巨细胞病毒抑制树突状细胞抗原递呈功能

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对单核细胞来源的树突状细胞(DC)的感染效率及对受染细胞的功能影响。方法:以50半数细胞培养感染量(TCID50)滴度的CMV与未成熟及成熟DC(imDC,mDC)共培养,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内CMV即刻早期抗原(IEA)mRNA水平,间接免疫荧光技术检测受染细胞内早期抗原(EA)阳性率,流式细胞仪检测细胞胞内病毒晚期抗原pp65表达,BrdUELISA法检测受染DCs(cmv-imDC,cmv-mDC)刺激异基因T细胞增殖能力。结果:感染12h,cmv-mDC内IEA mRNA水平低于cmv-imDC,相对表达量分别为0.102±0.020和0.862±0.124(P<0.05)。24h,imDC组EA阳性率高于mDC组,分别为(62.32±14.20)%和(10.78±3.04)%(P<0.01)。72h,cmv-DC胞内低表达pp65抗原,imDC和mDC中阳性率分别为4.86%和0.82%。与未处理mDC相比,cmv-imDC经成熟诱导因子LPS作用后,其刺激异基因T细胞增殖能力较弱(均P<0.05);而cmv-mDC,仅当DC/T细胞为1:1时,刺激能力下降(P<0.05)。结论:CMV可有效感染imDC,并在细胞内复制活化;cmv-DC的抗原递呈能力下降。

巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常

本研究探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态,采用RT-PCR检测β-actin表达,Western-blot检测胞内肌动蛋白质含量,间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE)与微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果表明CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。感染后72、96小时,受染细胞内β-actin表达呈渐进性下调,差异显著(P<0.05);96小时后胞内β-actin含量则为未感染组的(74.2±13.4)%,差异显著(P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论CMV引起细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。

原发免疫性血小板减少症患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的:观察Th22细胞在原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中的变化。方法:用流式细胞术分别检测ITP初诊组、治疗后完全反应(CR)组及正常对照组外周血中Th22细胞所占比例。用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各组外周血中IL-22、TGF-β、TNF-α、IL-6的表达水平。用半定量RT-PCR分别检测各组外周血中IL-22 mRNA的表达水平。并逐层分析比较。结果:ITP初诊组和治疗后组Th22细胞比例、外周血中IL-22、TNF-α、IL-6的表达水平以及IL-22mRNA的表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01),治疗后组Th22细胞比例、IL-22、TNF-α、IL-6、IL-22 mRNA的表达水平均低于初诊组(P<0.05);ITP初诊组和治疗后组TGF-β水平分别为(3.27±1.02)ng/L、(5.41±1.69)ng/L明显低于正常对照组(9.65±2.78)ng/L(P<0.01),且初诊组TGF-β的水平低于治疗后组(P<0.05)。结论:ITP患者体内Th22细胞数量增加、TNF-α、IL-6的表达升高、TGF-β的表达减低。

骨髓增生异常综合征患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的:研究Th22细胞在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达水平,并探讨其意义。方法:①用流式细胞术分别检测MDS较高危组、较低危组及正常对照组外周血中Th22细胞所占比例。②用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各组外周血中IL-22、TGF-β、TNF-α、IL-6的表达水平。③用半定量RT-PCR分别检测各组外周血中Th22细胞的相关转录因子IL-22 mRNA的表达水平,并逐层分析比较。结果:MDS较高危组、较低危组Th22细胞比例、IL-22、TNF-α、IL-6、TGF-β、IL-22 mRNA的表达水平分别为(0.53±0.13)%、(13.51±3.87)ng/L、(146.74±29.74)ng/L、(77.58±16.23)ng/L、(5.21±1.65)ng/L、0.29±0.06和(0.85±0.21)%、(16.13±4.82)ng/L、(182.34±37.55)ng/L、(95.62±20.28)ng/L、(7.46±2.17)ng/L、0.38±0.07,均低于正常对照组的(1.24±0.31)%、(19.72±6.55)ng/L、(238.32±50.41)ng/L、(137.95±27.08)ng/L、(9.65±2.78)ng/L、0.49±0.09,差异有统计学意义(P<0.05),MDS较低危组Th22细胞比例、IL-22、TNF-α、IL-6、TGF-β、IL-22 mRNA的表达水平均高于较高危组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MDS患者体内Th22细胞数量减少,可能与MDS的发生发展呈负相关,提示MDS患者体内TNF-α、IL-6的表达减低及负向免疫细胞增多可能抑制Th22细胞的分化发育。

免疫相关性血细胞减少症41例临床分析

目的:观察41例免疫相关性血细胞减少(immunorelated hemocytopenia,IRH)或全血细胞减少症(immunorelated pancytopenia,IRP)患者的临床特点,以提高对本病的认识。方法:分析41例IRH/IRP患者临床表现、血常规、骨髓象、骨髓单个核细胞抗人球蛋白(BMMNC-Coombs)试验、抗核抗体ANA和ENA抗体谱、T淋巴细胞亚群、染色体核型等以及对肾上腺糖皮质激素、环孢素A等免疫抑制剂的治疗反应。结果:本组病例临床主要表现为贫血、出血、感染;血常规呈三系、二系或一系减少,网织红细胞百分比不低;骨髓增生以活跃或明显活跃为主(82.9%),红系比例多增高;BMMNC-Coombs试验阳性率78.0%;除外了再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)等疾病;小部分病例(19.5%)并发系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病;对肾上腺糖皮质激素、环孢素A等治疗有良好反应。结论:IRH/IRP是由于T淋巴细胞调控异常致B淋巴细胞产生针对骨髓未成熟造血细胞的自身抗体而使血细胞减少,BMMNC-Coombs试验对IRH/IRP的诊断具有较高的灵敏性和特异性,多数病例对肾上腺糖皮质激素等免疫抑制剂反应良好。

柏-查综合征患者凝血酶原基因G20210A变异关系研究

目的 :了解柏 -查综合征 (BCS)患者凝血酶原基因G2 0 2 10A(FⅡ )变异频率 ,观察BCS的静脉血栓形成是否存在基因变异因素。方法 :利用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析法 (PCR -RFLP)检测基因变异。结果 :本组 12例未发现凝血酶原基因G2 0 2 10A变异表达。结论 :BCS患者是否存在该基因变异 ,有待扩大病例组数进一步研究 ,以明确BCS血栓形成原因。

巨细胞病毒感染细胞内微丝骨架重组异常

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。方法:显微镜观察细胞形态;W estern-b lot法分别检测细胞内β型肌动蛋白(β-actin)、球状肌动蛋白(G-actin)和纤维形肌动蛋白(F-actin)的含量;间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE);微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果:HF细胞CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于细胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。与未感染组相比,CMV感染后细胞内β-actin蛋白质含量有所下降,但无显著性差异(P>0.05);G-actin水平在感染24 h后增加(0.941±0.061 vs 0.714±0.119,P<0.05),但在感染后72 h、96 h却下降(0.218±0.035、0.230±0.055 vs 0.714±0.119,P<0.05);F-actin水平在感染后24 h、72 h、96 h呈渐进性下降(0.256±0.021、0.127±0.032、0.026±0.008 vs 0.373±0.050,P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论:CMV引起HF细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常,可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。

黄芪多糖促进急性髓细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞成熟

目的:研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)成熟的影响。方法:收集淮安市第二人民医院2009年10月至2010年2月23例AML患者外周血单个核细胞,流式细胞仪分选pDC。APS刺激pDC5d后,流式细胞术检测pDC表型、光镜观察pDC的形态、扫描电镜观察pDC的超微结构;不同质量浓度APS(0、50、100、200μg/ml)处理24h后,ELISA检测pDC上清中IFN-α、TNF-α和IL-6的水平。结果:光镜及扫描电镜结果显示,APS可使pDC的突起增多、变长,呈现成熟形态特征。APS可促进pDC的分化和成熟,使CD11c、CD80、CD86阳性率明显提高,并呈APS浓度依赖性(P<0.05)。APS还可浓度依赖性地上调pDC分泌IFN-α、TNF-α和IL-6(P<0.05)。结论:APS能够增强AML患者pDC的功能,并促进其分化和成熟。

造血干细胞移植相关代谢综合征的临床特征及意义

目的:评价造血干细胞移植(HSCT)术后一年内代谢综合征(MS)的发生率及临床特征,为筛选HSCT-MS危险因素,早期干预、改善患者远期生存质量奠定基础。方法:收集2007年1月至2018年8月在本中心接受HSCT并完成相关随访的64例HSCT受者(生存期> 1年)的临床随访资料,其中异基因造血干细胞移植(alloHSCT) 50例,自体造血干细胞移植(auto-HSCT) 14例。回顾性分析两组HSCT术前及术后1、3、6和12个月MS相关指标变化及临床特点。结果:Allo-HSCT组术前诊断MS 14例,低高密度脂蛋白血症(hypo-HDL-C)>高甘油三酯血症(hyper-TG)>高空腹血糖(hyper-FBG)>腹型肥胖(abdominal obesity,AO)>高血压(hypertension);autoHSCT组术前诊断MS 5例,依次为hyper-FBG> hyper-TG> AO> hypo-HDL-C> hypertension。移植术后1、3、6、12个月MS发生率:allo-HSCT组分别为19例、26例、24例和20例;auto-HSCT组分别为7例、7例、6例和6例,两组均以hyper-TG及hypo-HDL-C为突出表现。结论:HSCT术后1年内HSCT-MS发病率明显增高,无论采用auto-HSCT还是allo-HSCT。强调HSCT-MS的防控是提高HSCT患者远期生存质量的重要保障。

巨细胞病毒感染树突细胞及其对抗原呈递的影响

已有研究报道,CMV感染单核细胞后,可抑制其向树突细胞（DC）分化,而树突细胞是重要的专职抗原呈递细胞,在免疫应答中起关键的引导和调节作用,其成熟程度是引发T细胞依赖性免疫应答所必需.我们旨在探讨CMV能否感染不同成熟阶段树突细胞及其对该细胞抗原呈递功能的影响.

猪抗人淋巴细胞球蛋白联合环孢素治疗重型再生障碍性贫血患者22例

重型再生障碍性贫血（SAA）是一种获得性骨髓造血功能衰竭综合征，许多患者在短期内死于严重感染和出血。抗人胸腺细胞球蛋白（ATG）联合环孢素（CsA）的免疫抑制治疗（IST）有效率可达60％～80％，已成为年龄≥40岁或年龄〈40岁但无HLA相合同胞供者SAA患者的首选治疗方案。

急性髓系白血病患者外周血Th22细胞水平的变化

研究已经证实，急性髓系白血病（AML）患者免疫功能低下，体内树突细胞（DC）、浆细胞样DC（pDC）、Thl7细胞等数量减少、功能减低，而调节性T细胞（Treg）数量增加、功能增强^[1-2]。Th22型细胞是一种最新发现的独立的辅助性T细胞亚群，是体内分泌IL-22的主要细胞，具有促进机体固有免疫和适应性免疫应答，使肿瘤细胞的周期停滞在G2／M期，

急性淋巴细胞白血病患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的研究Th22细胞在急性淋巴细胞白血病（ALL）患者外周血中的表达水平，并探讨其意义。方法用流式细胞术分别检测B系ALL（B—ALL）及T系ALIJ（T—ALL）初诊患者、完全缓解期患者及正常对照组外周血中Th22细胞所占比例。用酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测各组外周血血清中IL-22、转化生长因子（TGF）-β、TNF-α、IL-6水平。用半定量RT—PCR方法分别检测各组外周血单个核细胞中Th22细胞的相关转录因子IL-22mRNA的表达水平。并逐层分析比较。结果初诊B—ALL、T—ALL患者Th22细胞比例，血清IL-22、TNF-α、IL-6水平及单个核细胞IL-22mRNA的表达水平分别为（0．44±0．10）％、（10．94-3．4）ng／L、（110．7±26．5）ng／L、（60．2±13．8）,lg／L、0．17±0．04和（0．46±0．11）％、（11．2±3．5）ng／L、（114．6±27．0）rig／L、（58．7±12．4）ng／L、0．19±0．04；缓解期B—ALL、T—ALL患者分别为（0．59±0．15）％、（14．3±4．1）ng／L、（142．5±32．7）ng／L、（83．7±18．9）ng／L、0．25±0．06和（0．60±0．15）％、（14．6±4．3）rig／r,、（140．4±31．4）ng／L、（81．4±18．2）ng／L、0．26±0．06，均明显低于正常对照组的（1．24±0．31）％、（19．7±6．6）ng／]J、（238．3±50．4）ng／L、（138．0±27．1）ng／L、0．49±0．09，差异有统计学意义（P〈0．01）。缓解期B—ALL、T—ALL患者Th22细胞比例，血清IL．22、TNF—Or．、IL-6水平及单个核细胞IL-22mRNA的表达水平均高于初诊B-ALL、T—ALL患者，差异有统计学意义（P〈0．05）。B—ALL与T—ALL比较差异无统计学意义（P〉0．05）。初诊B．ALL、T．ALL和缓解期B—ALL、T．ALL患者TGF—B水平分别为（30．6±8．2）ng／L、（31．4±8．8）ng/L和（24．2±5．8）ng／L、（25．1±6．1）ng／L，明显高于正常对照组的（9．6±2．8）ng／L，差异有统计学意义（P〈0．01），且初诊患者TGF．13水平高于缓解期患者（P〈0．05）；B—ALL与T—ALL比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ALL患者体内Th22细胞数量减少，可能与ALL的发生发展呈负相关，提示ALL患者体内TNF-α、IL-6的表达减低及TCF-β的过度表达可能抑制Th22细胞的分化发育。

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病患者外周血中TH22型细胞及相关细胞因子的测定

TH22型细胞是一类新发现的独立的辅助性T淋巴细胞（TH）亚群，是体内分泌白细胞介素（IL）22的主要细胞，它与类风湿性关节炎等自身免疫性疾病密切相关。关于异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后并发慢性移植物抗宿主病（cGVHD）者体内TH22型细胞的变化情况，报道较少。我们检测了cGVHD患者治疗前、后外周血中TH22型细胞比例及相关细胞因子的表达水平，报告如下。

雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症患者浆细胞样树突细胞功能及成熟的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症（ITP）患者浆细胞样树突细胞（pDC）功能及成熟的影响。方法取22例初治ITP患者（初治组）、22例糖皮质激素治疗后完全缓解（CR）ITP患者（CR组）及22名健康志愿者（正常对照组）外周静脉血，分离单个核细胞，用流式细胞术分选pDC，分别加入0、5、10、30μg/L的雷公藤内酯醇共孵育，24h后收集上清液，用ELISA法检测IFN-α、IL-6、TNF—α水平；5d后收集细胞，用流式细胞术检测髓样树突细胞（mDC）CD11c、CD80、CD86表达，光镜下观察mDC的形态，电镜观察mDC的超微结构。结果加入10μg/L雷公藤内酯醇后初治组IFN—α、IL-6、TNF—α水平分别为（451．32±85．77）、（105．68±23．85）、（135．78±30．62）ng／L，CR组分别为（391．71±72．49）、（84．73±17．77）、（108．16±23．21）ng／L，正常对照组分别为（335．51±67．54）、（73．62±21．82）、（95．58±32．85）ng／L，初治组及CR组高于正常对照组（P〈0．05），初治组高于CR组（P〈0．05），并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性（P〈0．05）；初治组及CR组mDC表型CD11c、CD80、CD86阳性率高于正常对照组（P〈0．05），初治组高于CR组（P〈0．05），加入雷公藤内酯醇后mDC表型阳性率呈浓度依赖性降低（P〈0．05）。加入雷公藤内酯醇后mDC较对照组突起变少、变短，形态上不成熟。结论雷公藤内酯醇能够减弱ITP患者pDC的功能，并抑制其向mDC的分化和成熟。

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者DC细胞功能及成熟的影响

目的通过休外实验研究雷公藤内酯醇（triptolide）对系统悱红斑狼疮（systemic lupuserythematosus，SI．E）患者树突状细胞（dendriticcell，DC）功能及成熟的影响，为进一步阐明甫公藤内酯醇的免疫学活性提供依据。方法从SLE患者外周血分离单个核细胞，流式细胞仪分选DC，加入0、5、10、30μg／L的雷公藤内酯醇共孵台，24h后收集上清液，ELISA检测IFN-α、TL-6、TNF-α艟，5d后收集细胞，流式细胞仪检测DC表型CDllc、CD80、CD86阳什率，光镜观察DC的肜念，扫描咀镜观察I）C的超微结构。结果雷公藤内酯醇显著减低活动期非活动期SLE患者IFN-α、IL-6、TNF-α量，并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性（P〈0．05）；甫公藤内酯醇可抑制SLE心行DC的分化和成熟，外卫雷公藤内酯醇浓度依赖性（P〈0．05）。结论雷公藤内酯醇能够减弱SLE患者DC的功能，并抑制其分化和成熟。

雷公藤内酯醇对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外试验研究雷公藤内酯醇（triptolide）对浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell,pDC）功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、5、10、30 μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24 h后收集上清液,ELISA检测pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α量,5 d后收集细胞,流式细胞仪检测树突状细胞表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著降低pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性（P＜0.05）;雷公藤内酯醇可抑制pDC向DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性（P＜0.05）.结论 雷公藤内酯醇能够降低pDC的功能,并抑制其向DC的分化和成熟.

再生障碍性贫血患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的观察Th22细胞在再生障碍性贫血（AA）患者外周血中的水平变化，并探讨其意义。方法选择淮安市第二人民医院血液科2011年1月至2012年6月住院的重型初诊AA患者11例，非重型初诊AA患者12例，重型治疗后有效患者12例，非重型治疗后有效患者12例，以12名健康体检者作为对照组。用流式细胞术分别检测各组外周血中Th22细胞所占比例。ELISA法分别检测各组外周血中白细胞介素22（IL-22）、转化生长因子β（TGF-β）、肿瘤坏死因子仪（TNF-a）、白细胞介素6（IL-6）的表达水平。用半定量反转录（RT）一PCR分别检测各组外周血中IL-22mRNA的表达水平，并逐层分析比较。结果AA重型初诊组和重型治疗有效组Th22细胞比例、IL-22、TNF-a、IL-6、IL-22mRNA的表达水平均明显高于健康对照组[4．3％±1．4％和2．6％±0．6％比1．2％±0．3％、（57±17）和（34±10）比（19±6）ng／L、（497±123）和（314±79）比（228±50）ng/L、（322±88）和（187±45）比（134±26）ng／L、1．65±0．51和0．92±0．28比0．47±0．09，均P〈0．05]；治疗有效组低于初诊组（均P〈0．05）。在非重型患者中亦有类似结果。重型初诊患者以上各项表达水平均高于非重型初诊患者（均P〈0．05），但重型治疗有效组与非重型治疗有效组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。AA重型初诊组和重型治疗有效组TGF-β水平分别为（3．4±1．1）、（5．8±1．7）ng/L，明显低于健康对照组[（9．7±2．8）ng/L，P〈0．05]，且初诊组低于治疗有效组（P〈0．05）；在非重型患者亦有类似结果；且重型初诊患者低于非重型初诊患者（P〈0．05），但重型治疗有效组与非重型治疗有效组问差异无统计学意义（P〉0．05）。结论AA患者体内Th22细胞数量增加，可能与AA的发生发展呈正相关，提示AA患者体内TNF-a、IL-6的表达升高及TGF-β的表达减低可能促进Th22细胞的分化发育。