VEGF受体Flt-1在大肠杆菌中的高效融合表达

鉴于Flt 1在肿瘤及其他由于病理血管生成而导致的多种疾病中的核心作用和分子标记作用 ,本文通过PCR扩增出的VEGF受体Flt 1N端 1～ 3个IgG样loop基因 ,经过基因重组实现了Flt 1在原核表达体系 5X 1的融合表达。

幽门螺杆菌口腔定植和胃肠疾病的关联性研究

目的分析口腔中幽门螺杆菌(H.pylori)的定植与胃肠疾病的关联性。方法采用细菌培养法,对173名胃肠疾病患者的唾液标本进行H.pylori检测,同时根据年龄、性别、胃肠疾病类型和牙周状况分组,分析不同组别H.pylori检测结果的差异性。结果胃肠疾病患者口腔唾液中H.pylori阳性率为40.46%。其中,男性高于女性(P<0.05);45～64岁年龄组H.pylori阳性率为56.72%,明显高于2个低年龄组(P<0.05);萎缩性胃炎组H.pylori阳性率为77.78%,与消化性溃疡组和浅表性胃炎组相比差异有统计学意义(P<0.05);牙周健康组和牙周袋组的H.pylori阳性率分别为15.38%、72.73%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 H.pylori在口腔中是一种条件致病菌,口腔中H.pylori检出率与牙周疾病的严重程度呈正相关,胃肠疾病患者口腔中H.pylori检出率与胃肠疾病的类型密切相关,不良牙周健康状况可能是胃肠疾病发生及复发的重要因素之一。

少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建

目的克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的引物,从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RT-PCR法克隆eda-A1(M/W)基因cDNA序列;并运用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1(-)载体和eda-A1基因片段,将eda-A1(M/W)插入到pcDNA3.1(-)载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1(-)-eda-A1-M和pcDNA3.1(-)-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1(-)-eda-A1-W/M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因(突变型和野生型)真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。

HIF-1α、PTEN和P53在大肠癌中的表达和意义及其相关性的研究

目的探讨HIF-1α在大肠癌发生、发展中的作用以及抑癌基因PTEN、P53与HIF-1α的相关性。方法采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织标本和相应的癌旁正常黏膜组织中HIF-1αmRNA,PTENmRNA,P53mRNA的表达,并分析其相互关系。结果HIF-1αmRNA在大肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织中的表达水平(t=12.47,P=0.00);HIF-1αmRNA的表达水平与肿瘤部位(t=0.05,P=0.96)性别无关(t=-0.37,P=0.72);而与Dukes分期呈正相关(t=6.43,P=0.00);PTENmRNA,P53mRNA在大肠癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织;HIF-1α和抑癌基因PTEN、P53之间表现出一定程度的负相关。结论HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展及浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌中抑癌基因PTEN、P53的缺失突变可致HIF-1α表达水平增高。

老年人龋坏组织中变形链球菌和乳酸杆菌的致龋特点

目的探讨老年人龋坏组织中变形链球菌(MS)和乳酸杆菌(LB)在致龋过程中的特点。方法136例龋坏组织样本按患者年龄、患牙龋坏程度和龋坏活跃性分组,利用选择性培养基对MS及LB行分离、培养和鉴定。统计两种细菌在不同组别中细菌菌落形成单位(CFU)计数及两种细菌致龋样本例数。结果在老年龋组、严重龋组(中、深龋)和活动期龋组中,MS与LB的CFU计数均显著升高(均P<0.05);MS与LB共同致龋样本数在老年龋组中显著升高(P<0.05),并随龋坏程度的加重而升高(P<0.05)。结论在老年龋病及中、深龋中,MS与LB为互生关系,有明显共同致龋作用。

黄芪浸出液对致龋菌的体外抑菌实验

选择甘肃产黄芪为原料,制成水浸出液,研究其对口腔常见致龋菌的抑制效果,并与国外致龋菌抑菌产品(MI)进行比较。以变形链球菌、乳酸杆菌为实验菌株,用选择性培养基进行液体培养,在培养基中添加不等量的药物,测培养24h后菌液的A值、pH值;用SPSS13.0对数据进行统计分析。黄芪浸出液对变形链球菌、乳酸杆菌的生长、产酸均有抑制效果,抗菌效果与MI相当。

大肠癌中VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达对HIF-1α蛋白水平的影响

目的:检测大肠癌中VHLmRNA,FIH-1mRNA以及HIF-1α蛋白的表达,探讨VHL,FIH-1对HIF-1α蛋白水平的影响.方法:采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在大肠癌和癌旁正常组织中的表达,Spearman相关关系检验分析其之间的相关性.结果:大肠癌组织VHLmRNA和FIH-1mRNA的表达水平显著低于癌旁正常组织(t=-10.14,P=0.00;t=-15.26,P=0.00);二者的表达水平随Dukes分期而降低,DukesA+B期显著高于DukesC+D期(t=2.84,P=0.01;t=-5.13,P=0.00);它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关.大肠癌组织HIF-1α蛋白表达阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性;DukesC+D期(80.0%,24/30)显著高于DukesA+B期(41.7%,5/12),(t=5.89,P=0.02);Spearman相关分析显示,HIF-1α表达水平与VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达水平显著负相关(rs=-0.97,P=0.01,rs=-0.66,P=0.01).结论:HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展、浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌组织中VHL以及FIH-1的水平下降与HIF-1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.

PBRM1和P53在子宫内膜癌的表达及临床意义研究

目的:探讨PBRM1和抑癌基因(P53)在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法:应用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法对105例子宫内膜癌组织及癌旁正常组织(对照组)进行PBRM1和P53mRNA和蛋白表达水平的检测,结果:子宫内膜癌组织PBRM1mRNA及P53 mRNA表达阳性率分别为71.43%、81.90%,对照组分别为28.57%、18.10%,子宫内膜癌组织表达高于对照组(P<0.01)。子宫内膜癌组织PBRM1和P53蛋白表达阳性率分别为62.86%和46.67%,对照组分别为45.71%和7.62%,子宫内膜癌组织表达高于对照组(P<0.05)。PBRM1和P53蛋白阳性表达与组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、病理分级、临床TNM分期有关(P<0.05)。PBRM1和P53的表达呈正相关(r=0.205,P<0.05)。结论:PBRM1和P53在子宫内膜癌的表达增高,其表达水平随着子宫内膜癌组织的病理分级和临床分期的增高而增高,可能与肿瘤的生物学行为有一定关系,且两者可能有协同作用。

白假丝酵母菌对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞增殖的诱导作用

目的研究白假丝酵母菌(S.albicans)对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养ECV304,实验分为S.albicans上清液组、S.albicans灭活菌液组、上清液和灭活菌液混合组、对照组。采用MTT法、细胞计数法、倒置显微镜及流式细胞术分别观察各组对ECV304细胞增殖及细胞周期的影响。结果在不同浓度、不同时间的培养条件下,4倍稀释的S.albicans上清液在培养48 h能显著促进细胞增殖;倒置显微镜观察发现4倍稀释的S.albicans上清液实验组细胞密度明显增高;上清液和灭活菌液分别作用细胞40h后,上清液组细胞S期、G2/M期所占百分比显著升高,增殖指数(PI)增高,与对照组相比,有显著性差异(P<0.05)。而灭活菌液组的PI值无显著性差异(P>0.05)。结论 S.albicans的代谢产物可引起ECV304细胞的增殖。

兰州市母婴间念珠菌传播的流行病学研究

目的:调查兰州市产妇念珠菌的定殖以及母婴间念珠菌的传播状况。方法:采集产妇的阴道分泌物及口腔分泌物样本(共104×2例),及其新生婴儿的口腔分泌物样本(共104例)。采用CHROMagar念珠菌显色培养基进行培养、分离及鉴定,同时应用分子生物学技术对结果进行验证鉴定。结果:312例样本(母亲104×2,新生儿104)中81例分离培养出念珠菌,产妇阴道念珠菌检测阳性率39.42%(41例),产妇口腔念珠菌阳性率33.65%(35例),其中21.15%(22例)阴道与口腔同时阳性;新生儿口腔念珠菌培养阳性率为4.81%(5例)。检出阳性样本中菌种分布为,白色念珠菌53株,光滑念珠菌33株,克柔念珠菌2株,热带念珠菌1株。有2对母婴同时分离出白色念珠菌,经PCR检测,其基因型相同。结论:兰州市新生儿念珠菌检出率以及母婴间念珠菌的传播率较其他地区高。新生儿念珠菌感染与念珠菌的水平传播和垂直传播都相关。监控医院内念珠菌的传播及预防母亲产前阴道念珠菌感染可减少新生儿念珠菌感染的可能性。

宫腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达及意义

目的采用实时荧光定量PCR法检测p53、ki-67、bcl-2、bax基因在子宫内膜癌及正常人宫腔脱落细胞中的表达变化水平,探讨宫腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达变化在子宫内膜癌早期诊断中的意义。方法收集健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞样本共90例;提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测目的基因的表达变化水平;所有实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果荧光定量PCR结果显示,p53基因在正常人宫腔脱落细胞中未检测到表达,随着恶性程度升高,表达量显著升高(P<0.01),ki-67的表达在正常人中表达量最低,随着恶性程度升高,表达量逐渐升高(P<0.05),bcl-2基因的表达逐渐降低(P<0.05),bax/bcl-2值随着恶性程度增高而降低。结论 p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达量在子宫内膜癌发生发展过程中呈一定的变化趋势,提示p53、ki-67、bcl-2、bax基因可作为子宫内膜癌早期诊断的分子标志物。

兰州市自然人群口腔变形链球菌的分布

目的:调查兰州市自然人群口腔唾液中变形链球菌(Mutans Streptococci,MS)的分布情况,为口腔保健以及龋病防治提供基础资料。方法:用含漱法对兰州市城乡常住人口942例取唾液样本,根据有无龋病,年龄,性别,城乡进行分组。采用轻唾选择培养基和Dentocult SM培养法,结合显微镜观察法,对MS进行培养检测,分析不同组别MS检测结果的差异。结果:唾液中MS阳性检出率74.63%(703/942),男性MS阳性检出率80.36%(401/499)高于女性MS阳性检出率67.44%(292/433)(P<0.05);龋病组MS阳性率98.49%(456/463)高于无龋病组51.57%(247/479)(P<0.01);残冠残根组MS的阳性检出率100%(82/82)高于牙釉质龋组,牙本质浅龋组和牙本质深龋组(P<0.05);农村组MS阳性检出率79.37%(350/441)高于城市组71.66%(359/501)(P<0.05);35～44岁年龄组MS阳性率为89.32%(209/234)高于18～34岁组,45～64岁组及65～75岁组(P<0.05)。结论:口腔中MS检出率与龋病的严重程度呈正相关;农村人群,男性以及中年人(35～44岁)的龋病发病率和MS阳性检出率高于其它组。

木糖醇对口腔假丝酵母菌体外增殖及产酸的影响

目的初步研究木糖醇对口腔假丝酵母菌体外增殖及产酸的影响,寻求新的预防口腔假丝酵母菌感染的方法。方法对100例戴义齿患者的唾液样本进行假丝酵母菌的培养鉴定及分离纯化后,观察4种常见致病性假丝酵母菌(白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌)在不同比例木糖醇替代葡萄糖(葡萄糖∶木糖醇比例分别为4∶1、3∶2、2∶3、1∶4和0∶5)沙氏培养液中的增殖和产酸情况,了解木糖醇对不同假丝酵母菌生长增殖的抑制作用;并在有氧和缺氧条件下,比较白假丝酵母菌在含不同浓度(0%、5%、10%、15%、20%)的木糖醇培养液中培养6、12、24、48和72h后木糖醇对白假丝酵母菌增殖与产酸抑制作用的差异。结果与含葡萄糖和木糖醇的培养液相比,仅含木糖醇的培养液中,4种假丝酵母菌的D600值均降低,而pH值均升高(P<0.05)。与不含木糖醇的培养液相比,在有氧条件下,除含5%木糖醇48h的pH值和D600值、10%木糖醇48h的D600值、5%木糖醇72h的D600值变化不显著外,其余各时间点含不同浓度木糖醇的白假丝酵母菌培养液D600值均降低,pH值均升高(P<0.05),而在缺氧条件下,各时间点的白假丝酵母菌培养液D600值均升高,pH值均降低(P<0.05)。结论木糖醇对4种常见致病性假丝酵母菌的增殖和产酸都有明显的抑制作用,提示木糖醇作为糖替代品和致病性假丝酵母菌抑制剂,在口腔疾病的预防与保健中将发挥重要作用。

膀胱移行细胞癌中DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2和hMSH3启动子区甲基化状态研究

目的探讨DNA错配修复基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达。方法应用MSP技术检测膀BTCC中hMLH1、hMSH2和hMSH3基因启动子区甲基化状态,RT-PCR法检测其mRNA表达水平。结果36例BTCC组织中hMSH1、hMSH2的甲基化阳性率分别为38.9%(14/36)、52.8%(19/36),所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。hMLH1、hMSH2、hMSH3 mRNA在BTCC中表达率分别为47.2%(17/36)、38.9%(14/36)、16.7%(6/36),在正常组织中分别为22.2%(8/36)、63.9%(23/36)、0%(0/36),差异均有统计学意义(P<0.01),并且随肿瘤病理分级的增加呈下降趋势(P<0.05),均与临床分期不相关(P>0.05)。结论hMLH1、hMSH2和hMSH3基因启动子异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA表达减少甚至缺失,这可能是导致BTCC发生、发展的原因之一。

FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的构建脑脂肪酸结合蛋白(BLBP/B-FABP,FABP7)基因的真核表达载体,并检测其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法采用逆转录方法从星型细胞瘤组织中扩增FABP7基因,双酶切后插入线性化的pcDNA3.1载体真核启动子下游,构建重组真核表达载体,转染人乳腺癌细胞MCF-7后,采用半定量RT-PCR检测FABP7基因mRNA的表达,MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的周期变化情况,并对细胞进行计数。结果FABP7基因重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染MCF-7细胞后48、72和96h,pcDNA3.1-FABP7组的细胞数和细胞的A490值均比pcDNA3.1空质粒组明显降低,G1期细胞百分含量均明显升高。结论已成功构建了FABP7基因的真核表达载体,该载体可抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖。

子宫内膜癌组织病理相关蛋白表达水平的研究进展

子宫内膜癌（endometrial carcinoma,EC）是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一,全球每年约有14.2万例妇女患EC,4.2万人死于该疾病[1]。EC根据性激素的依赖关系又可以分成Ⅰ型和Ⅱ型,前者是雌激素依赖性肿瘤,指子宫内膜腺癌;后者是非雌激素依赖型,指子宫内膜浆液性腺癌（UPSC）,透明细胞癌,未分化癌和鳞状细胞癌。癌是一种基因性疾病,常伴随多个癌基因、抑癌基因的异常表达,多个因素在不同的水平相互作用,共同影响子宫内膜癌的发生,发展及预后。本文就EC病理相关蛋白在调控水平研究进展作一综述。

应用PCR技术快速检测口腔念珠菌菌株

目的:本研究将PCR技术应用于口腔念珠菌检测中,寻找出一种能够快速、准确、有效检测口腔念珠菌的方法。方法:收集口腔临床唾液样本100例,科玛嘉显色培养基进行培养,同时应用PCR方法对100例临床样本进行检测鉴定。结果:传统念珠菌培养方法的检出率为35%;应用两对引物,PCR方法的检出率分别为68%和49%。传统的念珠菌检测方法耗时长,特别是培养法,需时48hrs;应用PCR方法对念珠菌进行检测,只需要5hrs,且阳性检出率和准确性较高。结论:PCR方法快速敏感、特异性高,相较于念珠菌传统培养方法,是一种更加简便理想的检测方法。

兰州地区唾液幽门螺杆菌感染状况分析

目的： 分析兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的感染状况，为防治幽门螺杆菌提供科学依据。方法 收集兰州地区941例患者的唾液标本进行幽门螺杆菌的细菌学培养，并进行革兰染色镜检及生化特性鉴定。对不同口腔卫生情况、口腔疾病、性别、城乡、年龄段患者的唾液幽门螺杆菌感染率及生长情况进行分析。结果 兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的阳性率为42.72%。不同口腔卫生和口腔疾病情况下，患者唾液幽门螺杆菌的阳性率均存在统计学差异（P＆lt;0.05）。男性与女性的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为38.45%、47.89%，女性阳性率高于男性（P=0.004，χ2=8.492）；城市、农村人群的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为33.99%、50.93%，农村人群的阳性率高于城市人群（P=0.000，χ2=27.551）。10~59岁各年龄段唾液幽门螺杆菌阳性率基本上变化不大，呈平坦趋势，60岁之后呈上升趋势。不同年龄段唾液幽门螺杆菌生长量无统计学差异（P=0.086）。结论 兰州地区人群的唾液幽门螺杆菌阳性率与其口腔卫生、口腔疾病、性别、年龄及生活环境等均相关。

WHHL家兔在心血管疾病研究的应用

遗传性高血脂(WHHL)家兔为单基因隐性突变,造成细胞膜低密度脂蛋白受体缺乏,引起肝脏对低密度脂蛋白的清除延迟,血浆胆固醇水平升高,能够自发形成高胆固醇血症。在此基础上,经过选择性培育,选择出易发生冠状动脉粥样硬化的WHHL家兔,其血浆低密度脂蛋白水平更高,并形成了与人类相似的典型的冠状动脉粥样斑块;WHHL家兔形成易损斑块发生致命性的心肌梗死〔1〕,此家兔为WHHLMI家兔。

磷酸酶基因CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨磷酸酶基因(PTEN)CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测32例BTCC和癌旁正常组织标本中PTEN基因启动子区甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达水平。结果PTEN基因在BTCC组织中甲基化率为65.6%,随着肿瘤分级、分期的增加,甲基化水平逐渐升高,而在正常膀胱组织中未发现甲基化。PTEN mRNA和蛋白表达在正常组织和BTCC组织中分别为93.8%、62.5%和15.6%、6.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。在21例启动子异常甲基化的BTCC组织标本中,19例伴有PTEN基因表达缺失或下调,两者之间存在明显负相关(r=-0.564,P<0.01)。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少甚至缺失,是膀胱癌发生、发展的原因之一。