两种不同方法分离脐血造血干细胞实验研究

目的比较两种不同方法分离脐血造血干细胞的结果。方法采用Ficoll法、HES法分离脐血单细胞,比较两种方法优点。结果HES法所得MNC产率(79.31±2.68)%、GM-CFU数(60.92±9.49)均显高于Ficoll分离法所得MNC产率(41.72±4.19)%、GM-CFU数(31.17±5.26) (P<0.01)。该研究采用S法分离脐血造血干细胞对HLA相合的相关脐血移植已成功重建造血。结论HES分离法病原菌污染机,且单个核细胞、造血干/祖细胞的回收率较高,对重建造血无不良影响,是一种较好的分离方法。

急性心肌梗死患者血浆蛋白C和D-二聚体测定及临床意义

目的探讨急性心肌梗死患者血浆蛋白C活性和D-二聚体水平及意义。方法采用发色底物法(蛋白C)和免疫比浊法(D-二聚体)对22例急性心肌梗死患者血浆蛋白C活性和D-二聚体进行了检测,并与正常对照组(n=20)进行比较。结果急性心肌梗死患者血浆D-二聚体水平明显高于正常对照组(P<0.01),而蛋白C活性检测与正常对照组没有明显差别(P>0.05)。结论蛋白C不是引起急性心肌梗死的主要因素,D-二聚体增高对于诊断急性心肌梗死具有一定的价值。

一种新的GP Ⅱb基因540A缺失移码突变引起的血小板无力症

目的:为了明确1例血小板无力症患者发生的分子机制。方法:用40对引物对血小板无力症患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45个外显子序列及其剪切点进行全长扩增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行基因突变筛选,将筛选出的PCR产物进行直接测序。结果:患者GPⅡb基因Exon4的PCR产物经SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现异常条带,PCR产物直接测序显示GPⅡb基因540A缺失导致后面的氨基酸编码发生移码突变。结论:GPⅡb基因540A缺失发生移码突变是GPⅡb基因的一种新突变,是血小板无力症发病的分子基础之一。

血小板对不同介质的体外粘附研究

采用显色法研究正常和缺乏。αⅡｂβ＿３，αｖβ＿３的血小板对不同介质的体外粘附作用。结果：血小板对胶原的粘附能被１０Ｅ＿５部分阻断；对纤维蛋白原的粘附被１０Ｅ＿５完全阻断，被６０９部分阻断；６０９可阻断血小板与外连素的粘附。选择纤维蛋白原和外连素作粘附介质对判断血小板无力症是由于ＧＰⅡｂ还是Ⅲａ原发缺陷具重要意义。

急性白血病患者bcl-2基因表达水平及其临床意义

用半定量RT PCR检测了 38例急性白血病患者bcl 2基因表达。结果表明 ,临床复发难治组bcl 2基因表达明显高于初诊组和CR组 ,且bcl 2表达水平与临床复发难治呈正相关 (r =0 830 ,P <0 0 1)。提示bcl 2基因高水平表达是导致临床复发难治的因素之一 ;检测bcl 2表达水平对于衡量白血病患者对抗肿瘤药物敏感性及判断预后有一定意义。

急性脑梗死发作期间组织因子途径改变的观察

目的 :观察急性脑梗死 (ACI)与组织因子途径变化以及与该途径有关的其他凝血因子的关系。方法 :71例经 CT确诊为 ACI患者和 5 0名正常人被纳入研究范围。血浆中组织因子 (TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)活性测定采用发色底物法 ;抗原测定用酶联免疫吸附法 (ELISA) ;血浆中 F 促凝活性 (F ∶C)和F 促凝活性 (F ∶C)测定用一期凝固法 ;凝血酶原 (F )的活性测定采用 Ecarin法 ;纤维蛋白原 (Fbg)的活性测定采用凝血酶法 ;抗凝血酶 (AT )的测定用肝素辅因子法。结果 :与正常对照组比较 ,ACI患者血浆中TF活性显著增加 (P<0 .0 5 ) ,TF抗原含量显著增加 (P<0 .0 5 ) ,TFPI的活性降低 (P<0 .0 5 ) ,TFPI抗原含量明显降低 (P<0 .0 5 ) ;血浆 F ∶ C显著增加 (P<0 .0 1) ,血浆 F ∶ C明显下降 (P<0 .0 5 ) ,F 活性显著增加(P<0 .0 1) ,Fbg的活性显著增加 (P<0 .0 1) ;AT 活性显著降低 (P<0 .0 1)。结论 :ACI的发生与组织因子途径的启动有关 ,在

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)对髓性白血病骨髓细胞黏附功能的影响及机制探讨

为了探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPIPLD)对髓性白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制,利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPIPLD活性,用1,10二氮杂菲抑制GPIPLD的活性,用MTT方法检测抑制组和非抑制组骨髓细胞对纤连蛋白的黏附率,用免疫组织化学方法检测GPI锚定蛋白CD24的表达。结果显示:1,10二氮杂菲(1mmol/L)作用骨髓单个核细胞5小时可使细胞的GPIPLD的活性由(42.08±7.21)%降为(5.4±2.96)%,GPIPLD活性被抑制后细胞的黏附率增加,由(49.78±26.73)%升为(61.19±29.14)%,与此同时,CD24的表达率上调,由(16.02±9.68)%升为(18.5±11.14)%。结论:降低GPIPLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤连蛋白的黏附率,与此同时,骨髓单个核细胞上GPI锚定蛋白CD24的表达增强。

异基因造血干细胞移植术后供体型复发及文献复习

目的 :提高对异基因造血干细胞移植术后供体型复发的认识水平 ,分析其发生原因。方法 :回顾性分析 2 0 0 1年 9月～ 2 0 0 3年 12月在我院行异基因造血干细胞移植术后供者复发 3例的移植前状态、治疗和预后。结果 :3例患者移植后全部重建造血 ,DNA序列分析表明 1个月内移植物植入 ,复发时嵌合体检查为完全供体型。结论 :移植前未达完全缓解 ,或反复复发的白血病患者移植后易复发 ;STR PCR结果显示 。

鲍氏威酸诱导急性早幼粒白血病细胞分化与PML/RARα关系的研究

目的:研究鲍氏威酸(BC4)诱导不同融合基因PML/RARα基因型的急性早幼粒白血病(APL)细胞分化的能力及对APL细胞分化相关基因c-myc的表达影响,探讨鲍氏威酸诱导分化作用的机制。方法:采用RT-PCR检测APL细胞PML/RARα的基因型;运用骨髓干、祖细胞集落培养技术分析各基因型APL细胞分别在生理盐水(NS)对照组,鲍氏威酸(BC4)组,全反式维甲酸(ATRA)组培养体系中增殖与分化能力,测定各组集落与丛的形成率,形态分化率,NBT还原率以及粒细胞吞噬率,培养前后各组APL细胞c-myc表达阳性率。结果:与NS对照比较,BC4和ATRA均使PML-RARα+组APL细胞丛形成率明显增高(P<0.01),而集落形成率无明显变化(P>0.05),3项细胞分化指标增高(0.01<P<0.05),c-myc表达阳性率降低(P<0.05);BC4对PML/RARα+(L型)诱导分化作用强于PML-RARα+(S型)APL,BC4对部分ATRA治疗后复发耐药病例有诱导分化能力。BC4及ATRA对PML/RARα-APL细胞的各项诱导分化指标无明显改变。结论:BC4对APL具有诱导分化作用,下调c-myc基因表达,其诱导分化能力与PML/RARα-基因型有关,并能诱导部分ATRA耐药细胞分化。

25例血小板无力症基础和临床分析

目的：探讨中国人血小板无力症患者的临床和病理特点。方法：分析了２５ 例血小板无力症的临床表现、代偿机制、实验室检查、分子基础、治疗和预防措施。结果：２５ 例血小板无力症患者Ⅰ型２０ 例，Ⅱ型２ 例，变异型３ 例，已鉴定出血小板膜糖蛋白ＧＰⅡｂ，Ⅲａ 基因６ 种类型分子缺陷，包括错义突变、无义突变、剪接点突变和小片段ＤＮＡ丢失。结论：出血症状严重程度和分子缺陷之间无明显关系。

凝血因子VR_2等位基因多态性在血栓相关性疾病患者中的分布

目的 :通过检测血栓相关性疾病患者的凝血因子V(coagulationfactorV)R2 等位基因多态性 ,探讨R2单体型与血栓形成的相关性。方法 :采用PCR 酶切法对 10 0个脑血栓患者 ,96个心肌梗塞患者 ,45个深静脉血栓患者 ,80个系统性红斑狼疮患者 ,以及 98个正常对照进行FVR2 等位基因检测。结果 :首次发现 2例系统性红斑狼疮患者基因型为R2 等位基因杂合子。结论 :中国汉族人群血栓形成的遗传分子背景与FVHR2 等位基因可能没有相关性。

STR分子标记的个体识别及其临床应用

目的 :建立一种简便易行、灵敏特异而且无同位素污染的个体识别方法。方法 :采用STR系统HUMCSF1PO、HUMTPOX、HUMTH0 1三位点多重PCR并银染检测技术分析无关个体、两代三口人家系、异基因造血干细胞移植 (Allo HSCT)前后供受者、母婴及脐血的DNA表型特征。结果 :无关个体极易区别 ;两代三口人家系符合孟德尔遗传规律 ;5例Allo HSCT后受者嵌合状态均可检测 ,均表现为完全嵌合 ;脐血与相应新生儿带型完全相同 ;敏感度测定可检出混合细胞群中 1%的微量细胞。结论 :STR系统HUMCSF1PO、HUMTPOX、HUMTH0 1三位点多重PCR并银染检测技术可用于个体识别、亲子鉴定、Allo HSCT后嵌合状态及脐血之母血污染的检测。

凝血酶原基因G20210 A多态性与心肌梗死和脑卒中的相关性

目的 :研究凝血酶原基因G2 0 2 10A(FⅡG2 0 2 10A)多态性在中国人群中的分布频率及其与急性心肌梗死和缺血性脑卒中之间的相关性。方法 :运用PCR、限制性内切酶消化及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法检测 173例缺血性脑卒中患者、97例急性心肌梗死患者及 10 7例正常人对照的FⅡG2 0 2 10A等位基因。结果 :未检出一例FⅡG2 0 2 10A基因突变者 ,提示被检病例及正常人FⅡG2 0 2 10A基因变异频率为 0。结论 :在中国人群中 ,FⅡG2 0 2 10A基因变异罕见甚至缺如。FⅡG2 0 2 10A基因多态性不足以成为中国人缺血性脑卒中与急性心肌梗死的危险因素。

急性心肌梗死患者凝血酶原基因G20210A变异频度分析

目的 :探讨FⅡG2 0 2 10A突变在中国人群中的分布频率及其与急性心肌梗塞之间的联系。方法 :运用FⅡG2 0 2 10A等位基因特异性引物PCR ,结合限制性内切酶技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法检测 97例急性心肌梗塞患者及 10 7例正常人对照的FⅡG2 0 2 10A基因频率。结果 :未检出 1例FⅡG2 0 2 10A基因突变者 ,提示被检病例及正常人FⅡG2 0 2 10A基因变异频率为 0。结论 :在中国人群中FⅡG2 0 2 10A基因变异罕见甚至缺如。FⅡG2 0 2 10A基因突变不足以成为中国人急性心肌梗塞的危险因素。

ABO血型不合的异基因造血干细胞移植——2例报告附文献复习

探讨ABO血型不合的异基因造血干细胞移植 (Allo -HSCT)的造血问题。方法 :对 2例患者分别进行异基因外周血造血干细胞移植 (Allo -PBSCT)及脐血造血干细胞移植 (CBSCT) ,用血细胞分离机或 6 %羟乙基淀粉去除移植物中的红细胞 ,定期检测受者血型 ,根据情况输注血细胞。结果 :2例患者全部获得造血重建 ,未出现溶血反应。结论 :ABO血型不合可以进行Allo -HSCT ,去除供者移植物中的红细胞能有效地防止急性溶血反应的发生 ,定期检测受者血型 ,及时调整输血方案有重要的临床意义。

αⅡbA477P(A446P)——发生于血小板无力症患者的新突变

【目的】明确血小板无力症患者的基因缺陷 ,为进一步探讨其发病机理奠定实验基础。【方法】通过 4 0对引物对GT 5 7的αⅡb和 β3亚基基因的所有 4 5个外显子及其剪接点进行了全长的PCR扩增 ,然后对PCR产物进行了SSCP 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,发现αⅡb基因的 14号和 15号外显子 (Exon14 /15 )的PCR扩增产物出现了异常条带 ,对外显子 14 /15的PCR产物进行了直接测序。【结果】αⅡb基因外显子 14发生了点突变G→C ,导致氨基酸密码由GCT→CCT ,该突变位于αⅡb亚基cDNA第 14 30个碱基 ,导致第 4 77( 4 4 6 )位氨基酸残基由丙氨酸转变成脯氨酸 [αⅡbA4 77P(A4 4 6P) ]。【结论】通过查阅文献资料 ,αⅡbA4 77P(A4 4 6P)

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文)

背景:据作者查新检索medline,cnki等数据库,鲜见国内外有关体外研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipaseD,GPI-PLD)对白血病细胞黏附功能影响方面的报道。目的:观察GPI-PLD对髓系白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2004-01/06在湘雅医院血液实验室完成。对象:骨髓标本来自于髓系白血病患者,由湘雅医院血液科提供。方法:利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶做底物,通过TX-114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPI-PLD活性,利用1,10-二氮杂菲抑制GPI-PLD的活性,实验分2组:处理组加二氮杂菲,使其终浓度为1mmol/L,对照组加入等量的PBS。用MTT方法检测处理组和对照组骨髓细胞对纤维连接蛋白的黏附率、免疫组织化学方法检测GPI-锚定蛋白CD24的表达。主要观察指标:髓系白血病细胞GPI-PLD活性,细胞黏附率及CD24的表达。结果:1mmol/L1,10-二氮杂菲作用髓系白血病骨髓单个核细胞5h细胞的GPI-PLD活性较对照组降低[(5.40±2.96)%,(42.08±7.21)%,P<0.01];GPI-PLD的活性被抑制后处理组细胞的黏附率较对照组增加[(61.19±29.14)%,(49.78±26.73)%,P<0.01],同时CD24的表达率上调[(18.5±11.14)%,(16.02±9.68),P<0.01]。结论:降低GPI-PLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤维连接蛋白的黏附率,同时骨髓单个核细胞上GPI-锚定蛋白CD24表达增强。

红细胞收缩:血小板无力症的可能代偿机制?

该文对２例Ⅰ型血小板无力症进行了１３年的临床观察。发现患者出血症状随年龄增长明显减轻，全血血块回缩（ＣＲ）也由初诊时的不良转变为良好。进一步研究发现：患者血小板ＣＲ仍有缺陷，Ｍｇ２＋对血小板ＣＲ缺陷无改善作用，但患者红细胞ＣＲ（分别为０．５２和０．６０）较正常（０．４０）好，将洗涤后的正常“Ｏ”型血红细胞分别悬浮在患者和正常新鲜血浆中所作的ＣＲ二者无区别，该研究表明：患者红细胞而不是血浆因素（纤维蛋白质）可能发挥了部份代偿全血ＣＲ的作用。

脐血造血干细胞移植治疗小儿慢性粒细胞白血病

目的 :研究脐血造血干细胞移植治疗小儿慢性粒细胞白血病的疗效及特点。方法 :给一例 12岁男性慢性粒细胞白血病慢性期的患儿移植HLA配型基本相合的同胞脐血。预处理选用BU CY方案 (马利兰 4mg·kg- 1 × 4d ,环磷酰胺 6 0mg·kg- 1 × 2d)。预防移植物抗宿主病 (GVHD)采用环孢霉素A(CsA)。移植有核细胞数为 2 0× 10 7·kg- 1 。结果 :移植后 2 2d(+2 2d)微卫星位点分析显示移植物植入成功 ,+2 5d骨髓显示造血开始重建 ,+42d中性粒细胞 >0 .5× 10 9·L- 1 ,+91dBCR ABL融合基因表达转阴 ,且受者血型由O型转为供者血型B型。随访 15 0d ,未发生急、慢性GVHD。结论 :脐血造血干细胞移植对小儿慢性粒细胞白血病有根治性治疗作用 ,它具有GVHD发生率低、程度较轻、重建造血慢等特点。