传染性胰腺坏死病毒VP2 COE蛋白单克隆抗体的制备与初步应用

为制备抗IPNV VP2蛋白的单克隆抗体,对其基本特性进行鉴定并进行初步应用。实验利用Ni-NTA亲和层析纯化的IPNV VP2 COE重组蛋白作为免疫原,免疫8周龄的雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合。采用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞,共得到2株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株,分别命名为5G10和5F3,亚类鉴定均为IgG1亚类。2株杂交瘤细胞的染色体数目在75～120之间。间接ELISA检测5G10和5F3细胞培养上清的效价分别为1∶105、1∶102,腹水效价分别为1∶108、1∶104。Western-blotting和间接免疫荧光鉴定结果显示,2株单抗均能特异性地识别IPNV。间接ELISA表明,2株单抗不与IHNV、VHSV、SVCV、HRV等病毒反应,说明获得的单抗具有高度的特异性。相加ELISA实验结果显示,2株单克隆抗体分别识别IPNV VP2蛋白上不同的抗原位点。应用间接免疫荧光方法对临床确定为患有IPN虹鳟肝组织进行检测,结果证实该2株单克隆抗体可用于后续实验。

LHCGR胞外结构域蛋白的生信分析、原核表达及纯化

目的为获得小鼠LHCGR胞外结构域蛋白(LHCGR-1),分析其结构及理化性质,为今后研究该蛋白功能及筛选与之相互作用的小分子化合物奠定基础。方法根据NCBI中小鼠LHCGR氨基酸序列合成目的基因Lhcgr-1,经生物信息学分析后,将该基因插入至表达载体pET-28a(+),并转化至BL21(DE3)感受态细胞中;经IPTG诱导,表达重组蛋白pET-28a-LHCGR-1,利用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,之后对该蛋白进行纯化,并通过分子对接技术预测该蛋白与LH、CG的相互作用。结果预测LHCGR-1蛋白分子量为40749.08,由367个氨基酸组成,等电点理论值为5.47;氨基酸序列中有29个丝氨酸位点、10个苏氨酸位点和5个酪氨酸位点;成功构建了表达载体pET-28a-LHCGR-1并获得纯化的目的蛋白;分子对接结果表明目的蛋白可以与LH、CG通过多种相互作用,形成稳定的复合物,有利于其发挥原有的生物学功能。结论成功构建了小鼠胞外结构域蛋白LHCGR-1在大肠杆菌内的原核表达体系并获得了纯化蛋白,分子对接预测该蛋白具有生物学功能,提示该蛋白可以用于后续研究。

传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析

利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表明,表达IPNV VP2 COE蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为IPNV检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。

传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。

硒化甘草多糖、甘草多糖及其联合抗生素对无乳链球菌体外抗菌活性及机制分析

【目的】分析硒化乌拉尔甘草多糖(selenium glycyrrhiza polysaccharide,SeGUP)、乌拉尔甘草多糖(glycymhiza polyacchiade,GUP)对无乳链球菌体外抗菌活性及机制,研究其联合的抗菌效果。【方法】通过药敏纸片筛选出对无乳链球菌敏感抗生素,采用最小二倍稀释法和棋盘法测得最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)和联合抑菌指数(FICI index,FICI);将无乳链球菌与120、60、30 mg/mL的SeGUP、GUP及抗生素分别等量混合后绘制细菌生长速率图;通过ELISA法检测细菌培养液中碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶活性、蛋白质含量及胞内DNA浓度,研究SeGUP、GUP及联合抗生素对细菌细胞膜、细胞壁及DNA的影响;采用结晶紫染色法检测SeGUP、GUP及联合抗生素对无乳链球菌生物被膜形成的影响。【结果】无乳链球菌对SeGUP 480 mg/mL、GUP 480 mg/mL均呈现中度敏感,抑菌圈直径为14.0、11.0 mm;无乳链球菌对盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考极敏;SeGUP和GUP分别对肺炎链球菌的MIC、MBC为120、240 mg/mL和240、480 mg/mL;SeGUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、0.75、1、0.5,SeGUP与盐酸卡那霉素之间关系为无关,与盐酸多西环素、头孢曲松钠之间为相加关系,与氟苯尼考间为协同关系,GUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、1、1.5、0.75,GUP与盐酸卡那霉素、头孢曲松钠之间关系为无关,与盐酸多西环素、氟苯尼考间为相加关系;SeGUP、GUP明显抑制细菌的生长,其中SeGUP 120 mg/mL效果最强,SeGUP、GUP与盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考联合使用后增强了抑制效;SeGUP、GUP及联合抗生素使用后均能显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、蛋白质含量(P<0.05),显著降低胞内DNA含量(P<0.05),显著抑制无乳链球菌生物被膜的形成(P<0.05)。【结论】SeGUP能够通过损伤细菌细胞壁、细胞膜完整性,影响DNA含量对无乳链球菌产生明显的抑制作用,且其抗菌活性优于GUP。SeGUP与抗生素联合使用后能够增强抗生素的抗菌活性,并且其作用效果强于单独使用SeGUP、GUP和抗生素。

紫花地丁不同提取物化学成分检识及抗炎活性研究

目的研究紫花地丁乙醇回旋冷凝法分离乙酸乙酯提取物和水提取物的化学成分及抗炎活性。方法紫花地丁乙醇回旋冷凝法提取乙酸乙酯部位和水相部位,并对各部位进行化学成分检识。采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀进行急性炎症造模、炎性组织PGE2含量检测、NO含量检测等动物试验,研究紫花地丁不同提取物的抗炎作用。结果紫花地丁乙酸乙酯提取物中主要含有黄酮、蒽醌类,水提取物中主要含有糖及苷类、皂苷类。乙酸乙酯提物各剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致小鼠足肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性均具有显著的抑制作用(P<0.05~P<0.01),并可不同程度降低炎性组织PGE2含量和NO含量,中剂量组作用极显著(P<0.01)。结论紫花地丁的抗炎作用活性成分在乙醇回旋冷凝法提取的乙酸乙酯提取物中;紫花地丁乙酸乙酯提取物抑制了炎性组织中PGE2的生成量和NO释放量,其抗炎作用可能与降低PGE2、NO表达有关。

硒化乌拉尔甘草多糖的抗炎活性研究

为了探究硒化乌拉尔甘草多糖（Se-GPS）的抗炎活性,试验以地塞米松为阳性对照,给小白鼠灌服低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（300 mg/kg）Se-GPS和低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（300 mg/kg）GPS 0.2 m L/只,连续给药10 d,观察其对二甲苯和醋酸所致炎症的抗炎效果;用脂多糖（LPS）建立小鼠炎症模型,分别给小鼠灌服低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（300 mg/kg）LPS＋Se-GPS和低剂量（100 mg/kg）、中剂量（200 mg/kg）、高剂量（300 mg/kg）LPS＋GPS0.2 m L/只,连续给药10 d,测定小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量变化。结果表明：各剂量Se-GPS均能显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,显著降低醋酸致小鼠毛细血管的通透性增加,抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,其抗炎活性略强于甘草多糖,且高剂量Se-GPS抗炎效果最好。说明Se-GPS具有明显的抗炎活性。

“乳炎宁”水提物的抗炎作用研究

【目的】探究“乳炎宁”水提物的抗炎作用,为其临床运用及进一步研究提供理论依据。【方法】采用二甲苯致耳廓肿胀试验、醋酸致腹腔毛细血管通透性试验、角叉菜胶致足肿胀试验、棉球致肉芽肿胀试验及小鼠血清细胞因子含量检测进行“乳炎宁”水提物抗炎作用研究。取60只健康昆明小鼠,雌雄各半,随机分为5组,即阴性对照组(生理盐水组)、阳性对照组(阿司匹林组)、“乳炎宁”水提物低(4 mg/g)、中(8 mg/g)、高(16 mg/g)剂量组,12只/组。各组小鼠每天固定时间灌胃,每天1次,连续10 d。后续按照不同试验具体操作,试验结束后分别测量各组小鼠耳廓重量、腹腔洗液D_(590 nm)值、足重量、棉球肉芽肿重量及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。【结果】二甲苯致耳廓肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组均可极显著降低二甲苯导致的耳廓肿胀(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物高剂量组耳廓重量差异不显著(P>0.05)。醋酸致腹腔毛细血管通透性试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对醋酸致腹腔毛细血管通透性升高均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组的毛细血管通透性差异显著或极显著(P<0.05;P<0.01)。角叉菜胶致足肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠足肿胀度均有极显著的抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组足肿胀度均有极显著差异(P<0.01)。棉球致肉芽肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠棉球肉芽肿胀抑制均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物低、中剂量组差异极显著或显著(P<0.01;P<0.05),“乳炎宁”高剂量组与阳性对照组作用相当(P>0.05)。小鼠血清细胞因子检测实验结果表明,与阴性对照组相比,除“乳炎宁”水提物低剂量组外,药物处理组血清中TNF-α和IL-1β含量均有不同程度降低,“乳炎宁”水提物低剂量组血清中TNF-α含量差异不显著(P>0.05),血清中IL-1β含量显著降低(P<0.05),“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中IL-1β含量均极显著降低(P<0.01),中剂量组血清中TNF-α含量显著降低(P<0.05),高剂量组TNF-α含量极显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中2种细胞因子均差异不显著(P>0.05),低剂量组血清中2种细胞因子均差异极显著(P<0.01)。【结论】“乳炎宁”水提物在小鼠上显示出了良好的抗炎效果。

硒化甘草多糖对雏鸡免疫和抗氧化功能的影响

为研究硒化甘草多糖(Se GUP)对雏鸡免疫和抗氧化功能的影响,采用腹腔注射脂多糖(LPS)建立雏鸡免疫应激模型。将试验鸡随机分为5组,分别为空白对照组、LPS组、LPS+黄芪多糖组、LPS+甘草多糖组、LPS+硒化甘草多糖组。于试验第8、10、12天腹腔注射LPS建立免疫应激模型后,试验组分别注射黄芪多糖、甘草多糖、硒化甘草多糖,连续给药7 d,分别于给药后第7、14、21、28、35天采血,测定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、补体蛋白3(C3)、补体蛋白4(C4)、可溶性CD4分子(SCD4)、可溶性CD8分子(SCD8)及血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)。结果显示,与空白对照组相比,硒化甘草多糖显著降低了LPS刺激的25日龄雏鸡血清IgA含量(P<0.05),18、25、32、39日龄雏鸡血清IgG和IgM含量(P<0.05)及18、25、32、39、46日龄雏鸡血清MDA含量(P<0.05),显著提高了LPS刺激的18、25、32日龄雏鸡血清SCD4含量(P<0.05),18和25日龄雏鸡血清T-AOC含量(P<0.05),18、25、32、39、46日龄雏鸡血清SOD活性(P<0.05),18、25、32、39日龄雏鸡血清GSH-PX活性(P<0.05)。结果表明,硒化甘草多糖对雏鸡的免疫功能和抗氧化功能均有一定的调节作用。

甘草酸对脂多糖应激黄羽肉仔鸡免疫性能的影响

【目的】本试验旨在研究甘草酸(GA)对黄羽肉仔鸡免疫性能的影响。【方法】选取300只体重接近的1日龄健康黄羽肉仔鸡,随机分为6组,每组5个重复,每个重复10只,分别为空白对照组、脂多糖处理组(LPS组)、黄芪多糖组(APS组)、高剂量甘草酸组(GA_(H)组)、中剂量甘草酸组(GA_(M)组)和低剂量甘草酸组(GA_(L)组)。空白对照组于14、16、18、20日龄早上腹腔注射0.9%无菌生理盐水2 mL,其余各组同时间注射等量的LPS溶液(1.5 mg/kg BW)建立体内免疫应激模型。空白对照组和LPS组饲喂基础饲粮,APS组、GA_(H)、GA_(M)和GA_(L)组于应激模型建立阶段及前后3 d(即11~23 d)分别在基础饲粮基础上添加400 mg/kg黄芪多糖(APS)和120、100、80 mg/kg的GA;试验期49 d。在21、28、35、42、49日龄每个重复随机选取2只鸡采集翅静脉血,用酶联免疫法(ELISA)测定血清中CD4、CD8分子含量及免疫活性物质IgA、IgG、IgM含量。【结果】与空白对照组相比,21~49日龄时,其余5组肉仔鸡血清CD4分子含量均极显著下降(P<0.01),而血清CD8分子、IgA、IgG、IgM(除GA_(H)组和APS组外)含量均有所升高。与LPS组相比,APS组和3个GA组肉仔鸡血清CD4分子含量均有所升高,而血清CD8分子含量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),血清IgA、IgG、IgM含量均极显著降低(P<0.01)。此外,在3个GA组间,肉仔鸡血清CD4分子含量均随GA添加量增加而升高,其中GA_(H)组的升高幅度与APS组最接近,尤其是在42日龄时,GA_(H)组与APS组间差异不显著(P>0.05),且均极显著或显著高于LPS组(P<0.01;P<0.05);而肉仔鸡血清CD8分子、IgA、IgG、IgM含量随GA添加量增加呈降低趋势,其中GA_(H)组的降低幅度与APS组最接近,在CD8分子含量方面,两组间无显著差异(P>0.05),且在35和49日龄时,GA_(H)组肉仔鸡CD8分子含量与空白对照组差异不显著(P>0.05);在IgA含量方面,除35日龄外,其他日龄时GA_(H)组与APS组间均无显著差异(P>0.05),在21和49日龄时,GA_(H)组与空白对照组差异均不显著(P>0.05);在IgG含量方面,除28日龄外,其他日龄时GA_(H)组与APS组间均无显著差异(P>0.05),在35日龄时,GA_(H)组与空白对照组差异不显著(P>0.05);在IgM含量方面,除42日龄外,其他日龄时GA_(H)组与APS组间均无显著差异(P>0.05),在21日龄时,GA_(H)组与空白对照组差异不显著(P>0.05)。【结论】GA能有效缓解黄羽肉仔鸡对LPS刺激引起的免疫应激反应,增强免疫调节能力,且与保护效果之间有剂量效应,由强到弱依次为GA_(H)>GA_(M)>GA_(L)。

中草药提取物对脂多糖诱导小鼠乳腺炎的调节作用

试验旨在探究中草药提取物(ZY)对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎的调节作用。选取72只产后3~5 d SPF级昆明雌鼠,随机选择12只为空白对照组(BC组),其余60只随机分为5组,即模型组(M组)、阳性对照组(Dex组)以及中草药提取物高(ZY-H组)、中(ZY-M组)、低(ZY-L组)剂量组,每组12只。除BC组外,其余各组小鼠对环境适应后进行乳腺炎造模。造模结束2 h后,ZY-H组、ZY-M组、ZY-L组小鼠分别给药16、8、4 mg/g中草药提取物,Dex组小鼠腹腔注射5 mg/kg地塞米松磷酸钠注射液,BC组及M组小鼠灌胃等体积的生理盐水。造模后连续处理7 d。结果显示,M组小鼠乳腺组织中乳腺腺泡及腺泡管结构遭到破坏并伴有炎性浸润。与BC组相比,M组病理组织学评分极显著升高(P<0.01),细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、髓过氧化物酶(MPO)含量极显著升高(P<0.01),过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)含量极显著降低(P<0.01)。与M组相比,Dex组及ZY各剂量组小鼠乳腺组织病理情况均有一定程度的恢复,病理组织学评分极显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MPO含量极显著降低(P<0.01),PPAR-γ含量极显著升高(P<0.01)。研究表明,各剂量中草药提取物均对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎有正向调节作用。

硒化甘草多糖对雏鸡血液生理生化指标的影响

为了研究硒化甘草多糖(SeGUP)对雏鸡血液生理生化指标的影响,本试验选取300只1日龄京红1号雏鸡,随机分为4组,每组5个重复;其中I组为空白组,注射生理盐水;Ⅱ~Ⅳ组为试验组,分别肌内注射1 mL的黄芪多糖、甘草多糖和硒化甘草多糖;试验周期45 d。分别于试验第15、22、29、36天和第43天采血,检测各组雏鸡血液生理生化等各项指标。结果显示:Ⅳ组雏鸡血液中白细胞数(WBC)、淋巴细胞数(LYM)均高于其他各组;整个试验周期中各组血液中白蛋白(ALB)含量呈上升趋势,Ⅱ~Ⅳ组白蛋白的含量高于空白组,第15天和第22天试验组Ⅳ与空白组相比差异显著(P<0.05);各组间谷丙转氨酶(GLT)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的含量无显著差异(P>0.05),但Ⅱ~Ⅳ组胆固醇(CHOL)和甘油三酯(TG)的含量较空白组均有不同程度的下降;Ⅳ组血液中钙(Ca)、无机磷(PHOS)含量高于其他各试验组;第15、29天和第43天时IV组雏鸡血液中Ca的含量与空白组比较差异显著(P<0.05);第15天和第36天时Ⅳ组雏鸡血液中PHOS的水平显著高于空白组(P<0.05);试验过程中Ⅱ~Ⅳ组血液中溶菌酶(LZM)的含量高于空白组,第29天时Ⅳ组溶菌酶的含量显著高于空白组(P<0.05);α-酸性糖蛋白(AAG)在整个试验过程中各组间的差异不显著(P>0.05)。结果表明,经过硒化处理过的甘草多糖可以改善雏鸡的血液指标,提高机体的抵抗力且效果优于未经处理过的甘草多糖。本试验为硒化甘草多糖在雏鸡临床上的应用提供理论依据。

健宫散对产后子宫炎奶牛生殖激素及子宫形态的影响

本试验旨在研究中药复方健宫散对产后子宫炎奶牛的生殖激素孕酮(P 4)、前列腺素F_(2)α(PGF_(2)α)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))及子宫形态的影响。选取年龄、体况评分(BCS)和胎次相近的18头奶牛,按临床症状、阴道分泌物的性状、B超检查分为患病组(患子宫炎不治疗)、正常组(未患子宫炎)和治疗组(患子宫炎治疗),每组6头。治疗组每日灌服中药健宫散400 g/头,患病组与正常组灌服灭菌生理盐水。灌药期为1个疗程(7 d)。分别于用药前、用药中、停药后1、4、7、11、15 d和20 d采集血液,检测三组奶牛P 4、PGF_(2)α、PGE_(2)指标;于产后第7、9、14、21、27、35天和第42天跟踪测量三组奶牛子宫颈纵径和子宫角壁厚。结果表明,治疗组血液中P 4、PGE_(2)水平显著低于正常组与患病组(P<0.05);PGF_(2)α的水平显著高于正常组与患病组(P<0.05);子宫颈纵径、子宫角壁厚恢复快于患病组。本试验条件下,健宫散可以促进性激素分泌,调节性激素代谢,加快机体子宫形态恢复,从而达到预防和治疗子宫炎的效果。

中草药提取物对溃疡性结肠炎的调节作用

试验旨在探究中草药提取物对溃疡性结肠炎(UC)的调节作用及可能作用机制。试验选取60只SPF级昆明小鼠,雌、雄各半,随机分为6组,即空白对照组(BC)、模型组(Model)、阳性组(SASP)、中草药提取物高剂量组(ZY-H,16 mg/g)、中草药提取物中剂量组(ZY-M,8 mg/g)、中草药提取物低剂量组(ZY-L,4 mg/g),每组10只小鼠。造模成功后,各组小鼠给药10 d。结果显示,与BC组相比,Model组小鼠结肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01),白细胞介素-10(IL-10)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性极显著降低(P<0.01)。与Model组相比,各药物处理组小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠组织病理学评分均极显著降低(P<0.01);ZY各剂量组及SASP组结肠细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-17、IFN-γ、MPO、MDA含量极显著降低(P<0.01),IL-10、PPAR-γ的含量及SOD、GSH-Px的活性极显著升高(P<0.01)。研究表明,各剂量中草药提取物均对改善小鼠UC模型症状以及结肠组织中炎性细胞因子和氧化应激产物具有正向调节作用。

硒化乌拉尔甘草多糖和乌拉尔甘草多糖对单核细胞增生李斯特菌抗菌活性的研究

为了比较硒化乌拉尔甘草多糖(selenizing Glycyrrhiza uralensis polysaccharide,SeGUP)和乌拉尔甘草多糖(Glycymhiza uralensis polyacchiade,GUP)对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogene,Lm)体内、体外抗菌活性,试验采用药敏纸片方法分别测定Lm对480 mg/mL、240 mg/mL、120 mg/mL GUP和SeGUP的敏感程度;采用微量肉汤稀释法测定SeGUP和GUP对Lm的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);设置SeGUP和GUP高剂量(240 mg/mL)组、中剂量(120 mg/mL)组、低剂量(60 mg/mL)组,各组分别与Lm混合培养24 h,每2 h取样测定OD600值,观察SeGUP、GUP对Lm生长速率的影响;检测各组4小时时的培养上清液中的碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量;用结晶紫染色法检测SeGUP和GUP各剂量组对Lm生物被膜形成能力的影响;分别按体重灌胃小鼠SeGUP、GUP 300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg测定其对感染Lm小鼠的保护效果。结果表明:480 mg/mL SeGUP对Lm高度敏感,抑菌圈直径为15.0 mm;480 mg/mL GUP中度敏感,抑菌圈直径为13.0 mm。SeGUP和GUP对Lm的MIC分别为120 mg/mL、240 mg/mL,MBC分别为240 mg/mL、480 mg/mL。各剂量SeGUP和GUP均能抑制Lm的生长,其中240 mg/mL SeGUP抑制效果最好;与空白对照组相比,SeGUP和GUP各剂量组的AKP、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量均显著升高(P<0.05),各剂量组均能显著抑制生物被膜形成(P<0.05);与模型组相比,300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg SeGUP组和300 mg/kg、150 mg/kg GUP组小鼠死亡率均显著降低(P<0.05),75 mg/kg GUP组小鼠死亡率差异不显著(P>0.05);各SeGUP组小鼠死亡率低于相同浓度的GUP组。说明SeGUP、GUP对Lm生长有明显的抑制作用,相同浓度时SeGUP的效果更好,并且SeGUP浓度为240mg/mL时体外抗菌效果最好,按体重灌胃剂量为300 mg/kg时对小鼠的保护力最强。

奶牛子宫炎的诊断、预警和新型预防治疗方法研究进展

奶牛子宫炎是影响养殖场效益的一大因素,其隐匿性强,发病率高,危害性大,严重影响奶牛繁殖能力。治疗奶牛子宫炎最常用的方法是抗生素疗法,但其存在细菌耐药性和抗生素残留的问题。而奶牛子宫炎防治的关键在于精准的诊断、尽早的预防和替抗疗法的使用。目前对于奶牛子宫炎诊断常用细胞学、直肠阴道检查、B超检查以及PCR等技术,未来需要寻求更加简便、快捷的诊断方法以及诊断标准。预警技术可尽早预测预防奶牛子宫炎发生,如指标预警和基因组预测,未来需要结合大样本量及当地环境来确认预警指标,以提高预警的准确度。越来越多的科研致力于开发“替抗”疗法,如用壳聚糖微粒、精油、臭氧、益生菌、疫苗和重组白细胞介素-8替代抗生素治疗,但仍需要进行大量的临床试验和效果评估,以真正解决抗生素残留问题。本文通过上述研究的概述,为奶牛子宫炎诊断、预防、治疗提供借鉴,为降低奶牛子宫炎发生率,减少细菌耐药性和抗生素残留,提高养殖效率提供技术支撑。

硒化甘草多糖对雏鸡肠道组织形态的影响

为了研究硒化甘草多糖对雏鸡肠道组织形态的影响,试验采用单因素试验设计,将280只1日龄的健康"京红一号"雏鸡随机分为4组,分别为甘草多糖组、硒化甘草多糖组、黄芪多糖组、对照组,每组70只,分别采集15,22,29,36,43日龄雏鸡的十二指肠、空肠、回肠,制作石蜡切片,H.E.染色,光学显微镜下观察雏鸡肠道组织形态的结构变化,测量十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛高度、隐窝深度,计算绒毛高度与隐窝深度的比值(V/C)。结果表明:15,22,29,36,43日龄时,硒化甘草多糖能显著促进雏鸡的肠道组织形态发育,十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛伸展良好,走向平直,绒毛之间分界清晰,呈指状突起,绒毛饱满;对照组十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛长度变短且数目稀少,肠绒毛排列紊乱,有明显的断裂。15,22,29,36,43日龄时,与对照组相比,硒化甘草多糖组雏鸡的肠绒毛高度增加、隐窝深度减小、V/C比值升高。说明硒化甘草多糖能够明显地影响雏鸡十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度,均能改善雏鸡在不同时期的肠道发育指标和肠道组织形态,促进雏鸡的肠道发育。

硒化甘草多糖对雏鸡抗炎活性的影响

为了了解硒化甘草多糖(SeGUP)对雏鸡抗炎活性的影响,试验采用脂多糖(LPS)建立雏鸡体内炎症模型,选取300只1日龄京红1号雏鸡,随机分为5组,分别为空白对照组、LPS组、LPS+黄芪多糖(APS)组、LPS+甘草多糖(GUP)组、LPS+硒化甘草多糖(SeGUP)组,除空白对照组外,各组试验鸡于8,10,12日龄腹腔注射LPS后,LPS+APS组、LPS+GUP组、LPS+SeGUP组分别肌肉注射给予浓度为1 mg/mL的APS、GUP、SeGUP,0.5 mL/只,连续7 d,分别于试验鸡18,25,32,39,46日龄每组选取10只,采用碳粒廓清法检测雏鸡巨噬细胞吞噬指数,用试剂盒检测雏鸡血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、一氧化氮(NO)和诱导型NO合酶(iNOS)含量。结果表明:与空白对照组比较,LPS组18,25,32,39,46日龄雏鸡巨噬细胞吞噬指数和血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、iNOS含量均显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+SeGUP组18,25,32,39,46日龄雏鸡巨噬细胞吞噬指数和血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、iNOS含量均显著降低(P<0.05)。说明SeGUP能缓解雏鸡因LPS刺激引起的炎性反应,从而发挥抗炎作用。

几种炎症模型的小鼠造模方法研究进展

动物炎症性疾病在疾病中比例最大,无论是传染性疾病还是免疫性疾病在临床上都会有炎症的发生。为了更加深入的了解疾病发生发展的机制以及寻找更好的预防治疗途径,采用体内试验非常必要。小鼠模型因其经济便宜,饲养周期短,操作简单以及与人类基因、生理结构等方面的相似性而广泛运用。本文以此为背景,主要围绕肺炎模型、结肠炎模型以及乳房炎模型的小鼠造模方法研究进展展开综述,以期为后续研究提供便捷。

甘草酸对脂多糖应激黄羽肉仔鸡抗炎性能的影响

试验旨在研究甘草酸对黄羽肉仔鸡的抗炎能力。选取300只健康体重接近的1日龄黄羽肉仔鸡随机分为6个组,每组5个重复,分别为生理盐水组(空白对照)、脂多糖处理组(LPS组)、黄芪多糖+LPS组(APS+LPS)、高剂量甘草酸+LPS组(GA H+LPS)、中剂量GA+LPS组(GAM+LPS)和低剂量GA+LPS组(GAL+LPS)。APS+LPS组、GA H+LPS组、GAM+LPS组和GAL+LPS组于造模阶段及前后3d(即11~23d)分别饲喂添加APS400mg/kg体重、GA120mg/kg体重、GA100 mg/kg体重、GA80 mg/kg体重试验饲料,试验期49 d。每组分别于21、28、35、42、49日龄测定血清巨噬细胞吞噬能力和炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)指标。结果表明:与空白对照组比较,LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均显著升高(P<0.05),而IL-4含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,GAL+LPS组、GAM+LPS组、GA H+LPS组、APS+LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-4含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。说明GA能有效缓解黄羽肉仔鸡对LPS刺激引起的炎性反应,从而发挥抗炎作用。