原位杂交技术研究乙肝病毒感染与原发性肝癌的关系(附50例报告)

本文利用生物素标记探针从细胞定位水平对50例原发性肝癌(HCC)手术活检标本进行了HBV DNA检测。 32例(64％)HCC切片中检出HBV DNA,其中25例(50％)系肝癌细胞与癌旁肝细胞内均检出HBV DNA,其余7例则仅在癌旁肝细胞内检出HBV DNA。光镜下观察,HBV DNA的分布具有胞浆内为主;癌旁肝细胞优势性、HCC阳性者同时伴有癌旁肝细胞阳性及不均一性等特点。上述结果提示至少占半数的HCC病例其癌细胞可能来自HBV DNA阳性肝细胞的恶变,但HBV DNA在恶变过程中的确切作用尚需进一步研究。

乙肝疫苗0、1、2、月免疫接种新方案效果初步观察

接种乙肝疫苗主动免疫是控制和预防乙肝病毒感染的主要手段,现国内普遍采用的乙肝疫苗接种方案为0、1、6月三次注射法,完成全程免疫的时间太长,推迟了接种者有效抗-HBs水平的产生,使其不能得到及时保护。同时也给乙肝疫苗的保存带来了一定的不便。本文为113例乙肝疫苗接种者设计了每次10μg0、1、2月三次注射新方案,另以83例按0、1、6月老方案接种作为对照,进行了缩短全程免疫时间的免疫应答效果及安全性的观察,现将结果报告如下:

δ病毒中国四川株cDNA的合成

本文报道应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以一例亚急性重症肝炎患者肝组织为原料,合成δ病毒中国四川株cDNA。产物经凝胶电泳及Southern印迹杂交证实。

HBV感染垂直传播阻断研究的现状与问题

乙型肝炎病毒(HBV)感染是严重的公共卫生问题.随着献血管理的加强和乙肝疫苗的逐步推广,HBV感染水平传播的流行势头已经得到遏制,而垂直传播成为导致HBV慢性感染的主要途径之一.HBV感染垂直传播包括母婴传播和父婴传播,以前者为主.传播的途径包括:宫前感染、宫内感染、产程感染、出生后感染.对新生儿联合使用乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗已成为阻断母婴传播的重要措施,但仍有部分病例未能获得有效保护.其中,HBV宫内感染的存在是导致阻断措施失败的重要原因之一.

δ肝炎病毒研究的新成果

今年9月25日～28日在美国冷泉港召开的1989年病毒性肝炎国际会议上,报道了许多有关δ肝炎病毒的最新研究成果,本文就这一领域内的最新进展作一综述。

阴蒂功能的阴门拉环结构学说

阴蒂是女性专司性功能的一个器官,其解剖生理功能就是激发性唤起,给女性带来性快感.性快感是推动女性参与性活动的内驱力,是推进人类生殖繁衍的动能.

警惕当前国内外流行的几种新发传染病

近30年来,世界各地已发现了30多种新型传染病,其中有些已在中国陆续发现。这些新发传染病往往传染性强、传播速度快、病死率高,一旦传入中国,将严重影响社会稳定、经济发展和国家安全。本文重点介绍艾滋病、非典、禽流感、疯牛病、埃博拉出血热、西尼罗病毒、汉坦病毒肺综合征出血热。

以循证医学指导阻断感染垂直传播的研究

乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重的公共卫生问题，我国慢性携带者多达1．2亿，成为慢性肝炎、肝硬化、肝癌的重要原因，对人民健康及国民经济发展构成了严重的威胁。由于缺乏特效药物，慢性感染难以根治，故关键在于预防。随着献血管理的加强和乙肝疫苗的逐步推广，感染在普通人群中水平传播的势头已经得到遏制，而垂直传播成为导致慢性感染的主要途径之一。

乙型病毒性肝炎的治疗进展(二)

抗病毒药物联合治疗 抗病毒药物联合治疗是抗感染领域常用的策略之一，联合用药的目的是获得疗效的叠加或协同作用，减少或延迟耐药的出现，但联合治疗的更多益处和前景还需要较多资料来证实。

抗震救灾中的传染病防治工作原则

人类的历史教训证明,包括大地震在内的严重自然灾害,对地域生态环境和人类居住条件造成极大的破坏,对灾区人员的健康造成沉重的打击.在这种情况下,发生重大传染病流行的风险将会显著增加.汶川大地震发生后,搜寻生还者,抢救伤病员是抗震救灾第一阶段的重点.……

多烯磷脂酰胆碱(易善复)治疗慢性肝炎的系统评价

目的评价易善复治疗慢性肝炎的有效性与安全性。方法计算机检索EMBASE(1980～2003年5月)、MEDLINE(1966～2003年5月)、Cochrane图书馆(2003年第2期)、中国生物医学文献光盘数据库(1979～2003年5月),并手工检索8种主要的中文专业学术期刊(1989～2003年5月),纳入比较易善复与安慰剂或空白治疗慢性肝炎的随机对照试验。由两名评价者独立提取资料并进行方法学质量评估。试验数据的统计分析采用Cochrane协作网提供的RevMan4.2软件进行。结果最终纳入6个RCT,共568例患者。对其中4个RCT(451例患者)的Meta分析显示,易善复治疗慢性肝炎的有效率为52.5%,对照组的有效率为35.7%,其差异具有统计学意义[RR1.81,95%CI(1.41,2.33),Z=4.69,P<0.00001]。对其中3个RCT(100例)的Meta分析显示,与对照组相比,易善复能够改善慢性肝炎患者的病理组织学,其差异有统计学意义[RR2.58,95%CI(1.61,4.15),Z=3.91,P<0.0001]。此外,没有报道与易善复治疗慢性肝炎相关的严重不良反应。结论现有临床证据表明,与安慰剂和空白对照组相比,易善复治疗慢性肝炎有效,可改善患者的临床症状,改善患者的病理组织学,同时有利于改善患者的肝功能,且无明显药物不良反应。但本系统评价纳入的RCT和患者数量有限,其临床疗效须进一步开展大规模的高质量临床试验进行验证。

5600例血清标本乙肝病毒DNA定量与免疫学标志物检测的对比分析

目的探讨乙肝病毒(HBV)感染血清学标志物常见模式与HBVDNA拷贝数之间的相关关系。方法对5600例血清标本进行HBVDNA荧光定量测定(FQ-PCR)和乙肝病毒感染血清学标志物(HBVm)测定。结果在2010例大三阳(即HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性)的标本中,检出HBVDNA阳性者有1796例,平均拷贝数为3.73×107/mL;在1790例小三阳(即HBsAg、抗HBe、抗HBc均阳性)的标本中,HBVDNA阳性者为301例,平均拷贝数为1.21×106/mL;在793例HBsAg、HBcAb阳性的标本中,HBVDNA阳性235例,平均拷贝数6.27×106/mL;而在278例HBVm全阴性的标本中,仍有3例检出HBVDNA阳性,平均拷贝数为1.63×104/mL。结论在各种HBVm模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高;在HBsAg、抗-HBc阳性的血清中存在中等水平的HBV复制;而血清中未检出HBVm者并不能排除HBV感染。

骨髓间充质干细胞在肝部分切除模型小鼠体内向肝细胞分化

以含20%胎牛血清的DM EM低糖培养基,原代细胞直接贴壁培养,48 h后换液继续培养,分离BALB/C小鼠的骨髓间充质干细胞,该细胞分为CD44+CD29+与CD44-CD29+两群。将第5代骨髓间充质干细胞注入部分肝切除小鼠肝右叶,术后5 d和14 d分别处死动物,测体重、肝重与肝功,制备肝组织芯片,原位杂交和免疫荧光同步检测Y染色体与肝细胞标记(白蛋白或CK 18),并作图像叠加。发现移植组小鼠在移植后5 d与14 d在注射肝叶与非注射肝叶内皆可检出大量同时表达Y染色体与白蛋白及Y染色体与CK 18的细胞。术后14 d,移植组肝重与肝脏器指数高于模型组。表明骨髓间充质干细胞能在有再生需求的小鼠体内向肝细胞分化并参与再生。

乙肝免疫球蛋白阻断乙肝病毒宫内感染的系统评价

目的系统评价乙肝免疫球蛋白(HBIG)对乙肝病毒(HBV)母婴垂直传播的阻断效果和安全性。方法计算机检索EMbase(1980～2007.4)、MEDLINE(1996～2007.4)、Cochrane图书馆(2007年第3期)、中国生物医学文献数据库(CBM,1978～2007.4),纳入比较孕期单独使用HBIG与不使用HBIG阻断HBV母婴垂直传播的随机对照试验。由两名评价者独立选择试验、提取资料和进行方法学质量评估。研究数据的统计分析采用Cochrane协作网提供的RevMan4.2.8软件进行。结果最终纳入4个RCT,共359例孕妇。Meta分析结果显示,试验组HBVDNA(+)孕妇所生新生儿血HBVDNA(+)率为8.65%,对照组为35.06%,其差异具有统计学意义[OR0.17,95%CI(0.09,0.31),P<0.00001]。此外,无论是对孕妇还是胎儿都没有报道与HBIG相关的严重不良反应。结论现有研究结果显示,与空白对照比较,HBIG能有效提高乙肝病毒宫内感染的阻断率,并且无明显药物不良反应。由于本系统评价纳入的RCT质量均为C级且患者例数有限,存在选择性偏倚和发表偏倚的高度可能性,我们期待将来高质量的随机双盲对照试验提供高质量的证据。

小鼠胚胎成纤维细胞的分离与培养

目的 探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法 取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对 MEF分离及培养的影响进行研究。结果 13.5 d胎龄鼠胚的 MEF分离效果优于 10 .5 d、18.5 d胎龄鼠胚 ;MEF在体外为贴壁生长型细胞 ,第三代细胞增殖旺盛 ;在室温条件下 ,0 .2 5 %胰酶消化 MEF时间以 3～ 5 min为宜。结论 MEF在第 3代增殖旺盛 。

小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

探索在体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞 (Bone m arrow m esenchym al stem cells,BMSCs)的最适条件。以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合 ,在体外分离 BAL B/C小鼠的 BMSCs,通过 MTT法测定了不同离心力、不同换液时间、不同血清浓度、不同种植密度等因素对 BMSCs分离和培养的影响。在 5 0 0 g× 30 min的离心力下分离细胞 ,加入 10 %的胎牛血清 ,原代按 (12～ 2 0 )× 10 5/m l的细胞密度接种 ,接种 2 4 h后换液 ,继代种植密度为 6 .4～ 2 5 .6× 10 4 /ml时最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,细胞快速增殖 ,传代后 8h贴壁达 90 %以上 ,2 4 h便进入对数生长期 ,直至第 5 d,细胞约增殖 3倍。本研究建立了在体外分离培养骨髓间充质干细胞的细胞生物学方法和技术参数。

拉咪呋啶预防乙肝相关性肝硬化肝移植术后乙肝再感染的临床对照研究

目的:了解乙肝相关性失代偿肝硬化肝移植术后使用拉咪呋啶预防移植物乙肝再感染的疗效及乙肝标志物在血清及肝组织中的动态变化.方法:用酶联放免法,血清HBVDNA荧光定量法、肝穿组织免疫组化LSAB法及HBVDNA原位杂交法定期检测25例受体血清及肝穿组织,观察肝移植术后HBV标志物在血清及肝组织中的动态变化.本研究设计为前瞻的开放的非随机的临床对照研究.25例被分为乙肝病毒活跃复制(15例)及非活跃复制组(10例)两组,皆以拉咪呋啶100mg/d术前后服用预防,非活跃复制组中有3例未能及时服用拉咪呋啶作为对照组.结果:在HBV活跃复制组,术前口服拉咪呋啶平均2wk能使80%以上的患者血清HBVDNA阴转;继续口服,术后表面抗原消失,部分血清乙肝病毒抗体(表面抗体HBsAb9/15,核心抗体HBcAb13/15及HBeAb11/15)可在术后1-2wk出现,至6mo可逐渐消失;血清中HBVDNA荧光定量可一直维持阴转的状态;肝穿组织中HbsAg,HBcAg及HBVDNA原位杂交可长期维持阴性.10例乙肝病毒活跃复制受体其HBV血清标志物在12-44wk之间完全消失;本组中2例(2/15,13.3%)在2a时发生拉咪呋啶预防失败而致移植物再感染或乙肝复发;在HBV非活跃复制组,乙肝病毒抗原抗体表达同活跃复制组:表面抗原术后即消失,乙肝病毒抗体即在1-2wk出现(BsAb4/7,HBcAb6/7,HBeAb2/7),6mo左右消失.3例(43%,3/7)在近2a时血清及肝组织中HBV标志即完全消失.本组无移植物再感染,乙型肝炎复发及乙肝病毒相关死亡.若血清中重新出现表面抗原或HBVDNA荧光定量阳性或肝穿组织免疫组化或HBVDNA原位杂交阳性则可诊断为HBV再感染.未能及时服用拉咪呋啶的3例非活跃复制的乙肝受体分别在术后8、10、12mo移植物感染及复发新肝乙型肝炎,移植物再感染率及乙肝复发率为100%,其中1例死于纤维淤胆性肝炎,后二者经加用拉咪呋啶治疗为主的综合治疗而缓解.本研究除对照组外,拉咪呋啶预防下移植物总的乙肝再感染率为9.1%(2/22),受体HB复发率为4.5%(1/22),1-2a生存率达87%.结论:拉咪呋啶能有效地预防失代偿期乙肝相关性肝脏疾病受体、尤其是乙肝病毒活跃复制受体肝移植术后移植物乙肝病毒的再感染及乙型肝炎复发,甚至使血清中及移植物的乙肝病毒达到临床清除.远期疗效正在进一步的评价中.

冻存人脐血间充质干细胞向类肝细胞的诱导分化

目的:分离培养人脐血间充质干细胞,观察其冻存复苏后向肝细胞定向分化的能力。方法:实验于2004-01/2006-01在四川大学华西医院感染性疾病中心生物治疗国家重点实验室进行。采用密度梯度离心与直接贴壁相结合的方法,1×107L-1和1×108L-1两种接种密度进行人脐带血间充质干细胞的分离,观察细胞生长及检测其表面抗原。将第6代的人脐带血间充质干细胞采用梯度冷冻技术冻存6个月,复苏后培养至第8代时,加入肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子-4联合诱导28d。将第8代人脐带血间充质干细胞爬片与诱导28d后的类肝细胞爬片共培养,第8代人脐带血间充质干细胞爬片与未诱导培养28d的人脐带血间充质干细胞爬片共培养作为阴性对照。检测加入肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4后不同时间点及共培养28d后的人脐带血间充质干细胞中CK8&18、白蛋白和糖原的表达。结果:①密度梯度离心收获的单个核细胞培养传代后,能获得均一贴壁的间充质干细胞,第5代细胞中,CD44阳性的细胞达97.9%。②人脐血间充质干细胞冻存复苏后,活细胞约为70%,复苏后接种密度为1×107L-1的生长状态优于1×108L-1。③添加肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4后,可以在细胞内检测到CK8&18、白蛋白及糖原的表达。④与类肝细胞共培养28d后,人脐血间充质干细胞中小部分细胞中同时表达CK8&18和白蛋白,并有糖原的表达。结论:人脐血间充质干细胞可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得,并可冷冻保存;复苏后在肝细胞生长因和成纤维细胞生长因子4的联合诱导下,能定向分化为表达CK8&18,并合成白蛋白和糖原的类肝细胞,类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。

血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原及层粘蛋白水平与实验性肝纤维化的关系

目的 :评价血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ)、Ⅳ型胶原 (CⅣ)及层粘蛋白 (LN)水平与实验性肝纤维化的关系。方法 :采用半定量计分系统 (SSS)中炎症活动度及纤维化程度计分方案对温阳中药肝之福预防及治疗肝纤维化大鼠实验的病理组织共 73份标本进行半定量计分 ,同时检测血清HA、PCⅢ、CⅣ及LN水平 ,进行Pearson相关性分析。结果 :四项血清肝纤维化指标不论与肝脏炎症活动度还是纤维化程度均呈正相关 (P <0 0 1)。结论 :血清HA、PCⅢ、CⅣ及LN水平可在一定程度上反映肝组织的炎症和纤维化程度 ,联合检测价值较高。