医学研究生科研文献阅读能力水平的提升策略研究

科研文献是国际上学术交流的重要媒介,也是重大研究成果传播的载体。医学研究发展迅速,现有医学教育教学实践已满足不了日益增长的知识需求。高效阅读科研文献是医学研究生掌握相关研究领域内最新研究进展,学习新技术、新理论,提升科研思维的重要手段。尚未开展科研任务的医学研究生在科研文献阅读方面缺乏经验,加之基础知识匮乏,普遍存在阅读较浅,抓不住文献主旨等情况。针对研究生教育中的这一问题,本文详细介绍了阅读科研文献的意义,医学研究生阅读科研文献存在的问题以及提高医学研究生科研文献阅读能力水平的事实策略。本文为研究生高效阅读科研文献提供了新的思路和建议,有助于引导学生高效全面掌握领域内的研究内容和最新动态,解决自身的科研问题和困惑,优化和推动自己的科研课题。

《结核病病理学诊断规范》团体标准解读

2023年12月25日,《T/CRHA 029—2023结核病病理学诊断规范》团体标准正式在全国团体标准平台发布,并于2024年1月1日起开始实施。本文就该标准核心要点进行解读,旨在帮助全国各级医疗机构病理相关医务人员掌握结核病病理学诊断依据,提高结核病病理学诊断水平。

非结核分枝杆菌肺病的临床病理特征及分子病理诊断

目的 分析非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床病理特征及分子病理诊断,提高病理医生的诊断及鉴别诊断能力。方法 回顾性分析2016年11月至2022年4月首都医科大学附属北京胸科医院收治的57例NTM肺病患者的临床病理资料,光镜下观察组织学形态,行抗酸染色法查找抗酸杆菌,并进一步应用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌(MTB)DNA和探针熔解曲线法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 57例NTM肺病的分枝杆菌菌种鉴定结果:胞内分枝杆菌23例,蟾蜍分枝杆菌14例,堪萨斯分枝杆菌8例,鸟分枝杆菌7例,脓肿分枝杆菌3例,龟分枝杆菌2例。27例手术标本组织学特征主要表现为典型肉芽肿伴坏死13例,不典型肉芽肿伴坏死8例,纤维包裹性坏死3例,支气管扩张2例,非坏死性肉芽肿1例,脓肿分枝杆菌感染灶可见小脓肿形成。57例标本抗酸染色均查找到抗酸杆菌。抗酸杆菌分布在坏死、纤维素样渗出及组织细胞胞质;胞内分枝杆菌较易形成菌团;堪萨斯分枝杆菌可见异型菌。FQ-PCR技术均未检测到MTB DNA。结论 NTM肺病的临床病理学特征表现多样,没有特异性,分子病理技术能够显著提高明确诊断率。

非妇科液基细胞学标本制作细胞蜡块的应用和体会

胸腹水细胞蜡块制作方法由来已久,对于不易获取组织标本的晚期肺癌患者,细胞蜡块的应用具有更重要的意义^([1])。常规采用将胸水离心后取沉渣直接包埋,制作蜡块,但是容易受血细胞过多等因素影响,造成检出率不高。液基细胞制片背景干净,细胞分布均匀,所以将液基制片后剩余标本制成细胞蜡块,进行切片,并根据需求联合免疫细胞化学染色进行诊断,是提高检出率的有效方法。

两种方法检测非小细胞肺癌组织中间变性淋巴瘤激酶融合基因的临床应用

目的探讨实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法与Ventana全自动免疫组化法(Ventana IHC)检测非小细胞肺癌组织中ALK融合基因在临床应用中的价值。方法RT-PCR方法和Ventana IHC方法对431例非小细胞肺癌标本进行ALK融合基因检测,结果比较采用卡方检验,分析两种检测方法的一致性。结果RT-PCR方法检测ALK融合基因阳性37例、阴性394例,检出率8.58%;Ventana IHC方法ALK蛋白阳性43例、阴性388例,检出率9.98%。两种检测结果有高度一致性(K=0.8898,P<0.001)。431例中有22例手术切除标本和小活检配对标本,两种检测方法对同一患者的配对标本检测结果一致。结论与RT-PCR法比较,Ventana IHC方法检测ALK融合蛋白检出率更高。在临床应用中,Ventana IHC方法和RT-PCR方法具有互补性。

基于深度学习模型的非小细胞肺癌新辅助免疫联合化疗疗效预测

目的:基于深度学习算法,使用临床数据构建人工智能(artificial intelligence,AI)模型,评估其预测非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)新辅助免疫联合化疗疗效的可行性。方法:收集2020年1月至2024年1月于首都医科大学附属北京胸科医院确诊且接受新辅助免疫联合化疗的132例NSCLC患者的临床病理数据。对影响新辅助免疫联合化疗疗效的主要因素进行统计学分析。根据统计学分析结果以及查阅相关文献对变量进行筛选,构建变量数据集。基于多层感知机(multi-layer perceptron,MLP)算法采用5折交叉验证建立深度学习模型,应用接收者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估模型性能。结果:132例患者中单因素分析显示获得主要病理缓解(major pathological response,MPR)组与未获得MPR组的患者在性别(P=0.020)、吸烟史(P=0.004)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)(P=0.038)及程序性死亡配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)是否≥1%(P=0.038)方面差异具有统计学意义;获得完全病理缓解(complete pathological response,pCR)组与未获pCR组患者在肿瘤大小是否≤3 cm(P=0.007)和CEA水平方面(P=0.010)差异具有统计学意义。经5折交叉验证后,MPR预测模型在验证集和测试集的平均受试者工作特征曲线下面积(area under the curve,AUC)值分别为0.72及0.71。结论:该深度学习模型能够有效预测NSCLC患者新辅助免疫联合化疗疗效。

课程思政融入结核病教学中的探索

结核病是一种古老的传染病,由结核分枝杆菌感染所引起,传染性强、发病率高。我国是结核病高负担国家,居全球第三位,防治形势严峻。结核病是国家重点控制的传染病,我国高度重视结核病防控工作,虽然结核病发病率和死亡率逐年稳步下降,但结核病并没有走远,仍然影响着人类健康。结核病涉及多个学科领域,是医学教育课程中的一个重要病种。课程思政的目的是把思想教育的理念融入常规教学中,使二者相互渗透,相互融合,旨在立德树人,培养医术高超和道德情操良好的医学生。在结核病教学中,把结核病领域的思政元素充分融入结核病的教育教学活动中,凸显爱国主义教育、职业素养教育和生命观教育,有助于解决高校结核病教学中思政教育与专业教学脱节现象,能提升学生道德情操和职业认同感、自豪感。

基于血浆cfDNA片段特征的癌症诊断技术研究进展

细胞游离DNA(cfDNA)为无创诊断肿瘤提供了一种有效的生物标志物。cfDNA片段化模式的研究被称为片段组学,现在是生物标志物研究的一个新兴的领域。cfDNA碎片化模式携带有关cfDNA分子组织起源的信息,来自癌细胞的片段特征与非癌细胞脱落的cfDNA片段特征显著不同,可以有效区分健康人群和癌症患者,减少患者创伤和经济负担。最近,这一领域有了更多深入的进展。本文介绍了几种cfDNA片段特征的生物学和临床研究,包括片段长度分布、末端基序、首选末端、锯齿状末端和核小体印记。总之,cfDNA片段组学为诊断癌症拓宽了研究视野。

胸腔积液不同类型标本用于非小细胞肺癌驱动基因检测的临床价值研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸腔积液上清、细胞沉淀、细胞蜡块用于驱动基因检测的准确性。方法回顾性纳入2021-01—2022-03首都医科大学附属北京胸科医院确诊并发胸腔积液且具有同期配对组织基因检测结果的NSCLC患者45例,采用蝎形探针扩增阻滞突变系统荧光定量PCR(ARMS-PCR)对患者胸腔积液上清、细胞沉淀和细胞蜡块进行肺癌靶基因变异检测。结果胸腔积液三种类型标本中共检出EGFR、KRAS、BRAF、MET、HER2、PIK3CA、ALK共7个基因变异。以组织基因检测结果为参考,胸腔积液上清总体变异检测敏感度为80.0%(24/30),特异度为93.3%(14/15),高于细胞沉淀和细胞蜡块。在DNA层面,胸腔积液上清核苷酸变异敏感度最高,为84.6%(22/26);对于RNA融合变异,上清与细胞蜡块敏感度一致,均为50.0%(2/4),高于细胞沉淀的25.0%(1/4)。胸腔积液细胞学结果对上清、细胞沉淀和细胞蜡块驱动基因总体变异、核苷酸变异检出有影响,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论晚期并发胸腔积液NSCLC患者在无法获取组织标本情况下,胸腔积液,尤其是上清标本是进行靶基因检测,有效指导临床治疗决策潜在优质标本类型。

非小细胞肺癌程序性死亡配体-1表达与临床病理特征和常见驱动基因变异的相关性研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者程序性死亡配体-1(PD-L1)表达与临床病理特征和常见驱动基因变异的相关性,为NSCLC患者免疫治疗提供理论依据。方法回顾性纳入首都医科大学附属北京胸科医院病理科2018年1月—2021年12月进行PD-L1免疫组织化学染色及EGFR、KRAS、ALK、ROS1、BRAF、RET、MET和HER2基因检测的NSCLC患者,分析不同病理特征与不同驱动基因变异对NSCLC患者PD-L1蛋白表达的影响。结果PD-L1蛋白表达检测2386例,阳性率为45.8%(1093/2386),其中低表达组(1%≤TPS≤49%)为62.0%(678/1093),高表达组(TPS≥50%)为38.0%(415/1093),不同临床病理特征PD-L1表达存在差异。多因素logistic回归分析显示吸烟史、淋巴结转移、病理亚型、EGFR突变、KRAS突变、ALK和MET突变是NSCLC患者PD-L1是否表达的独立危险因素(P<0.05),淋巴结转移和EGFR突变是NSCLC患者PD-L1表达水平的独立危险因素(P<0.05)。结论PD-L1蛋白在吸烟、鳞癌、KRAS突变型、ALK阳性和MET突变型患者中阳性率高,在淋巴结转移和EGFR野生型患者中高表达。区别于EGFR阳性的NSCLC患者,KRAS、MET阳性的NSCLC患者有望从免疫检查点抑制剂治疗中获益。

中国汉族人群Toll样受体2基因多态性与肺结核易感性之间关系

目的检测中国汉族人群特异TLR2基因多态性,并分析与结核病易感性之间关系。方法在小样本中测序检测TLR2基因中可能存在的基因多态性,再用连接酶特异检测技术在大样本进行SNP分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性之间相关性。结果共检测到6个基因多态性,它们在结核病患者与健康人之间等位基因、基因型以及单配体型上差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR2基因多态性并不是中国汉族人群结核病发病的重要危险因素。

40例肺结核患者病情进展中白细胞介素-8表达变化的初步研究

目的初步探索40例结核病患者外周血IL-8表达变化及其在肺结核病情进展中的表达变化。方法纳入对象为2011年5月至2013年2月首都医科大学附属北京胸科医院的40例初治肺结核患者，以同期本院15名健康体检者作为健康对照，并根据临床诊断信息对肺结核患者进行分组，将其中从诊断、治疗及治愈后复查阶段都拿到血液样品的8例肺结核患者，作治疗前后比较分析，纳人为跟踪调查组；按照细菌学及影像学检查结果，将另外32例分为病情缓和组（痰菌阴性、肺部无空洞，17例）与病情严重组（痰菌阳性、肺部有空洞，15例）。采集8例跟踪调查组患者治疗前、治疗中（治疗开始后2～3个月之间）和治疗结束后（停药后1～3个月之间）抗凝外周血；另外32例病情缓和组与病情严重组患者只收集治疗前抗凝外周血。加入结核分枝杆菌总蛋白刺激培养，再用酶联免疫吸附法检测血浆中的IL-8表达量。用SPSS17．0统计软件进行Mann-WhitneyU检验以分析健康对照组、病情缓和组及病情严重组患者之间IL-8表达是否存在差异，另外用Wilcoxon检验分析肺结核患者治疗前、治疗中及治疗后IL-8表达是否存在差异。1L-8检测数值用伍±s）表示，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果经刺激诱导过的外周血IL-8表达量在病情严重组[（176．7±133．2）ng／m1]及病情缓和组[（39．6±52．2）ng／m1]均显著高于健康对照组[（7．1±6．3）ng／m1]（U=5，P=0．000008；U=62，P=0．013）。并且病情严重组IL-8表达水平也显著高于病情缓和组（U=37，P=0．001）。另外，肺结核患者治愈后IL-8表达水平[（5．9±3．6）ng／ml]与治疗前[（34．9±33．7）ng／m1]和治疗中[（51．7±34．2）ng／m1]相比有显著的降低（Z=-2．240，P=0．025；Z-02．521，P=0．012）。结论IL-8表达水平与肺结核患者病情转归相关。

结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究

目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64、Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c,探讨3种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64、Rv1985c及其融合基因,并克隆到pET32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化,再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测3种抗原在血清及胸腔积液样本中的结核病诊断效率。结果 3种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样本中特异性IgG抗体检测结果显示,融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核的敏感性为87.1%和88.9%,特异性为75.6%;诊断结核性胸膜炎的敏感性为91.2%,特异性为84.6%,敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高(P﹤0.05)。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原,在结核病诊断中具有重要的研究价值。

结核病专业研究生科研能力培养的思考

结核病是重大的传染性疾病,中国疫情非常严重。结核病预防、诊断和治疗都面临着非常大的挑战,很多医学问题有待解决。结核病专业研究生的培养目的不应局限于熟练掌握临床技能,更应该把重点放在培养创新性科研能力上,为结核病专业提供复合型高素质医务人才。建议从发现临床科学问题、阅读文献和写作、设计科研课题、掌握基本实验原理和技能以及培养科研诚信等5个方面来加强培养结核病专业研究生的科研能力。

结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究

目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64，Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c，并探讨三种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64，Rv1985c及其融合基因，并克隆到pET32a（＋）表达载体，转化E．coli．BL21（DE3），经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化，再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测在血清（肺结核患者31例、肺外结核患者45例、健康人135例）及胸腔积液样本（结核性胸膜炎患者91例、肺癌性胸膜炎患者91例）中三种抗原的结核病诊断效率。结果三种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样品中特异性IgG抗体检测结果显示，融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核敏感性为87．1％和88．9％，诊断结核病的特异性为75．6％；诊断结核性胸膜炎敏感性为91．2％，特异性为84．6％，敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原，在结核病诊断研究中具有重要的研究价值。

重视分子病理诊断新技术提高结核病病理学诊断水平

中国是结核病高负担国家，在结核病诊断中面临很多问题。分析2018年WHO发布的全球结核病报告，中国结核病诊断在以下3个方面需要继续加强：（1）肺结核细菌学确诊率低，仅为31％，远低于世界平均水平57％；（2）耐药结核病发现率低，不到20％耐多药或利福平耐药患者被发现；（3）肺外结核发现率低，全球报告的结核病患者中15％为肺外结核，但中国报告的肺外结核患者仅占5％。

中国汉族人群Toll样受体2基因多态性与肺结核易感性之间关系

目的检测中国汉族人群特异TLR2基因多态性，并分析与结核病易感性之间关系。方法在小样本中测序检测TLR2基因中可能存在的基因多态性，再用连接酶特异检测技术在大样本进行SNP分型，并通过统计学方法分析基因多念件与结核病易感性之间相关性。结果共检测到6个基因多态性，它们在结核病患者与健康人之间等位基因、基因型以及单雕体型上差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TLR2基因多态性并不是中国汉族人群结核病发病的重要危险因素。

免疫组织化学及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值

目的探讨免疫组织化学（inn-nunohistochemislry，IHC）及PCR技术在淋巴结结核病理学诊断中的应用价值。方法收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科保存的2012年1月至2013年7月之间的48例手术根治切除淋巴结结核患者（结核组）和21例非淋巴结结核患者（非结核组）的石蜡包埋组织标本，分别应用IHC染色、荧光定量PCR和抗酸染色法对标本进行检测，以临床最后诊断为金标准，比较各方法的检测效能。结果IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色检测的敏感度分别为52．1％（25／48）、60．4％（29／48）及27．1％（13／48）；IHC染色和荧光定量PCR检测敏感度均高于抗酸染色，差异均有统计学意义（x^2值分别为6．27、10．84，P值分别为0．012、0．001）；而IHC染色与荧光定量PCR比较，敏感度差异无统计学意义（x^2=0．68，P=0．411）。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法检测非结核组结果均为阴性，特异度均为100％（21／21）。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法的阴性预测值分别为47．7％（21／44）、52．5％（21／40）、37．5％（21／56）；符合率分别为66．7％（46／69）、72．5％（50／69）、49．3％（34／69），IHC染色、荧光定量PCR均优于抗酸染色法。结论IHC染色、荧光定量PCR与抗酸染色法相比，可提高阳性检出率，在淋巴结结核的病理学诊断中具有良好应用价值。

内科胸腔镜活检在结核性胸膜炎诊断中的临床价值

目的探讨内科胸腔镜活检在结核性胸膜炎诊断中的临床价值。方法回顾性分析2014年4月至2017年4月首都医科大学附属北京胸科医院收治的55例因胸腔积液疑似结核性胸膜炎患者的临床资料，并对胸腔镜活检组织行常规石蜡包埋、切片、HE染色镜下观察组织学形态后，考虑为结核性胸膜炎的36例患者，行抗酸染色查找抗酸杆菌，及荧光定量聚合酶链式反应（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）技术检测结核分枝杆菌DNA对考虑为恶性胸膜肿瘤的19例患者采用免疫组织化学方法进行诊断及鉴别诊断。结果55例患者中，最终病理明确诊断为结核性胸膜炎36例（65．5％）。胸腔镜下表现为胸膜增厚23例（63．9％）；胸膜表面上分布大小不等灰白结节7例（19．4％）；粟粒样结节12例（33．3％）；纤维渗出、粘连及充血26例（72．2％）。病理组织学表现为朗汉斯（Langhans）巨细胞构成的肉芽肿27例（75．O％），肉芽肿中心可见坏死15例（41．7％）；仅见炎性渗出病变6例（16．7％）；仅见坏死3例（8．3％）。36例结核性胸膜炎患者中，32例检测了胸腔积液中腺苷脱氨酶（ADA）的含量，其中ADA≥40U／L者18例（56．2％）。抗酸染色查到抗酸杆菌11例（30．6％），FQ-PCR技术检测结核分枝杆菌DNA阳性25例（69．4％）。其余19例通过活检一病理学检查分别诊断为肺腺癌转移9例（16．4％），间皮瘤8例（14．5％），鳞状细胞癌转移1例（1．8％），肾集合管癌转移1例（I．8％）。结论内科胸腔镜检查及活检一病理学诊断在结核性胸膜炎诊断及鉴别诊断中具有重要价值。

荧光定量PCR技术在骨关节结核石蜡包埋标本检测中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQPCR）在骨关节结核石蜡包埋标本病理诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法搜集2014年10月至2015年4月首都医科大学附属北京胸科医院病理科诊断形态学符合结核的93例患者的石蜡包埋标本，12例骨肿瘤患者的石蜡包埋标本。所有标本以FQ-PCR技术检测结核分枝杆菌DNA，以抗酸染色法查找抗酸杆菌。以卡方检验分析实验数据，比较FQ-PCR技术与传统抗酸染色法在骨关节结核诊断中的敏感度和特异度；观察不同发病部位与两种技术检测阳性率之间的相关性；以PCR-反向点杂交法对7例结核分枝杆菌DNA阴性而抗酸染色阳性患者进行非结核分枝杆菌检测。结果所有93例骨关节结核标本中FQPCR技术检测阳性77例，敏感度82．8％；抗酸染色查到抗酸杆菌64例，敏感度68．8％。FQ-PCR技术检测敏感度明显高于抗酸染色法（X2=5．659，P=0．021）。在不同发病部位FQ-PCR技术敏感度均高于抗酸染色法：在脊柱病变FQ-PCR技术和抗酸染色法阳性率分别为84．0％（42／50）和64．0％（32／50）（X2=0．009，P=0．609）；在外周骨关节病变FQ-PCR技术和抗酸染色法阳性率分别为81．4％（35／43）和74．4％（32／43）（X2=12．609，P=0．002）。PCR-反向点杂交法检测确定戈登分枝杆菌1例。结论FQ-PCR技术较抗酸染色法显著提高了结核分枝杆菌阳性检出率，并为进一步检测非结核分枝杆菌做出重要提示，FQ-PCR技术在骨关节结核石蜡包埋标本检测中具有良好的应用价值。