猪细小病毒病(PPV_(S-1)株)灭活疫苗不同佐剂的比较试验

本研究分别用铝胶佐剂和ISA201佐剂配制的猪细小病毒病灭活疫苗来免疫乳鼠,乳鼠免疫后表现正常,无死亡;5倍剂量免疫仔猪后,免疫猪未出现不良反应;随后检测免疫14、21、30、60、90、120、150、180、210d时的抗体水平。结果显示,用ISA201佐剂配制的灭活疫苗免疫猪后免疫期可达6个月,用铝胶佐剂配制的灭活疫苗免疫猪后免疫期可达5个月。综合试验结果,建议选择用ISA 201佐剂作为猪细小病毒病灭活疫苗的佐剂。

密码子优化和信号肽对猪圆环病毒ORF2基因在毕赤酵母表达中的影响

为了在毕赤酵母中高效表达PCV2ORF2基因,对PCV2ORF2基因编码的187个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏爱性优化,利用两步PCR全化学合成优化后的ORF2基因。将优化前后的PCV2ORF2基因片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,构建重组质粒pPICZα-C-ORF2和p PICZα-C-ORF2op。将线性化的重组质粒电转化毕赤酵母GS115,并筛选Zeocin抗性重组子。同时,也研究了信号肽对PCV2ORF2表达效率的影响。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,只有经密码子优化且去除ORF2基因自身信号肽的重组子能够分泌表达PCV2 ORF2蛋白,目的蛋白分子质量约为30 ku,表达的重组ORF2蛋白可被PCV2阳性血清识别,具有生物学活性。

猪丹毒强毒株对不同品种小鼠最小致死量的研究

为了确定猪丹毒疫苗的效力,本研究采用常规方法传代猪丹毒杆菌强毒株C43-8株及C43-6株,在传代菌液形态、纯粹及活菌计数等相关检验合格的基础上给16~18 g昆明小鼠(简称KM小鼠)、BALB/c小鼠、ICR(institute cancer research)小鼠注射不同数量的活菌,根据小鼠的死亡情况确定猪丹毒杆菌强毒株对不同品种小鼠的最小致死量。结果显示,猪丹毒强毒株C43-8株对KM小鼠、BALB/c小鼠、ICR小鼠的最小致死量(minimum lethal dose,MLD)分别为20、25、15 CFU;猪丹毒强毒株C43-6株对上述三种小鼠的MLD分别为15、20、10 CFU。

猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂选择

用水包油佐剂Merckinade SDA 25、HS1010和双向佐剂Montanide ISA 206三种不同佐剂分别制成猪圆环病毒2型灭活疫苗,对三种疫苗的稳定性、黏度、免疫仔猪后的安全性及效力进行了比较。试验结果表明,以3000 r/min离心15 min,三种疫苗均无水析出;三种疫苗的黏度均低于200 cP;三种疫苗按2.0 mL/头的剂量接种21日龄健康易感猪,试验猪体温、采食、饮水、精神状况均正常,均无不良临床反应,剖检后各脏器均无病理变化;加强免疫后21d,各组试验猪采血,检测猪圆环病毒2型抗体效价,结果表明,佐剂MontanideISA206相较MerckinadeSDA25可诱导更高水平抗体效价。攻毒试验结果表明免疫组可以得到100%的保护。根据以上试验结果,确定猪圆环病毒2型灭活疫苗使用Montanide ISA 206。

一株新城疫病毒新强毒株(NL)的分离鉴定及F基因序列测定

1996年 5月以来 ,我国各地鸡群暴发鸡新城疫 ,其发病特征是常规疫苗免疫无效。为研究此病毒的特征 ,对从华东某地分离的新城疫病毒毒株 (NL株 )进行了生物学研究。利用RT PCR技术扩增出NL株融合蛋白基因 (F基因 )全序列 ,并测序。结果表明 ,NL株平均致鸡胚死亡时间 (MDT)为 2 8 2h ,是目前所有公开报道的NDN毒株中致鸡胚死亡时间最短的 ,其尿囊液中病毒滴度可达 2 9,表明病毒繁殖速度快。F基因测序结果表明 ,NL株为一强毒株 ,与现今国外已发表的NDV株F基因同源性在 84%～ 91%之间。氨基酸同源性为 82 %～ 93%。紧靠裂解位点附近的氨基酸与其它NDV毒株均不相同。据此认为 ,该新城疫病毒是一个新型毒株。

囊素对猪口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用

用提取的天然囊素（10ug／mL）和O型口蹄疫灭活疫苗协同免疫45日龄仔猪，研究了其对。型口蹄疫灭活疫苗免疫效果及仔猪增重的影响。将32头健康45日龄仔猪随机分为4组，0．5mL疫苗＋囊素免疫2次（Ⅰ）组、1、0mL疫苗＋囊素免疫2次（Ⅱ）组、1．0mL疫苗＋囊素免疫1次（Ⅲ）组和1．0mL疫苗免疫2次（Ⅳ）组（疫苗对照组），用液相阻断酶联免疫吸附试验（LB—ELISA）检测各组猪免疫前及一免后第14、28、42、60、74、88、102d的口蹄疫血清抗体效价并称重。结果。Ⅱ组抗体水平显著高于Ⅳ组（P〈0．01），Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组间差异不显著（P〉0．05）；一免后第60～110d仔猪平均日增重囊素组明显高于对照组（P〈0．05）。结果表明，囊素可以提高口蹄疫灭活疫苗的免疫原性，提高猪增重，促进生长发育。

新城疫热稳定性天然弱毒B95株核酸疫苗的构建

将含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因的重组克隆质粒 pGEM F用NotⅠ单酶切 ,电泳回收纯化目的片段 ,与同样用NotⅠ单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体 pcDNA3.1连接 ,构建了新城疫核酸疫苗 ,并用所构建的新城疫核酸疫苗与载基因阳离子脂质体结合进行了免疫试验 ,通过ELISA、淋巴细胞转化试验检测了核酸疫苗在鸡体内的表达。结果显示 ,表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应 ,引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫 ,对新城疫强毒攻击的保护率为 75 %。

PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量的比较

采用聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光法(IFA)测定PCV2 SN07-1 2株的半数细胞培养感染量(TCID_(50)),初步比较两种方法测定病毒滴度的差异。参照Reed-Muench法计算TCID_(50),并采用荧光定量PCR(Real-time PCR)法对试验结果进行验证。对于同一病毒样品,IFA法测出的TCID_(50)为10^(6.5)/mL,PCR法测出的TCID_(50)为10^(5.0)/mL,结果表明:IFA法比PCR法更敏感,更适宜用于测定PCV2的效价。

猪繁殖呼吸综合征弱毒疫苗的研制

PRRSV SA 弱毒株免疫仔猪 ,无不良临床表现 ,不排毒 ;免疫怀孕母猪 ,母猪精神、食欲、体温均正常 ,并在预产期顺利产仔 ,表现出良好的安全性。SA 弱毒免疫猪后 2周即产生抗体反应 ,免疫仔猪 4～ 6个月后 ,能抵抗强毒攻击 ;母猪在配种前 2周免疫 ,在怀孕 90～ 96d时 ,用强毒攻击 ,不表现任何临床症状 ,并顺利产仔 ,表现出坚强的免疫力。用SA 弱毒制备成冻干疫苗 ,免疫猪表现出良好的安全性和免疫力。证明PRRSV SA 弱毒疫苗能预防猪繁殖呼吸综合征。

猪流行性腹泻疫苗研究和开发进展

猪流行性腹泻是危害养猪业的重要疫病之一,在世界各地的养猪业中均有暴发流行,近年来在全国猪场出现了大范围的暴发。为了降低猪流行性腹泻造成的巨大损失,世界各国的猪病研究人员一直致力于研发安全、高效的PED疫苗。通过从灭活疫苗、活疫苗和基因工程疫苗等方面对国内外的PED疫苗研究和开发进展进行综述,汇总了国内外近几年来审批许可的PED商品化新疫苗和正在进行临床试验的PED疫苗,以及疫苗研发的新技术,为开发更好的PED疫苗产品提供参考和前景展望。

猪伪狂犬病毒gE基因缺失毒株的构建及其免疫原性的研究

通过CRISPER/Cas9编辑技术编辑实验室分离得到的PRV-SX株的gE基因,并利用蚀斑纯化等方法得到gE基因缺失的突变株。通过T7E1核酸内切酶及测序来鉴定gE基因的缺失,并对gE基因缺失毒株的免疫效果进行了研究。结果表明:应用CRISPER/Cas9编辑技术成功得到了gE基因缺失毒株,用这一毒株制备疫苗免疫仔猪,免疫后0 d、14 d、28 d、42 d、56 d PRV gE抗体均为阴性;PRV gB抗体呈阳性,在42 d时达高峰。

三种不同灭活剂对猪细小病毒和猪圆环病毒的灭活效果研究

使用不同浓度的甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)对猪细小病毒(S-1株)、猪圆环病毒2型(JSM株)进行灭活处理,采用灭活检验试验[血凝(HA)试验和IFA试验]和无菌检验试验检测不同时间段采集的灭活样品,研究不同灭活剂对猪细小病毒和猪圆环病毒的灭活效果,筛选最佳灭活条件。结果表明:盲传3代后,在37℃条件下,0.2%的甲醛灭活48 h、36 h可彻底灭活S-1株和JSM株;在32℃条件下,BEI终浓度为0.1%时,对S-1株和JSM株的最佳灭活时间分别是84 h和60 h;在4℃条件下,BPL对S-1株和JSM株的灭活终浓度分别为0.03%、0.05%,灭活时间分别为72 h、48 h。HA试验结果显示:使用甲醛灭活后,猪细小病毒血凝效价由2^(11)下降至2~6—2~5;使用BPL与BEI灭活对PPV血凝活性无明显影响。灭活终止程序中,BEI需要添加总体积10%的硫代硫酸钠,BPL在37℃、2 h即可完全水解。本研究最佳灭活条件为:在4℃条件下,终浓度为0.05%的BPL灭活48 h。

一株猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及其对不同动物的致病性

为了解变异后伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)的致病性,采用细胞培养技术从病料中分离PRV,通过PCR方法对PRV相关基因进行扩增,对毒株进行特异性试验和病毒滴度的测定,并通过动物试验对PRV的致病性进行了研究。结果表明:通过PCR可扩增出大小与预期相符的PRV gG基因片段、gE基因片段以及TK基因片段;病毒毒价可达10^(8.0) TCID_(50)∕mL;接种10^(5.0)TCID_(50)∕mL病毒后,家兔于52 h左右全部死亡,小鼠于72 h左右全部死亡,10^(4.0) TCID_(50)∕mL病毒可致28日龄仔猪死亡或发病。本研究可为预防PRV疫病的流行提供防控依据。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果试验

猪圆环病毒病（Porcineeircovirusdiseases，PCVDs）是由猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2，PCV2）引发的一种猪传染性疾病。一旦PCV2感染猪后具有免疫抑制特性，能够干扰其它疫苗的免疫效果。近几年我国猪场的PC耽感染已相当普遍，个别猪场猪圆环病毒2型抗体阳性率可达100％。防控PCV2主要有效的手段是接种圆环病毒病疫苗。当前我国市场上有多种类型的圆环病毒病疫苗，猪群免疫后免疫效果参差不齐；为了评估上海佳牧生物制品有限公司研制的圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果，现进行以下试验：

GMP车间菌苗发酵生产线制备猪丹毒灭活疫苗的可行性

为了验证上海佳牧生物制品有限公司GMP车间的菌苗发酵生产线生产猪丹毒灭活疫苗的可行性,按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》(二OOO年版),利用500L发酵罐发酵生产猪丹毒菌液,发酵菌液经检验合格后制备猪丹毒灭活疫苗,并按照《中华人民共和国兽药典》(2020年版)对疫苗进行了相关检验。结果表明,上海佳牧生物制品有限公司GMP车间的菌苗发酵生产线生产的猪丹毒灭活疫苗符合猪丹毒灭活疫苗质量标准要求,从而证实了该公司菌苗发酵生产线生产猪丹毒灭活疫苗是可行的。

鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗基础种子代次鉴定试验初报

为了确定鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗基础种子批的代次。本研究将鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)在SPF鸡胚上连续传至15代,初步确定第10~15代为基础种子批,对10~15代进行了无菌检验、病毒含量测定、血清学特异性试验。试验结果表明:10~15代鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)无菌,各代次病毒含量稳定(107.3~107.7 ELD50/0.1mL),血清学特异性未发生改变。因此,确定鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)10~15代为鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗毒种的基础种子批。