LH在多囊卵巢综合征患者行IVF-ET中的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的内分泌紊乱性疾病,常发生在育龄期女性中。PCOS可以引起排卵障碍、卵巢多囊样改变等,是女性不孕的主要原因之一,严重影响女性的生殖健康。PCOS患者主要通过促排卵治疗,而对于反复促排卵失败的患者,往往需要辅助生殖技术助孕治疗。黄体生成素(LH)可以调节卵泡发育,促进卵子成熟,是衡量卵巢功能的重要指标。现就LH在PCOS患者行体外受精–胚胎移植(IVF-ET)中的应用作一综述。

Kallistatin基因在大鼠阴茎海绵体中的表达研究

目的:探讨人组织激肽释放酶结合蛋白(kallistatin)在阴茎海绵体中的表达情况,为勃起功能调控和ED治疗寻找新的分子靶点。方法:采用qRT-PCR、Western印迹和免疫荧光技术检测kallistatin在大鼠阴茎海绵体组织的表达情况,同时检测主动脉中的表达水平进行对照。结果:qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,Kallistatin mRNA和蛋白在大鼠阴茎海绵体组织中均有表达,且其表达水平与主动脉相比均无统计学差异(P>0.05);免疫荧光检测显示,Kallistatin表达于阴茎海绵体内皮细胞和平滑肌细胞,且定位于细胞胞质,与主动脉相比,两者间表达亦无明显差异(P>0.05)。结论:Kallistatin基因高表达于阴茎海绵体且定位于海绵体内皮细胞和平滑肌细胞内,提示kallistatin可能在海绵体内皮细胞和平滑肌细胞的细胞功能中发挥作用,从而参与阴茎勃起功能调控。

乙型肝炎病毒在人类早期胚胎中的垂直传播

目的检测合并乙型肝炎病毒(HBV)感染的不孕不育症患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)及衍生技术助孕后子代早期胚胎中HBV表达情况,为HBV经人类生殖细胞垂直传播子代提供可靠证据.方法收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF-ET助孕的61对HBV感染不孕症夫妇患者废弃的早期胚胎,通过单细胞扩增技术获得全基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测HBV-DNA及HBV共价闭合环状DNA(HBV-ccc DNA)在早期胚胎中的表达情况.结果无论母方或父方或夫妻双方HBV感染患者的子代早期胚胎中均可检测到HBV-DNA和HBV-ccc DNA表达阳性,且HBV-DNA在母方、父方和夫妻双方HBV感染患者的子代早期胚胎中的阳性检出率分别为78.9%、76.3%和100%,而HBV-ccc DNA阳性检出率分别为63.2%、78.9%和100%,其中HBV-DNA和HBV-ccc DNA阳性检出率在母方和父方合并HBV感染2组间均差异无统计学意义(P>0.05),但夫妻双方均合并HBV感染则阳性检出率显著增高(P<0.05).结论对于行IVF-ET助孕的HBV感染患者,HBV可通过母源性和父源性垂直传播至子代早期胚胎,且夫妻双方同时合并HBV感染的垂直传播风险显著增加,为HBV经人类生殖细胞垂直传播子代提供了可靠证据.

干细胞治疗薄型子宫内膜的研究进展

薄型子宫内膜阻碍受精卵在子宫内膜着床和发育,已成为严重影响成年女性生殖健康和困扰临床医师的顽疾之一。目前,临床上治疗薄型子宫内膜的方法较多,但疗效欠佳。干细胞具有无限自我更新和增殖分化为多种细胞类型的能力,包括骨髓间充质干细胞、子宫内膜干细胞、胚胎干细胞以及诱导多能干细胞等。干细胞可以定向诱导为子宫内膜细胞,而干细胞移植治疗既可改善薄型子宫内膜的子宫内膜厚度,又可改善子宫内膜容受性,在薄型子宫内膜治疗方面有巨大的应用潜能。

盐酸贝那普利对TGF-β1诱导的子宫内膜上皮及间质细胞纤维化的保护作用研究

目的探索盐酸贝那普利对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人子宫内膜上皮及间质细胞纤维化的保护作用及其可能机制。方法将人子宫内膜上皮细胞(AN3CA)及人子宫内膜间质细胞(hESC)用TGF-β1诱导纤维化。分为对照组、实验组(TGF-β15 ng/ml处理)、BNPL5组(TGF-β15 ng/ml+盐酸贝那普利5μmol/L处理)和BNPL8组(TGF-β15 ng/ml+盐酸贝那普利8μmol/L处理),AN3CA细胞共培养48 h,hESC细胞共培养72 h,镜下观察细胞形态,CellTiter-Glo检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测相应纤维化蛋白。结果盐酸贝那普利可部分逆转TGF-β1对AN3CA细胞的形态学改变,hESC细胞经过TGF-β1处理后形态无明显变化;促进TGF-β1诱导后的AN3CA细胞的增殖活力,降低AN3CA细胞凋亡水平(实验组:12.11±0.465,BNPL8组:7.68±0.818,P<0.001);抑制TGF-β1诱导后的hESC细胞的增殖活力,促进其细胞凋亡(实验组:7.553±0.688,BNPL8组:11.047±0.118,P=0.016);盐酸贝那普利诱导后AN3CA及hESC细胞相关纤维化因子Fibronectin、TGF-β1、smad3的表达均有下降。结论盐酸贝那普利可以改善TGF-β1诱导的子宫内膜上皮及间质细胞的纤维化改变。

孕激素抵抗在不孕症发生发展中作用的研究进展

子宫内膜容受性对成功受孕至关重要,而孕激素抵抗可降低子宫内膜容受性,影响胚胎种植,引起不孕、胚胎反复种植失败、自然流产等不良生殖结局,其已成为部分育龄期女性孕激素治疗失败导致不孕的主要原因之一。孕激素抵抗常与子宫内膜异位症(EMT)、多囊卵巢综合征(PCOS)、子宫内膜异常增生共存。在EMT中孕激素抵抗可能与炎症因子过度表达、微小RNA的差异性表达及DNA甲基化有关;在PCOS中孕激素抵抗可能与白血病抑制因子、同源盒基因-A10及叉头框转录因子O1表达降低有关;在子宫内膜异常增生中孕激素抵抗可能与有丝分裂诱导基因6表达降低、TGF-β/Smad2/Smad3信号通路异常有关。

FOXP1在卵巢癌中的作用及其机制

卵巢癌缺少早期诊断方法,而晚期患者通过肿瘤细胞减灭术和基础化疗等传统治疗方案后易复发,因此从卵巢癌发生发展的分子机制探索新的分子标志物和治疗靶点意义重大。Forkhead Box P1 (FOXP1)作为转录因子密切参与卵巢癌的发生发展进程,近些年的研究表明,高表达的FOXP1通过促进上皮–间充质转化、调节肿瘤干细胞特性、调控多种分子信号转导通路等机制影响卵巢癌细胞增殖、转移、侵袭和化疗抗性。本文通过简要论述转录因子FOXP1在卵巢癌中的作用及其机制研究的最新进展,旨在为卵巢癌早期诊断和临床治疗寻找新的分子靶标。

卵胞浆内单精子显微注射技术对子代表观遗传学的影响

目前,辅助生殖技术(ART)是能够使不育不孕患者可以生育的唯一方法。其中,卵胞浆内单精子显微注射技术(ICSI)已成为ART中治疗男性不育的理想方法之一。虽然ICSI在临床上成功率较高,但ICSI子代的出生缺陷风险明显增加。ICSI出生子代表观遗传学异常,其中子代印迹基因GTL2、h19、胰岛素样生长因子Ⅱ、印迹控制区1甲基化异常、出现低体重及部分出现先天畸形都可能与ICSI有关,导致ICSI的出生子代携带缺陷基因或者患有疾病。另外,有表观遗传缺陷的父母进行ICSI也会导致子代表观遗传学发生改变。

kallistatin表达水平与男性生精功能障碍的关系及其初步机制研究

目的:探索kallistatin基因在男性生精功能中的作用及其可能的作用机制,为临床治疗生精功能障碍提供新的思路。方法:收集诊断为少精子症、非梗阻性无精子症患者和正常男性的精液样本以及睾丸穿刺术后的睾丸组织。首先,检测患者精浆中kallistatin表达水平差异;然后,检测睾丸组织中kallistatin、KLK1、B2R、Bcl-2、casepase-3、Bax等分子在mRNA和蛋白水平的表达情况;其次,通过Johnsen评分观察睾丸生精功能、Masson染色及天狼猩红染色检测睾丸组织间质纤维化水平;最后,通过相关性分析评价kallistatin表达水平与睾丸生精功能、细胞凋亡水平和组织纤维化的关系。结果:kallistatin高表达于精浆和睾丸组织中,与正常男性相比,非梗阻性无精子症及少精子症患者精浆中的kallistatin水平明显降低(P<0.05);少精子症组与非梗阻性无精子症组患者睾丸组织中kallistatin、KLK1、B2R表达水平显著低于正常对照组(P<0.01),而正常组、少精子症组及非梗阻性无精子症组各组内kallistatin、KLK1两者表达未见明显差异(P>0.05)。少精子症及非梗阻性无精子症组患者睾丸组织中Bcl-2表达水平显著低于正常组(P<0.01),而Bax及Casepase-3表达水平明显高于正常组(P<0.01),凋亡水平与kallistatin表达水平呈负相关趋势。Masson染色和天狼猩红染色结果显示,非梗阻性无精子症及少精子症患者睾丸组织中的纤维化水平及I/III型胶原纤维比例显著增加,非梗阻性无精子症组增加程度高于少精子症患者。结论:kallistatin表达水平降低可能与睾丸生精功能障碍有关,并且其可能通过调控睾丸组织中细胞凋亡水平、纤维化水平对生精功能发挥调控作用,具体机制有待进一步研究证实。

男性特发性低促性腺激素型性腺功能减退症的诊治分析

目的探讨男性特发性低促性腺激素型性腺功能减退症（idiopathic hypogonadotropic hypogonadism，IHH）的临床特点及诊治效果。方法回顾性分析2004年12月至2010年8月收治男性IHH患者92例资料，患者年龄（21．04-3．2）岁。伴有嗅觉减退或缺失（卡尔曼综合征，KS）52例，表现为部分青春期发育47例，无明显青春期发育45例，男性乳腺发育3例，单侧隐睾15例，双侧隐睾5例。92例染色体核型均为46，XY。血清甲状腺、肾上腺功能及糖脂代谢检测正常；92例患者血清黄体生成素（0．7±0．3）U／L，卵泡刺激素（0．8±0．4）U／L，睾酮（0．8±0．1）nmol／L，均低于正常值；6例行骨龄测定5例落后于实际年龄1—5年；头颅MRI检查显示52例KS患者均存在嗅球或嗅沟缺失或发育不良；92例患者均无下丘脑一垂体区占位性器质性病变。分别行绒毛膜促性腺激素（HCG，2000U肌内注射，1周2次）加或不加雄激素（十一酸睾酮40mg口服，2次／d）替代疗法，疗程1—5年，每3—6个月随访1次。结果92例治疗后均有明显的第二性征发育，性功能改善，治疗后血清睾酮水平为（11．0±0．8）nmol／L，与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）。3例结婚，性功能评价正常，1例生育。结论根据第二性征发育异常患者合并的各种先天异常、病史、体格检查、染色体核型分析、性激素水平、MRI等可进行IHH的诊断与鉴别诊断，雄激素与HCG替代疗法是治疗该病的有效方法。

氯甲基苯甲酰氨和5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷标记示踪大鼠脂肪干细胞的研究

目的比较研究氯甲基苯甲酰氨（CM-Dil）和5-乙炔基-2＇-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）的体外标记示踪效果，为ADSCs移植治疗勃起功能障碍体内研究寻找最佳的干细胞示踪剂。方法分离和培养sD大鼠ADSCs，分别采用10μmol／LCM-Dil荧光活性染料和50μmol／LEdU标记第4代ADSCs，并通过流式细胞术和荧光显微镜检测标记后第7、14、21、28天细胞阳性率。结果CM-Dil和EdU两者对ADSCs生物学特性均无明显影响。CM-Dil标记ADSCs阳性率达（99．6±0．2）％，第21天后荧光开始衰减，第35天细胞阳性率仍达（64．2＋3．3）％；EdU标记ADSCs阳性率为（87．1±1．8）％，7d后细胞阳性率逐渐降低，第14天后急剧降低，第28天细胞阳性率为（14．4±2．7）％。结论CM-Dil和EdU两者均适用于ADSCs标记示踪，CM-Dil标记具有操作简单、标记阳性率高、荧光持久等优点，适用于长期标记示踪，EdU仅适用于短期标记示踪。

勃起功能障碍研究新进展——第27届欧洲泌尿外科年会（EAU）会议摘要

第27届欧洲泌尿外科年会（EAU）在法国之都巴黎举行。此次会议涉及男科学方面大约有85篇摘要，基本囊括了男科所有的重要领域，本文就男性勃起功能障碍方面进行综述。

大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化成平滑肌细胞

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并体外定向诱导分化成平滑肌细胞，为BMSCs移植治疗勃起功能障碍（ED）大鼠模型提供种子细胞。方法分离培养大鼠BMSCs，取第3-4代细胞，流式细胞术检测BMscs表面分子CD49d、CD73、CD90、CD105和CDl06、造血干细胞表面分子CD34和CD45、血管内皮细胞特异性表面分子CD31表达情况，采用平滑肌细胞诱导培养基诱导分化，通过免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和结蛋白（Desmin）进行鉴定细胞分化。结果培养细胞阳性表达BMSCs表面分子CD49d、CD73、CD90、CD105和CDl06，同时造血干细胞表面分子CD34和CD45及血管内皮细胞表面分子CD31阴性表达，且经过平滑肌细胞诱导培养基诱导分化后α-SMA和Desmin免疫荧光检测均阳性反应。结论成功从大鼠骨髓中分离培养BMSCs，为BMSCs和基因修饰BMSCs移植治疗ED提供种子细胞。

勃起功能障碍的研究进展——第25届欧洲泌尿外科学会年会会议纪要

第25届欧洲泌尿外科学术年会（EAU）于2010年4月16日至20日在西班牙巴塞罗那举行。本文就勃起功能障碍病因、致病机制、病理生理学特点以及ED治疗等方面的研究进展报告如下。

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导为血管内皮细胞的研究

目的研究大鼠脂肪干细胞（Adipose—Derived Stem Cells，ADSCs）体外定向诱导分化为血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VECs）的可行性。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪组织获取ADSCs进行体外培养并检测其多向分化能力，取4代细胞在血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）诱导下向内皮方向分化，检测内皮细胞标志物血管性假血友病因子（Von Willebrand Factor，vWF）表达。结果ADSCs在体外能迅速扩增，具有多向分化的能力。在VEGF、bFGF诱导下，ADSCS能迅速分化为VECs，大多数细胞vWF阳性表达，与阳性对照组相似。结论ADSCs在特定诱导环境下可以分化为VECs，有望成为组织工程领域内治疗勃起功能障碍（erectile dysfunction，ED）新的种子细胞来源。

PDE5在大鼠脂肪干细胞和阴茎海绵体平滑肌细胞中表达的比较研究

目的探讨磷酸二酯酶5（Phosphodiesterase 5，PDE5）在大鼠脂肪干细胞（Adipose-Derived Stem Cells，ADSCs）中的表达情况，为PDE5基因siRNA修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍提供理论基础。方法分别采用实时荧光定量PCR和Westem blot技术检测ADSCs和阴茎海绵体平滑肌细胞（Cavernosum Smooth Muscle Cells．CSMCs）中PDE5在mRNA和蛋白水平的表达情况，并采用免疫荧光技术观察PDE5蛋白在ADSCs和CSMCs细胞内的表达与定位。结果PDE5在ADSCs中表达，且均匀分布于细胞浆内，其表达水平显著高于CSMCs（P〈0．05）。结论PDE5在大鼠ADSCs内高表达且定位于细胞浆内，为PDE5基因siRNA修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍的可行性研究奠定了良好的基础。

大鼠脂肪源性干细胞治疗勃起功能障碍的初步探索--干细胞体外培养和鉴定

目的体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞并进行鉴定，为脂肪源性干细胞移植治疗勃起功能障碍大鼠模型提供良好的种子细胞。方法I型胶原酶法原代培养大鼠脂肪源性干细胞。取第4代细胞，流式细胞术检测间充质干细胞表面分子CD31、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105，并采用成脂、成骨、成平滑肌和成内皮诱导培养基多向诱导分化后通过油红0染色、茜素红染色、免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（CI．SMA）和血管性血友病因子（vWF）进行鉴定。结果所培养的细胞CD73、CD90和CD105表达阳性，而CD31、CD34和CD45表达阴性。多向诱导分化后，油红O染色、茜素红染色、免疫荧光检测α-SMA和vWF均为阳性，而对照组为阴性。结论成功从大鼠脂肪组织中分离培养脂肪源性干细胞，可用于勃起功能障碍的脂肪源性干细胞移植治疗。

大鼠PnNOS基因修饰脂肪源性干细胞的构建

目的构建过表达大鼠阴茎神经源性一氧化氮合酶(PnNOS)基因大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs),为基因修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍(ED)大鼠模型提供种子细胞。方法获取大鼠PnNOS基因,并与线性化的腺病毒真核表达载体pDC315-EGFP定向克隆连接。构建正确的pDC315-PnNOS-EGFP穿梭质粒转染293 T细胞,采用Western Blot检测PnNOS基因在293 T细胞中的表达情况。利用AdMax腺病毒包装系统包装产生重组腺病毒,包装后扩增纯化并测定病毒滴度。PnNOS基因重组腺病毒转染大鼠ADSCs,观察GFP表达情况和Western Blot检测PnNOS基因表达情况。结果经PCR鉴定、限制性酶切分析、测序鉴定和目的质粒Western Blot表达检测鉴定,证实pDC315-PnNOS-EGFP重组腺病毒载体构建成功。重组腺病毒包装成功且病毒滴度为5.0×109 PFU/ml。Western Blot于大鼠ADSCs中检测到约161 KDa大小条带,其与PnNOS蛋白分子量大小基本相一致。结论大鼠PnNOS基因修饰的ADSCs构建成功,从而为基因修饰ADSCs移植治疗ED提供了良好的基因工程细胞。

构建人类辅助生殖技术医联体助力分级诊疗实施

目前我国人类辅助生殖技术医疗资源分布呈"倒金字塔"配置,导致"看病难、看病贵",为此,本文通过云南省第一人民医院人类辅助生殖技术医联体模式的实践,探讨基于医联体助力分级诊疗服务体系实施的对策与建议。首先,成立专家团队工作站医联体联盟;其次,建立区域医疗卫生信息共享网络;最后,以"基层首诊,双向转诊,急慢分治,上下联动"为核心构建分级诊疗服务体系。本研究通过实证分析,证明该模式能有效促进医疗资源下沉,优化医疗资源的合理配置,能大大减轻患者的经济负担(误工费、差旅费等),大大减少患者就诊的时间成本(路途来回奔波、预处理和前期治疗时间等),使患者享受转诊前后医疗服务的连续性和便捷性,有效缓解了"看病难、看病贵"的问题,同时也增加了当地医疗机构的收入,取得了良好的社会效益。