解淀粉芽孢杆菌GSBa-1凝乳酶对切达干酪成熟过程中蛋白水解及生物活性的影响

利用解淀粉芽孢杆菌GSBa-1凝乳酶和商业凝乳酶制作切达干酪,分3个实验组:商业凝乳酶(干酪A),70%商业凝乳酶+30%GSBa-1凝乳酶(干酪B),GSBa-1凝乳酶(干酪C);测定3组干酪在12周的成熟过程中各项理化指标、蛋白水解和生物活性变化。微流变学结果表明,GSBa-1凝乳酶具有接近商业凝乳酶的良好凝乳效果。与干酪A相比,干酪C在成熟过程中pH值显著偏低,水分含量较高,乳酸乳球菌数由9.77(lg(CFU/g))显著下降至5.08(lg(CFU/g));蛋白水解活力、pH 4.6可溶性氮和12%三氯乙酸可溶性氮含量较高。干酪C成熟过程中钙离子和锌离子的螯合能力,抗氧化能力包括1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基及2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力都显著高于干酪A。干酪B的金属离子螯合能力和抗氧化能力介于干酪A和干酪C之间。不同组干酪的降血糖功能包括对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力则没有明显差别。因此,利用GSBa-1凝乳酶部分代替商业酶加工切达干酪制作,可以控制干酪成熟过程中蛋白水解,保持干酪良好的品质特性的同时提高干酪的生物活性。

转基因水稻T1C-1 Bt Cry1C基因的克隆、表达、纯化和实质等同性研究

将质粒p ET30a（＋）-Cry1C转入大肠杆菌进行表达,对其表达条件进行了优化,并评价了蛋白的表达和纯化效果。结果显示：最佳诱导时间、IPTG的终浓度和诱导温度分别为5h、0.6 mmol/L和25℃。大多数的靶蛋白以包涵体形式表达,通过纯化和复性,最终获得高纯度有活性的靶蛋白。通过SDS-PAGE Western Blot、糖蛋白测定、LC MS/MS鉴定和杀虫试验表明：大肠杆菌中表达的Cry1C蛋白和转基因水稻的Cry1C蛋白具有实质等同性。

基于无人机多光谱遥感的大豆生长参数和产量估算

为适应现代农业发展对作物生长动态、连续、快速监测的要求,本文基于无人机多光谱遥感技术,以西北地区大豆作为研究对象,分别筛选出与大豆叶面积指数(Leaf area index,LAI)、地上部生物量和产量相关性较好的5个植被指数,采用支持向量机(Support vector machine,SVM)、随机森林(Random forest,RF)和反向神经网络(Back propagation neural network,BPNN)分别构建了大豆LAI、地上部生物量和产量的估计模型,并对模型进行了验证。结果表明,基于RF模型构建的大豆LAI和地上部生物量预测模型的精度显著高于SVM与BP模型,LAI估计模型验证集的R~2为0.801,RMSE为0.675 m~2/m~2,MRE为18.684%;地上部生物量估算模型验证集的R~2为0.745,RMSE为1548.140 kg/hm~2,MRE为18.770。而在产量的估算模型构建中,在大豆开花期(R4)基于RF模型构建的大豆产量预测模型的精度最高,验证集的R~2为0.818,RMSE为287.539 kg/hm~2,MRE为7.128。本研究结果可以为无人机多光谱遥感在作物监测方面的应用提供理论依据,为作物产量的快速估算提供应用参考。

不同种类脂肪替代物对软冰淇淋浆料流变特性及产品品质和口感的影响

分别利用浓缩牛乳蛋白(milk protein concentrate,MPC)、菊粉、葡聚糖及其复合物(浓缩牛乳蛋白-菊粉(MPC-inulin,M-I)、浓缩牛乳蛋白-葡聚糖(MPC-dextran,M-D))作为脂肪替代物制作无脂软质冰淇淋。通过仪器分析和感官评价综合分析其替代脂肪效果。结果表明,不同实验组冰淇淋在p H值、滴定酸度和膨胀率方面无明显差异,葡聚糖及菊粉的添加增加了体系稳定性,MPC可以增加体系黏度并延缓融化速率。葡聚糖组冰淇淋具有与对照组冰淇淋相似的粒径分布,而MPC组、菊粉组和M-D组的粒径更小且分布更为集中。M-I组和M-D组的频率扫描和温度扫描的动态流变学参数与对照组更为接近。感官评价分析表明,M-I和M-D组具有较好脂肪类似的口感。回归分析进一步得到整体口感与温度依赖的动态流变学参数的回归模型,为模拟低脂软冰淇淋顺滑细腻的口感提供可行的评价方法。

不同动态水压模式下迷宫流道内颗粒物运动特性研究

采用PTV技术,观测三角函数、三角、台阶、矩形波形动态水压模式下迷宫流道内颗粒物的运动情况,分析不同动态水压模式下迷宫流道内单个颗粒物运动轨迹、运动速度及流体流场,揭示动态水压抗堵塞机理。结果表明:相对于三角、台阶及矩形波形动态水压模式,三角函数波形动态水压模式下颗粒物滞留滞止区内的时间最短,颗粒物的沉积概率最小,水流对颗粒物的输移能力最大;三角函数波形动态水压模式下流道内产生的水流波动效应不断冲击流道滞止区内存在的低速漩涡,加剧了滞止区水流紊动,进入滞止区的颗粒物随水流不断运动,并对滞留甚至沉积在滞止区内的颗粒物发生强烈冲击,使得颗粒物离底悬浮,返回主流区,并迅速通过流道,增大了水流对颗粒物的输移能力,增强了流道的抗堵塞性能。

植物乳杆菌YW11生产胞外多糖的发酵条件研究

对实验室从西藏灵菇中筛选出的一株植物乳杆菌YW11发酵产胞外多糖的条件进行优化。首先通过单因素实验对发酵条件进行初步优化,然后利用二水平正交试验直观分析确定影响因素的主次顺序。以胞外多糖产量作为响应值,采用3因素3水平的响应面分析法,建立二次多项式回归方程的预测模型,从而确定植物乳杆菌YW11产胞外多糖的最优条件。单因素实验结果表明,发酵时间为18 h、碳源为乳糖(质量浓度为15 g/L)、氮源为大豆蛋白胨(质量浓度为15 g/L)、发酵温度为32℃、接种量为3%、p H值为6.0。直观分析确定影响植物乳杆菌YW11产胞外多糖主要发酵因素为大豆蛋白胨质量浓度、p H值、接种量,响应面法优化其较佳值为:大豆蛋白胨质量浓度为13.50 g/L,接种量为2.70%,p H值为6.27。验证实验表明,在优化的发酵条件下得到植物乳杆菌YW11胞外多糖产量为131.26 mg/L,与理论预测值(129.915 mg/L)相接近。

解淀粉芽孢杆菌GSBa-1胞外多糖的发酵制取、流变学特性和应用

针对1株从传统酒曲中分离筛选得到的高产胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)解淀粉芽孢杆菌GSBa-1,采用单因素试验和响应面法确定了菌株的最优产EPS发酵条件:培养基组成为胰蛋白胨10 g/L、酵母浸粉5 g/L、蔗糖40 g/L、氯化钠10 g/L;发酵温度35℃、发酵时间36 h、摇床转速160 r/min、接种量4%,在此条件下EPS产量为326.45 mg/L。对EPS的流变特性进行研究,结果表明,该EPS溶液的黏度较低,具有浓度依赖性和剪切变稠的特性,随着温度升高,黏度降低。采用激光光散射仪辅助测量EPS的分子形态:得到EPS在水溶液中重均分子质量为4.993×10~5 g/mol,回旋半径为48.34 nm,流体力学半径为64.62 nm,结构参数为0.748,该分子可能为紧密的球状结构。透射电子显微镜观察验证了EPS的球状结构。将该EPS加入到酸性乳饮料中,既不会增加其黏度,又具有良好的稳定特性,表明解淀粉芽孢杆菌GSBa-1 EPS可以作为一种新型的食品稳定剂,具有潜在的应用价值。

益生性植物乳杆菌的温度胁迫处理及其对发酵冰淇淋品质和菌活性的影响

为提高冰淇淋中的益生菌活性,对1株分离自西藏灵菇的益生性植物乳杆菌K25进行不同温度的胁迫处理。实验分为低温处理组(4、10、20℃)和高温处理组(45、50、55℃),对菌株K25的处理时间为0.5、1.5、3、5、8、18、24 h,测定上述不同温度和时间组合处理对菌株于-20℃贮存1、15、30 d后活菌数的影响,以未经处理的菌株作为对照组。结果表明,4℃-18 h与55℃-0.5 h胁迫预处理后的菌株在-20℃贮存30 d后活菌数分别为对照组的12倍和15倍,选取4℃-18 h(C-K25)和55℃-0.5 h(H-K25)胁迫处理后的菌株制作冰淇淋并添加巧克力酱作为辅料。对产品理化性质测定结果表明,使用胁迫处理后的K25菌株可以降低冰淇淋产品的酸度,显著提高产品的黏度和硬度(P<0.05),且使用低温胁迫处理后的菌株能够改善冰淇淋的膨胀率和融化率。活菌数测定结果表明,对照组冰淇淋在-20℃贮存60 d后活菌数为5.63(lg(CFU/mL)),而H-K25与C-K25发酵的冰淇淋在-20℃贮存60 d后其活菌数分别为7.26(lg(CFU/mL))和7.32(lg(CFU/mL)),表明温度胁迫预处理对K25低温条件下的存活具有有益影响。而C-K25-巧克力组冰淇淋终活菌数最高为7.56(lg(CFU/mL)),表明巧克力对植物乳杆菌K25具有一定的低温保护作用。产品贮存30 d后,所有组别冰淇淋中的菌株在模拟胃酸和胆盐溶液环境中活菌数均无显著下降(P>0.05)。

藏灵菇发酵产胞外多糖的影响因素及其应用研究

利用苯酚-硫酸法从15个不同地区藏灵菇样品中筛选出3个高产胞外多糖样品(K4、K7、K12)。通过单因素分析确定K4、K7、K12高产胞外多糖的条件为:接种量K4为9%、K7和K12为7%;发酵时间K12为12 h、K4和K7为18 h;发酵温度均为37℃;脱脂乳浓度均为11%。藏灵菇K4、K12分别与商业发酵剂搭配制备发酵乳,结果表明,K12发酵乳的凝乳时间最短(4.52 h),胞外多糖含量和活菌数分别保持在50 mg/L左右和8.20 log cfu/m L以上,且具有较高的持水力和黏度。

产β-D-半乳糖苷酶马克斯克鲁维酵母的分离鉴定及其产酶特性

从藏灵菇中分离筛选到的一株高产β-D-半乳糖苷酶菌株ZX-5,经ITS DNA序列分析,鉴定为马克斯克鲁维酵母。对产酶培养基的最佳碳源和氮源优化结果为半乳糖2.0%,胰蛋白胨1.0%;产酶优化条件:温度30℃,培养基初始pH 6.5,装液量30%,转速100 r/min,接种量2.0%,发酵36 h。粗酶液酶活力为2.60 U/mL;经硫酸铵分级沉淀和DEAE离子交换层析,获得纯化酶的比活力为157.35 U/mg。酶最适反应温度35℃,最适pH 6.0,在20~40℃和pH 5.0~7.0的范围内酶的稳定性较好;Mn2+对酶的活性有促进作用。利用菌株ZX-5β-D-半乳糖苷酶分解乳糖并合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS),在35℃、乳糖质量浓度60 g/100 mL、酶浓度1.0 U/mL条件下,乳糖水解率达68.34%(50 h),GOS产率达34.70%(40 h),具有潜在的应用前景。

癌痛患者麻醉性镇痛药不合理用药与对策

目的 :评估本院麻醉性镇痛药的使用情况。方法 :对 179例癌痛患者住院病历中止痛药的用药方案和联合用药情况进行跟踪调查与分析 ,并分析门诊 1997年～ 2 0 0 0年麻醉性镇痛药处方。结果 :179例患者应用了止痛药 ;按传统给药和三阶梯给药两种方案的镇痛疗效有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :本院癌症病人尚未严格按WHO推荐的三阶梯止痛方案用药 ,部分癌症病历按三阶梯止痛用药与其它治疗配合 ,明显提高了癌症病人的生活质量。

甲醇芽孢杆菌凝乳酶对马苏里拉干酪加工特性的影响

为了探究甲醇芽孢杆菌(Bacillus methanolicus)凝乳酶在马苏里拉干酪加工中的应用,分别以使用甲醇芽孢杆菌凝乳酶、混合酶制剂(含质量分数10%甲醇芽孢杆菌凝乳酶和90%商品凝乳酶)制作的马苏里拉干酪作为实验组,以商品凝乳酶干酪作为对照组,测定不同组别干酪成熟期间的蛋白水解特性、质构、风味和微观结构变化,研究甲醇芽孢杆菌凝乳酶对马苏里拉干酪加工特性的影响。结果表明,实验组干酪在成熟过程中pH值(4.6~5.3)、微生物数量(8.80~9.68(lg(CFU/g)))与对照组无显著差异(P>0.05);实验组干酪水分质量分数(混合酶干酪为(43.21±1.17)%、甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪为(46.15±0.94)%)均显著高于对照组((41.08±1.04)%),得率(混合酶干酪为(9.27±0.17)%、甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪为(9.46±0.16)%)也显著高于对照组((8.98±0.13)%)(P<0.05);且实验组干酪的蛋白水解特性(pH 4.6时可溶性蛋白、酪蛋白水解程度和游离氨基酸质量分数)以及风味物质种类和相对含量等指标也优于对照组干酪。但是实验组中甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪保形性相对欠佳,感官评定得分偏低,混合酶干酪与对照组质构及感官基本得分一致,因此甲醇芽孢杆菌凝乳酶可以作为商品酶的部分代替品应用于干酪的生产中。

酒曲发酵产凝乳酶及其酶学特性研究

通过研究不同因素对酒曲发酵产凝乳酶的影响,确定适宜的产酶条件:酒曲添加量3%(质量分数),发酵时间4 d,培养基初始p H值为6.0,摇床转速120 r/min。利用乙醇分级沉淀对酒曲发酵液中的凝乳酶进行提取,得到体积分数为70%乙醇沉淀蛋白具有凝乳活力;进一步进行Sephadex G-75凝胶过滤得到纯化凝乳酶,并经SDS-PAGE电泳分析,确定酶的分子量为35.6 ku。对此纯化酶的酶学特性的研究表明,该酶的最适温度为40℃,p H值为5.4时酶活性最高,Ca2+,Zn2+,Mg2+和K+对酶活性具有促进作用,其中以Ca2+和Zn2+促进作用较强;Cu2+,Na+和Fe2+对酶活性有抑制作用,其中Cu2+的作用较为显著。该凝乳酶在干酪加工中具有潜在的应用前景。

黄酒麦曲中产凝乳酶菌株的分离鉴定

本研究利用梯度稀释法和划线纯化法对黄酒麦曲中的微生物进行初筛,再利用酪蛋白平板法和液态培养基发酵法进行复筛,最终得到了两株产凝乳酶的优良细菌菌株LB-1和LB-2。通过形态学特征观察、生理生化实验以及16S rDNA序列分析鉴定,这两株菌分别确定为甲醇芽孢杆菌(Bacillus methanolicus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。根据凝乳活力曲线发现,这两株菌在发酵24 h时其发酵液的凝乳活力最高,分别为269.66±0.78 SU/m L和187.50±1.4 SU/m L,此时的蛋白水解活力分别为1.476±0.49 U/m L和1.29±1.41 U/m L,凝乳活力与蛋白水解活力比值(C/P)分别为187.50和145.34。通过凝乳效果评价,其发酵液所形成的凝块组织结构、质构参数和风味物质均与商品凝乳酶形成的凝块相当,适用于干酪的加工。

甲醇芽孢杆菌凝乳酶的重组表达及其结构特性

为进一步了解微生物凝乳酶的结构特性,根据GenBank数据库中甲醇芽孢杆菌凝乳酶(I3EB99)的氨基酸序列和大肠杆菌密码子的偏爱性,设计合成此凝乳酶的全基因序列,构建原核表达载体,通过BL21(DE3)表达其融合蛋白,将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲和纯化,并利用生物信息学方法研究凝乳酶的三维空间立体结构。结果表明,重组表达的甲醇芽孢杆菌凝乳酶质量浓度为0.7 mg/mL,凝乳活力为(15870±1.17)SU/g,蛋白水解活力为(263.81±0.94)U/g,凝乳活力与蛋白水解活力比值为60.16,符合干酪生产加工的要求。结构特性研究表明,经重组表达后的甲醇芽孢杆菌凝乳酶呈现疏水特性,具有跨膜结构和信号肽,二级结构中α-螺旋少于β-折叠,在分离纯化过程中结构不稳定易降解,该凝乳酶与来自甲醇芽孢杆菌的一种未知蛋白酶是同源蛋白,高级结构与PDB蛋白数据库中的模板蛋白2ra1.1.A相似度最高。通过对甲醇芽孢杆菌凝乳酶结构特性的研究,为深入分析该凝乳酶作用机理及其功能性奠定了理论基础。

猪圆环病毒2型LAMP可视化快速检测方法的研究

本研究旨在建立有效的针对猪圆环病毒2型(PCV2)的诊断技术及开发试剂盒。采用环介导等温扩增方法(LAMP)检测猪圆环病毒2型(PCV2),对PCV2的ORF2基因设计出3对特异性引物,扩增PCV2基因的最佳温度和时间优化到59℃孵育55 min。用该方法对临床样品进行检测,LAMP检测对PCV2的检测限为10拷贝/μL,而常规PCR检测法的检测限为1 000拷贝/μL,表明LAMP检测法灵敏度高。该检测法不会与猪圆环病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎的猪病毒和轮状病毒发生交叉反应。用建立起的LAMP检测法对1 100个临床样品进行检测,950个样品被检测出为阳性样品。稳定性试验表明该试剂盒可以耐受至少40次的反复冻融。结果显示,该方法建立的猪圆环病毒2型诊断方法灵敏度高,特异性强,稳定性好。

猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测试剂盒的研制及应用

为了开发针对猪圆环病毒2型(PCV2)的诊断技术及其试剂盒,对PCV2的ORF2基因设计相应的特异性引物和探针,采用荧光定量PCR方法检测PCV2。试验表明:该方法循环阈值(Ct)与标准DNA模板在10~1—10~7拷贝/μL浓度范围内具有极好的线性关系,相关系数为0.9999;重复性好,批内试验中Ct值的变异系数在0.59%—1.05%,批间试验的Ct值变异系数为1.9%—4.2%;研制的检测试剂盒与猪瘟病毒(HCV)、猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)不发生交叉反应,检测极限和定量极限分别为10和100拷贝数。用此方法对1 000个临床样品进行检测,结果710个被检测为阳性。结果显示,所研制的PCV2诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性好,为PCV2的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的诊断方法。

我院癌症患者麻醉性镇痛药的应用调查与分析

目的:评估我院麻醉性镇痛药的应用情况。方法:对1997年～2000年麻醉性镇痛药和400份癌症患者住院病历中镇痛药的应用情况进行跟踪调查与分析。结果:400份癌症患者住院病历中应用了镇痛药的病历有179份,占44.75％;传统给药方案和“三阶梯给药方案”的镇痛疗效有显著性差异(P<0.05)。 结论:我院癌症患者尚未严格按照WHO推荐的“三阶梯止痛方案”用药。

商贸流通业对上海市社会经济发展的实证分析

改革开放以来，上海市经济持续高速增长，经济的不断增长促进了商贸流通业快速发展。上海在十五计划中就把商贸流通业列为上海六大支柱产业之一。商贸流通业规模不断扩大，流通产业程度不断提高，体制不断完善，多元经营主体基本形成，反过来促进了经济和社会的发展。

微滴PCR技术的研究进展

微滴PCR(microdroplet PCR)技术结合了PCR技术和乳化技术,该技术在乳化剂中进行,是一种新型的核酸扩增技术。它可以高效、高通量地扩增DNA分子,在生命科学研究领域得到了广泛的应用。文章就微滴PCR技术的基本原理、建立与发展及其应用作一综述。