现发病高峰,达到54.29‰。华北、华中、华东和东北地区来源的新兵发病率不同(χ2=25.790,P<0.0083)。农村和城市新兵发病率差异无统计学意义(χ2=0.551,P>0.05)。结论新兵集训期间要重视呼吸系统疾病的预防,开训前2周适训期和季节变换时预防呼吸系统疾病有重要意义;呼吸系统疾病预防只需遵循其本身发病规律,无须考虑兵源地域和城乡因素。

萘降解细菌的分离及其降解基因的分子检测

从污水处理厂的活性污泥和石油工业废水中各分离到24个降解萘的细菌分离株,提取这些分离株的总DNA,然后与各种萘降解基因杂交。结果表明,这2个来源的分离株在萘降解基因的种类上有明显不同。来自工业废水的分离株含有萘双加氧酶的铁硫蛋白大亚基基因nahAc,水杨醛脱氢酶基因nahF及其重复基因nahV,水杨酸羟化酶基因nahG及其重复基因nahU,儿茶酚2,3-双加氧酶基因nahH和儿茶酚1,2-双加氧酶基因catA,以及萘趋化蛋白基因nahY。来自活性污泥的分离株只含有nahAc、nahF、nahG和catA,不含有nahY、nahV、nahU和nahH。

萘降解细菌的分离及其降解和转座基因的分子检测

用富集培养法，从工业废水和活性污泥中分离到9个高效降解萘的细菌菌株（ND7～ND15）．对菌株ND7、ND8、ND9和ND10所进行的16SrDNA序列分析表明，它们都属于假单胞菌属（Pseudomonas）．PCR实验结果表明，上述4个菌株都含有蔡降解基因nahAc、nahG、nahH和catA，ND7和ND8菌株还含有萘降解基因nahU.DNA杂交实验结果表明，上述9个萘降解菌株都含有转座酶基因tnpA1和解体酶基因tnpR．这些结果表明，萘降解细菌的降解基因和转座基因具有高度的保守性．酶学实验证明，ND7、ND8、ND9和ND10菌株都具有儿茶酚1，2-双加氧酶活力和儿萘酚2，3-双加氧酶活力，但在不同菌株中这两种酶的比活力有明显不同．

运动性骨疲劳大鼠血清代谢组学分析

目的:用代谢组学方法筛选运动性骨疲劳的差异代谢产物,为运动性骨疲劳的早期筛查提供依据。方法:20只雌性SD大鼠,8周龄,体重210~250 g,适应性训练1周后随机分为对照组(C组,n=10)和模型组(T组,n=10)。对照组不训练,模型组进行递增负荷的跑台训练,6周训练结束后,用Instron 5800双立柱万能材料试验机测定大鼠胫骨骨刚度判定骨疲劳是否建模成功。血清样品经超高效液相色谱系统(UHPLC)分离后用Triple TOF 5600质谱仪(AB SCIEX)进行质谱分析,应用Metabo Analysis软件进行多维统计分析和单维统计分析。结果:构建了正离子和负离子状态下偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型,其模型评价参数(R2,Q2)分别为(1.00,0.78)和(0.92,0.82)。共筛选出21个差异代谢产物,主要涉及色氨酸、酪氨酸,胆汁酸和磷脂代谢及丙氨酸-葡萄糖循环。具体来说,与对照组比较,模型组的L-赖氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、甘氨胆酸、牛黄胆酸和牛黄去氧胆酸上调,L-酪氨酸、L-犬尿氨酸、5-羟基多巴胺、5-羟色胺、吲哚乙酸、前列腺素、胆酸、石胆酸、脱氧鹅胆酸、卵磷脂、溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂下调。结论:用代谢组学方法可初步筛选出运动性骨疲劳的差异代谢物,其早期诊断价值的评价有待进一步研究。

全球油气上游产能与成本展望

剑桥能源预计,2020年全球原油产能为9500万桶/日?1亿桶/日,天然气产能为100万亿?125万亿立方英尺。未来中东仍保持全球石油供应增长的领先地位,全球产能增长将主要集中在少数几个国家;非常规资源将是非欧佩克国家油气产能增长的主要领域;大型油田将在未来全球产能增长中起非常重要的作用。世界各个地区的勘探开发成本和操作费用不尽相同,想要达到预期的投资回报,需要充分考虑油气项目类型、地区分布、项目开发阶段、地质技术条件、项目成本、财税政策和公司策略等多方面的因素。单纯从新开发油田项目的勘探开发成本和操作费用来说,俄罗斯为11美元/桶左右,中国为15美元/桶左右,委内瑞拉重油项目为24.79美元/桶。预计北美2018年每百万英热单位常规天然气的勘探开发成本和操作费用为12美元,煤层气为6美元,页岩气为6美元,致密气接近6美元,伴生气为4美元。

中国棉花抗枯、黄萎病品种抗性和产量性状改良进展

对20世纪50年代以来中国自育的110个棉花抗枯、黄萎病品种的抗病性、产量性状、早熟性状的遗传改良进行了分析.结果显示,抗枯萎病育种成效显著,品种对枯萎病抗性呈稳步上升趋势;品种对黄萎病抗性亦呈上升趋势,但进展缓慢.除20世纪70年代品种略有下降外,品种的单株生产力呈上升趋势.单株结铃平均数在年代间变化不大,衣分变化趋势呈'V'字型,90年代品种最高.20世纪50～90年代,品种生育期缩短,早熟性增强.株高、第一果枝距子叶距离、第一果枝节位变化趋势一致,呈下降趋势.

天津沿岸海水中创伤弧菌的PCR检测和定量

采用普通PCR方法和SYBRGreen实时定量PCR方法，根据刨伤弧菌16SrDNA和23SrDNA基因间隔序列（internal transcribed spacer，ITS）设计引物，对渤海湾天津沿岸海水中的创伤弧菌进行了定性和定量检测。8个样品采集白天津市汉沽区沿岸海水，采集时间分别为2008年7月、10月和2009年3月、5月。PCR检测结果表明，这些样品都能扩增出276hp的ITS序列，这些序列和GenBank上的同源序列（DQ462478）的相似性为96％一98％。用SYBRGreen实时定量PCR方法测定了8个海水样品，样品中创伤弧菌的浓度为7．12×10^3-8．40×10^5个／L，表明天津沿岸海水存在严重的创伤弧菌污染。

触珠蛋白在家兔肠系膜上动脉闭塞性休克前后血清差异表达的研究

目的:探讨家兔肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克前后血清蛋白质组学变化及触珠蛋白的差异表达情况。方法:应用家兔肠系膜上动脉夹闭法复制家兔SMAO休克模型,在此基础上通过双向电泳-质谱-生物信息学方法分析鉴定SMAO休克前后血清中的差异蛋白,并应用Western blot和Elisa对血清触珠蛋白在SMAO休克前后血清中的差异表达情况进行验证。结果:在家兔SMAO休克前后血清双向电泳图谱中发现19个差异蛋白点,其中11个蛋白质点只见于SMAO休克后血清双向电泳图中;8个蛋白质点明显见于SMAO休克前的血清双向电泳图中。鉴定并验证了触珠蛋白在SMAO休克后血清中含量增高。结论:家兔SMAO休克后血清触珠蛋白含量增高,可能参与了SMAO休克后机体的代偿调节。

大肠杆菌溯源技术研究进展

阐述建立大肠杆菌追踪溯源体系的重要性,介绍应用于大肠杆菌追踪溯源的常用技术及优缺点,对于当今国内外对于大肠杆菌溯源进展进行了综述。指出目前技术之不足及未来发展趋势。

污染胁迫下的蚯蚓蛋白质组学研究进展

随着蛋白质组学的发展和每年有大量环境污染物进入土壤环境中,污染胁迫模式动物的相关生物标志物受到日益关注。蚯蚓,作为土壤中最大的无脊椎动物,是研究和评价土壤生态污染良好的模式动物。研究蚯蚓的蛋白质组学,对于寻找环境生态污染相关生物标志物和阐明生态毒理学机制有着十分重要的现实意义。目前已知的污染胁迫下蚯蚓蛋白质组学研究,提供了几个特定污染物胁迫蚯蚓的蛋白表达谱。这些蛋白涉及许多生物学过程,例如信号传导、糖酵解、能量代谢、分子伴侣和转录调节,提示了相关污染物可能的生态毒理学机制,有望成为潜在的生物标志物,用于有毒污染物的监测,但其特异性需要进一步试验的验证。对蚯蚓受污染胁迫的蛋白质组表达谱及潜在生物标志物进行简要综述。