黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响

目的观察黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组进行缺氧缺糖3h后再复氧复糖12 h,并于复氧复糖的同时加入黄芪甲苷。用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果正常对照组PC12细胞贴壁生长,呈多角形,突起明显,突起之间交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性较强。与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组细胞变圆或肿胀,突起回缩或消失,细胞膜破损,胞体折光性差,细胞活性明显下降(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪甲苷组细胞生长状态见好转,突起较为明显,胞体折光性较好,细胞活性升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数下降(P<0.05)。黄芪甲苷溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比无明显差异(P>0.05)。结论黄芪甲苷可减轻缺氧缺糖/复氧复糖引起的PC12细胞损伤,提高细胞活性,抑制细胞凋亡。

葡萄籽原花青素对顺铂导致H9c2细胞毒性的保护作用

目的:研究葡萄籽原花青素对顺铂诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的影响并探讨其可能机理。方法:体外培养H9c2细胞,噻唑蓝法测定葡萄籽原花青素、顺铂对H9c2细胞生长的影响及葡萄籽原花青素对顺铂所致H9c2细胞毒性的影响,观察细胞的形态变化,并通过检测H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量研究其可能机理。结果:葡萄籽原花青素能明显改善顺铂所致H9c2细胞形态变化,并抑制顺铂所致H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性的降低、丙二醛含量的升高。结论:体外培养条件下葡萄籽原花青素能改善顺铂诱导的H9c2细胞的损伤,其作用机制可能与调高H9c2细胞的抗氧化能力有关。

顺铂诱发肾毒性机制的研究进展

顺铂是临床广泛应用的一种抗癌药物.因为顺铂进入机体后主要通过肾脏排泄,所以其肾毒性最为明显.顺铂对肾小管的损害一般是可逆的,但在大剂量或连续投药时,可使肾小管损伤表现为不可逆,严重者导致肾衰竭甚至死亡.顺铂在肾脏组织中高浓度分布和长时间蓄积是其肾毒性作用的基础.本文对目前研究最广泛的顺铂肾毒性机制及所取得的成果进行总结综述如下.

缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化与细胞凋亡的关系

目的:观察缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化及其与细胞凋亡的关系,探讨自噬对PC12细胞的保护作用。方法:取对数生长期的PC12细胞,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组进行缺氧缺糖3 h后再复氧复糖12 h,自噬抑制剂组和自噬激活剂组于复氧复糖的同时分别给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬激活剂雷帕霉素。用透射电子显微镜和单丹磺酰尸胺荧光染色检测自噬小体的变化,Annexin V-FITC/PI流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡的情况。结果:与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组的自噬小体增多(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,自噬抑制剂组的自噬小体明显减少(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数显著升高(P<0.05),而自噬激活剂组自噬小体变大,数量明显增多(P<0.05),并偶见自噬溶酶体,细胞凋亡率和凋亡指数显著下降(P<0.05)。结论:缺氧缺糖/复氧复糖可以诱导PC12细胞发生自噬,且细胞自噬可以抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用。

黄芪甲苷通过抑制细胞凋亡减轻氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞损伤的研究

目的:探讨黄芪甲苷对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法:选取对数生长期PC12细胞,随机分为正常对照组(Control)、模型组(Model)、黄芪甲苷组(AST-Ⅳ)。Control组细胞正常培养;Model组和AST-Ⅳ组细胞在氧糖剥夺2 h后,复氧复糖24 h;AST-Ⅳ组细胞在复氧复糖的同时给予黄芪甲苷(100 mmol/L)处理。倒置显微镜观察细胞生长状态,MTS法检测细胞存活率,Western blot检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果:与Control组相比,Model组细胞折光性差,突触减少,细胞肿胀聚集、脱落,存活率降低,Bcl-2表达减少,Bax、Caspase-3的表达增多(P<0.05)。与Model组比较,AST-Ⅳ组细胞生长状态好转,肿胀、聚集减少,存活率增高,Bax、Caspase-3的表达减少,Bcl-2表达增多(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可通过抑制氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的凋亡发挥保护作用。

葡萄籽原花青素对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞TM4损伤的保护作用

目的研究葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对顺铂(Cisplatin,c DDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法体外培养正常小鼠睾丸支持细胞TM4,MTT法测定GSPE、c DDP分别对TM4细胞生长的影响以及GSPE对c DDP诱导的TM4细胞损伤的保护作用,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量,同时观察细胞形态学变化。结果 GSPE可显著增强TM4细胞存活率,抑制c DDP对TM4细胞的毒性作用,降低细胞内MDA、NO、NOS含量,减缓SOD、GSH、GSHPx耗竭,对c DDP诱导TM4细胞抗氧化酶活力降低和脂质过氧化物含量升高有显著抑制作用(P<0.01)。结论 GSPE能有效抑制c DDP诱导的TM4细胞氧化性损伤,其机制可能与GSPE的抗氧化作用相关。

自噬-凋亡平衡调控在脑缺血再灌注损伤中的作用及中医药干预研究进展

脑缺血再灌注损伤过程中自噬和凋亡均被激活。适度自噬可以促进神经元存活,抑制凋亡,而自噬过度则会加速神经元凋亡。如何将自噬控制在适度范围内,维持神经元自噬-凋亡平衡,从而减轻神经损伤是目前脑缺血防治研究的热点。自噬-凋亡的平衡调控涉及多重机制,以此为切入点对中医药干预作用的研究也日益受到关注。就对脑缺血再灌注损伤中神经元自噬-凋亡平衡的作用、调控机制及中医药的干预作用进行综述。

新生大鼠皮层神经元分离和培养方法的优化

目的:优化新生大鼠皮层神经元提取、培养的方法,以获得高纯度并且生长状态良好的神经元,为神经系统的体外研究提供实验技术。方法:取新生24 h内的SD大鼠皮层组织,通过单次消化法、分步消化法两种不同的消化方法制备单细胞悬液,并以3种不同接种密度铺板,采用Neurobasal-A培养基+2%B27+0.5 mmol/L L-谷氨酰胺的体系进行培养。通过台盼蓝染色计数的方法计数两种消化方法得到的单细胞悬液中总细胞数和活细胞数,并计算细胞成活率。采用分步消化法制备单细胞悬液,用倒置显微镜观察不同密度接种后的神经元培养至7 d的生长状态,并观察以适宜密度接种的神经元培养1~7 d的生长状态。分别用神经元核抗原(NeuN)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)两种神经元标志物鉴定神经元纯度。结果:分步消化法得到的细胞数量及细胞成活率均明显高于单次消化法(P <0.01);以5×105细胞/孔的密度接种细胞得到的神经元生长状态良好,密度适宜,形成的突触网络丰富而均匀;神经元培养1~7 d,胞体逐渐增大,突触逐渐伸长,直到第7 d,神经元胞体立体饱满、折光性强,形成均匀密集的突触网络;经鉴定,培养的神经元纯度可达95%以上。结论:分步消化法提取神经元、接种密度为5×105细胞/孔的培养稳定、高效,得到的神经元纯度高、生长状态好,可作为神经系统疾病体外研究的良好细胞模型。

补阳还五汤通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路调控自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路机制。方法用改良线栓法建造大鼠左侧脑缺血模型,各组大鼠每24 h给药1次,共3次。再灌注72 h后观察大鼠神经损伤情况和脑梗死体积改变;尼氏染色法和TUNEL染色法观察神经细胞形态、数量以及凋亡情况;Western blot检测自噬蛋白和AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路相关蛋白表达情况。结果补阳还五汤改善大鼠神经功能缺陷,减少脑梗死体积和神经细胞凋亡,减轻脑组织病理损伤;抑制AMPK磷酸化活化,解除AMPK对下游mTOR和ULK1的抑制,促进二者磷酸化激活,抑制细胞自噬。AMPK激动剂Metformin提高细胞自噬水平,同时逆转了补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤作用。结论补阳还五汤介导AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路对脑缺血/再灌注损伤大鼠发挥神经保护作用。

补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用。方法大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(Sham)、模型组(Model)、补阳还五汤组(BYHWD)、PI3K抑制剂组(LY294002)与溶媒剂组(Vehicle)。除Sham组外,其余各组均缺血2 h,再灌注72 h造模处理。Zea Longa评分评估神经缺损、TTC检测脑梗死体积、HE观察脑部缺血半暗带(ischemic penumbra,IP)损伤、免疫荧光检测LC3B、Western blot检测PI3K/AKT通路与自噬标志蛋白。结果BYHWD组与Model组相比,大鼠神经功能评分降低、脑梗死体积减小、脑部IP病理损伤减轻,PI3K与p-AKT/AKT表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ降低,p62升高(P<0.05);BYHWD的调控作用被LY294002减弱(P<0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/AKT通路抑制细胞自噬,从而减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤。

补阳还五汤对脑缺血/再灌注损伤大鼠皮质区沉默信息调节因子1表达的影响

目的建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,探讨补阳还五汤对皮质区沉默信息调节因子1(silent information regulation 1,SIRT1)蛋白表达的影响,研究脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury,CIRI)的可能作用机制。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO/R)、补阳还五汤组(BYHWT)、阿托伐他汀组(Atorvastatin),每组15只。缺血2 h/再灌注72 h及药物干预后,采用激光散斑血流监测视频系统评价模型建造成功。造模成功后通过Zea Longa神经功能学评分评价大鼠神经功能缺损情况;TTC染色检测脑梗死体积;尼氏染色观察神经细胞损伤情况;Western blot检测SIRT1蛋白表达水平;免疫荧光检测SIRT1荧光表达水平。结果与Sham组相比,MCAO/R组大鼠神经功能缺损严重(P<0.05);脑梗死体积增加(P<0.05);神经细胞损伤严重、排列紊乱、数量减少,细胞核固缩(P<0.05);SIRT1表达减少(P<0.05);SIRT1荧光强度减弱(P<0.05)。与MCAO/R组相比,BYHWT组和Atorvastatin组大鼠神经功能缺损减轻(P<0.05);脑梗死体积占比下降(P<0.05);神经细胞损伤减轻、数量增多(P<0.05);SIRT1表达增加(P<0.05);SIRT1荧光强度增强(P<0.05)。结论补阳还五汤可有效减轻脑缺血/再灌注大鼠的脑损伤,其发挥保护作用可能与提高缺血侧皮质区SIRT1蛋白表达有关。

毛蕊异黄酮减轻缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞损伤

目的 探讨毛蕊异黄酮(calycosin)对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞损伤的影响。方法 采用缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型,将PC12细胞随机分为5组:正常对照组(control组),缺氧缺糖/复氧复糖组(model组),毛蕊异黄酮高、中、低剂量(0. 140μmol/L、0. 070μmol/L、0. 035μmol/L)组。倒置显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞活力;LDH法检测细胞乳酸脱氢酶漏出率;PI荧光染色检测细胞膜完整性;免疫组化法检测caspase-3表达;Bax、Bcl-2免疫荧光法检测细胞凋亡情况。结果 Control组细胞生长状态良好;与control组比较,model组细胞数量减少,突触减少,细胞出现皱缩,胞膜破坏,细胞活性显著降低(P <0. 05),乳酸脱氢酶漏出率显著升高(P <0. 05),PI红染细胞数增多(P <0. 05),caspase-3表达明显升高(P <0. 05),Bax/Bcl-2比值显著升高(P <0. 05);与model组比较,calycosin中、低剂量组细胞数量均增多,突触增多,细胞较为规整,细胞活性显著提高(P <0. 05),乳酸脱氢酶漏出率显著降低(P <0. 05),PI红染细胞数减少(P <0. 05),caspase-3表达显著降低(P <0. 05),Bax/Bcl-2比值显著降低(P <0. 05),且以上指标中剂量组效果更加显著;而高剂量组与模型组比较,以上指标差异均不明显(P> 0. 05)。结论 毛蕊异黄酮可优化缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞生长状态,提高细胞活力,抑制乳酸脱氢酶漏出,并通过降低caspase-3表达和Bax/Bcl-2比值抑制细胞凋亡,有效减轻细胞损伤,发挥保护作用。

低聚葡萄籽原花青素对顺铂所致人胚肾细胞线粒体损伤的保护作用

目的:探究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,O-GSP)对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)导致的人胚肾细胞HEK293中线粒体损伤的保护作用及其作用机制。方法:通过试剂盒检测O-GSP、CDDP及O-GSP+CDDP处理后细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reaction oxygen species,ROS)含量、细胞质内糖代谢酶(己糖激酶和乳酸脱氢酶)活力和线粒体糖代谢酶(苹果酸脱氢酶)活力变化情况,并采用流式细胞术对各组细胞ATP含量、线粒体膜电位变化以及细胞凋亡率进行检测。结果:O-GSP预处理极显著改善了CDDP引起的细胞内MDA含量升高,还原型GSH、ROS、ATP含量及线粒体膜电位降低和糖代谢异常(P<0.01),从而减轻了CDDP诱发的线粒体损伤,对HEK293细胞凋亡有极显著的缓解作用(P<0.01)。结论:O-GSP对CDDP所致HEK293细胞线粒体损伤具有拮抗作用,并且该作用与O-GSP的抗氧化活性有关。

黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡

目的研究黄芪甲苷通过激活细胞自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导PC12细胞凋亡的作用。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为7组:正常对照组、模型组、溶媒组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组、自噬激活剂组。除正常对照组外,其余各组剥夺氧、糖3h后再复氧、复糖12 h,并于复氧、复糖的同时给予相应药物处理。用透射电镜观察自噬小体的变化,Western blot检测LC3-II、Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,模型组出现典型的自噬小体,LC3-II、Beclin1表达均增多(P<0.05),同时Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数也升高(P<0.05)。与模型组相比,黄芪甲苷组、自噬激活剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均增多(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均下降(P<0.05);而自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达减少(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05);溶媒组与模型组之间无显著差异(P>0.05)。与黄芪甲苷组相比,黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均减少(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过激活细胞自噬而抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。

葡萄籽原花青素对顺铂所致大鼠肾脏氧化损伤和线粒体损伤的防护作用

本文研究了葡萄籽原花青素(GSPE)对顺铂(CDDP)所致大鼠肾脏氧化应激损伤和线粒体损伤的防护作用。实验大鼠分为正常对照组、CDDP模型组、GSPE(400 mg/kg)组、CDDP+GSPE(200 mg/kg)组和CDDP+GSPE(400 mg/kg)组。各组分别以蒸馏水和相应剂量GSPE对大鼠连续灌胃15 d。灌胃10 d后CDDP组和CDDP+GSPE组一次性腹腔注射CDDP(8.0 mg/kg),其余注射等量生理盐水。检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr E)、肾脏指数、肾皮质抗氧化和碳水化合物代谢酶指标,光镜观察肾组织结构。GSPE预处理的大鼠在注射CDDP后与模型组相比肾脏指数、BUN、Cr E含量显著降低,肾皮质还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和苹果酸脱氢酶(MDH)、己糖激酶(HK)活力的变化明显改善。病理切片显示,GSPE预处理可减轻顺铂引起的肾小球萎缩等病理损伤。提示GSPE对CDDP所致大鼠氧化应激损伤和线粒体损伤具有明显的防护作用。

钙敏感受体参与黄芪甲苷减轻脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨钙敏感受体(CaSR)参与黄芪甲苷减轻脑缺血再灌注损伤(CIRI)的作用。方法:以线栓堵塞大脑中动脉/再灌注建立大鼠CIRI模型,缺血2h后再灌注24h,分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、钙敏感受体激动剂+黄芪甲苷组。TTC染色观察脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理形态变化;TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;Western blot测定CaSR和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组可缩小脑梗死面积,减轻脑组织病理损害,减少细胞凋亡,降低CaSR表达量,抑制Caspase-3表达(P<0.05)。与黄芪甲苷组比较,钙敏感受体激动剂+黄芪甲苷组脑梗死面积增大,脑组织病理损害加重,细胞凋亡增多,CaSR及Caspase-3表达增多(P<0.05),黄芪甲苷减轻CIRI的保护作用被CaSR激动剂GdCl3大部分抑制。结论:黄芪甲苷可减轻CIRI,其机制可能与下调CaSR表达、抑制细胞凋亡有关。