痛风散对急性痛风性关节炎小鼠模型干预作用的机制研究

目的:探讨经验效方痛风散的抗痛风作用及机制。方法:将36只Balb/c雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱阳性药组、痛风散低剂量组、痛风散中剂量组、痛风散高剂量组,每组6只。通过腹腔注射氧嗪酸钾及踝关节腔注射尿酸钠晶体混悬液建立急性通风性关节炎(AGA)模型。造模完成后,3个痛风散剂量组连续15 d灌胃给药;空白对照组及模型组给予与药物等量的蒸馏水,秋水仙碱组给予0.40 mg/kg剂量的秋水仙碱溶液。检测踝关节组织病理变化、炎症因子及血清UA、AST、ALT、CRE、BUN的水平,计算各组实验小鼠全血Treg细胞的比例。结果:与模型组比较,痛风散3个剂量组小鼠的踝关节肿胀度均降低(P<0.01),炎性细胞浸润减少,血清CRE、BUN、AST和ALT含量降低(P<0.01),踝关节组织内促炎因子IL-6、IL-17A、IFN-γ、TNF-α、EMR1的表达量有减弱的趋势;痛风散低剂量组、痛风散中剂量组血液中Treg细胞的比例升高(P<0.01);痛风散低剂量组的血清UA降低(P<0.05)。结论:痛风散可能通过降低血清尿酸,改善肝肾功能、调节免疫并抑制炎症发挥对急性痛风性关节炎动物模型的治疗作用。

对分课堂融入中医诊断学教学模式创新与实践

对分课堂作为一种新型课堂教学模式,旨在打破传统“灌输式”教学,充分带动学生积极性,有效培养学生创新意识和独立思考能力。而《中医诊断学》作为中医基础课程,具有较强的理论性和实践性等特点,它要求学生具备独特的中医思维体系,因此教学优劣对于培养学生思维体系起着至关重要的作用。基于此,本文以《中医诊断学》课堂教学为例,针对目前教学存在的问题、对分课堂的优势、对分课堂在课程中的具体实施以及实施效果等方面,对对分课堂模式下中医诊断学课程教学设计进行探讨。该教学模式能够培养学生形成独特的中医思维体系,并进一步提升对中医诊断学的领悟和理解,极大程度上改善了中医教学质量,也为中医诊断学的教学模式提供一种思路。

山药多糖促进小鼠巨噬细胞向M1型极化

目的考察山药多糖对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法在体外实验中,将RAW264.7细胞与山药多糖共孵育24 h,采用MTT法检测细胞活性;利用Griess试剂盒检测NO分泌水平;采用CBA法检测细胞因子分泌水平;采用流式细胞术检测细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达水平。在动物实验中,将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、山药多糖低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（200 mg/kg）,每天灌胃给药1次连续15 d;第11~15天除正常组外,其余小鼠腹腔注射氢化可的松。末次给药第2天取脾和胸腺称质量,计算免疫器官指数;利用流式细胞术检测腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结果山药多糖剂量低于500μg/ml时对RAW264.7细胞活性无显著影响,但可以促进细胞分泌NO和细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1,提高细胞表达MHC-Ⅱ类分子的水平。动物实验结果显示山药多糖可以恢复免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结论研究表明山药多糖可以促进巨噬细胞向M1型极化。

血塞通致RBL-2H3细胞与原代肥大细胞脱颗粒特性的比较

【目的】通过比较血塞通注射液等在类过敏试验中致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒特性的异同,以评价2种细胞在中药注射液类过敏试验中的意义。【方法】选用已经明确能引起类过敏反应的3种供试品即血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80,分别与RBL-2H3细胞和大鼠腹腔肥大细胞共同孵育1 h,通过β-氨基己糖苷酶释放率和组胺释放率、释放量等的检测,分析比较脱颗粒特性的异同,同时观察了不同浓度血塞通注射液对脱颗粒程度的影响。【结果】2种细胞在血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80的直接刺激下均出现脱颗粒现象,脱颗粒程度与血塞通注射液呈剂量依赖性;原代肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放率、组胺释放量和释放率均显著高于RBL-2H3细胞,2种细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】在类过敏反应脱颗粒试验中,RBL-2H3细胞和原代大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒具有相同趋势,均可用于中药注射液类过敏评价,RBL-2H3细胞应用方便,而肥大细胞更加敏感。

参芪扶正注射液促进环磷酰胺处理小鼠肠道相关淋巴组织B细胞数量的恢复

目的考察参芪扶正注射液(SQFZ)对环磷酰胺(Cy)处理后小鼠肠道相关淋巴组织(GALT)B细胞数量恢复的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、Cy组和SQFZ组。Cy组和SQFZ组小鼠均腹腔注射Cy(100 mg/kg),对照组给予等量生理盐水;24 h后,SQFZ组小鼠灌服SQFZ 1 m L/只,其余2组给予等量的生理盐水,每天灌胃1次连续10 d;每天记录小鼠体质量。给药第10天处死小鼠,测定胸腺指数和脾指数;流式细胞术检测肠系膜淋巴结(MLN)和Peyer集合淋巴结(PP)淋巴细胞中B细胞比例及股骨骨髓细胞周期。体外实验中,小鼠淋巴细胞经SQFZ处理后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测B细胞表达CD86分子水平;羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法检测B细胞增殖。结果 SQFZ减少Cy处理小鼠体质量的下降,促进胸腺指数、脾指数、MLN和PP中B细胞数量恢复,但未见明显改善骨髓抑制状态。体外实验结果表明SQFZ可以增加小鼠淋巴细胞活性,提高小鼠B细胞活化和增殖比例。结论 SQFZ促进Cy处理后小鼠GALT中B细胞数量恢复,可能通过促进B细胞增殖而发挥作用。

芍药苷通过抑制NLRP3炎症小体治疗溃疡性结肠炎小鼠的研究

目的研究芍药苷(Paeoniflorin,PF)在溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中的动态分布,并探讨其治疗UC的途径及其作用机制。方法 C57BL/6小鼠在实验第1~7天自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)水溶液制备UC模型,第8天,UC小鼠灌服黄芩汤(含芍药苷),采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)检测芍药苷在结肠中的含量变化,检测时间点为给药0.5,1,3,12 h。另取C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(Sulfasalazine,SASP)和芍药苷组,每组8只。同时,SASP组(50 mg·kg^(-1))和芍药苷组(25 mg·kg^(-1))分别灌胃给药;正常组和模型组小鼠灌胃给予生理盐水,连续10 d,并记录体质量变化。实验第11天,取小鼠脾脏称质量;采用动物血细胞计数仪检测单核细胞数量;苏木素—伊红染色(HE)观察结肠形态变化;免疫组化法检测结肠和肠系膜中巨噬细胞的分布;超高分辨率激光共聚焦扫描显微镜(Confocal)检测结肠组织巨噬细胞和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family,pyrin domain-containing 3,NLRP3)蛋白共定位。ELISA试剂盒检测结肠匀浆上清白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果 UPLC-Q-TOF-MS检测结果表明,芍药苷在结肠中可以检测到,并且芍药苷可显著减轻小鼠结肠溃疡症状并显著促进UC小鼠体质量(P<0.05)和脾指数恢复(P<0.001),降低UC小鼠外周血单核细胞比例(P<0.01)。减少结肠和肠系膜中巨噬细胞浸润的数量,并通过抑制结肠巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化进而降低结肠组织上清中IL-1β含量(P<0.01)。结论芍药苷可以在结肠中检测到,并可改善UC小鼠病理症状,抑制肠系膜和结肠组织中巨噬细胞的浸润,抑制结肠巨噬细胞中NLRP3蛋白并抑制细胞因子IL-1β的释放。

四君子汤总多糖对化疗荷瘤小鼠脾脏和派氏结及肠系膜淋巴细胞的影响

目的研究四君子汤总多糖(SJZPS)对化疗荷瘤小鼠脾脏、派氏结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)淋巴细胞的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为对照组、肿瘤模型组,环磷酰胺(CY)化疗组和四君子汤总多糖治疗(CY+SJZPS)组。CY组和CY+SJZPS组每天腹腔注射CY20 mg.kg-1,CY+SJZPS组同时灌胃SJZPS 1g.kg-1,连续给药9 d。应用流式细胞术检测脾脏、小肠PPs和MLNs中T、B淋巴细胞比例、活化水平以及T细胞亚群的变化。结果 SJZPS能提高肠道PPs中B淋巴细胞的比例和活化水平,降低MLNs中CD4+/CD8+的比值,改善化疗所致的肠道黏膜免疫损伤;SJZPS能提高化疗荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞中B淋巴细胞的比例,及T、B淋巴细胞的活化水平,同时降低CD4+/CD8+的比值以改善化疗荷瘤小鼠系统免疫功能,其中SJZPS对B细胞的作用更加明显。结论 SJZPS能有效拮抗化疗药物所致的小鼠肠黏膜免疫功能损伤,同时对整体免疫功能具有改善作用。

四君子汤总多糖对化疗荷瘤小鼠肠黏膜和整体免疫损伤的保护作用

【目的】研究四君子汤总多糖对化疗所致荷瘤小鼠肠黏膜和整体免疫损伤的保护作用。【方法】通过胸腺指数、脾脏指数、外周血淋巴细胞数目、抑瘤率及脾脏淋巴细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)等指标观察四君子汤总多糖对化疗荷瘤小鼠整体免疫功能的影响;通过肠系膜淋巴细胞IL-2及肠道分泌型IgA(sIgA)的分泌量观察其对化疗荷瘤小鼠肠道免疫功能的影响。【结果】四君子汤总多糖能促进肠系膜淋巴细胞分泌IL-2,增加肠道sIgA的分泌量,对化疗荷瘤小鼠所致胸腺指数、脾脏指数、外周血淋巴细胞数目降低表现出恢复作用,并能促进脾脏淋巴细胞分泌IL-2(均P<0.05或P<0.01)。【结论】四君子汤总多糖可通过调节化疗荷瘤小鼠肠道黏膜免疫和整体免疫功能,改善化疗对荷瘤小鼠所致的免疫损伤。

肠道菌群失调增加小鼠肠上皮内T淋巴细胞活化和促炎细胞因子分泌

目的探讨肠道菌群失调对小鼠小肠上皮间淋巴细胞(i IEL)功能的影响。方法口服给予广谱抗生素头孢曲松钠造成菌群失调小鼠模型,用乙二胺四乙酸(EDTA)和二硫苏糖醇(DTT)消化上皮细胞,流式细胞术鉴定i IEL表型和T细胞亚群的比例,ELISA检测肠腔冲洗液中白细胞介素2(IL-2)、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)水平,采用选择性培养基以及PCR检测肠道细菌的类别。结果与正常组相比,给予头孢曲松钠后小鼠肠道内细菌明显减少,真菌和酵母菌增多;i IEL中T淋巴细胞亚群的比例发生变化,其中γδT细胞比例明显升高;CD3+T细胞、CD8+T细胞以及T细胞受体(TCR)γδ+T细胞活化增加,肠腔内IL-2、IL-6、IFN-γ水平显著升高。结论肠道菌群失调导致定植抗力下降,真菌增多,微生物屏障功能被破坏,引起i IEL中T细胞活化增加,促炎细胞因子分泌增加,可能是菌群紊乱引起炎症性肠病的原因之一。

生脉注射剂致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒研究

【目的】通过分析生脉注射液致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒及其对2种细胞的细胞毒作用,评价生脉注射剂的致类过敏情况。【方法】分离大鼠腹腔肥大细胞,加入不同浓度的生脉注射剂共孵育,采用荧光法检测组胺并计算释放率。RBL-2H3细胞与不同浓度的生脉注射剂共孵育,采用显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率。分别采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法与流式细胞术检测生脉注射剂对2种细胞的细胞毒作用。【结果】生脉注射剂在终浓度为12.5～100μL/mL时可引起肥大细胞组胺释放率增加,25～100μL/mL时可引起RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率增加（均P〈0.05或P〈0.01）,上述剂量范围内对2种细胞均未表现细胞毒作用。【结论】生脉注射剂在未表现细胞毒作用的剂量下可引起大鼠腹腔肥大细胞和RBL-2H3细胞脱颗粒,提示生脉注射剂具有致类过敏的可能。

大黄素影响调节性T细胞迁徙与抑制小鼠结肠癌发展相关性研究

【目的】探讨大黄素抑制小鼠结肠癌发展与影响调节性T细胞(Tregs)迁徙的相关性。【方法】选用BALB/c小鼠随机分为阴性对照组、模型组和大黄素组(剂量为100 mg.kg-1.d-1),后2组采用右前肢腋窝皮下接种CT26细胞制备结肠癌模型;采用流式细胞仪检测Tregs在结肠癌小鼠外周血、引流淋巴结和肿瘤局部的相对比例,以及趋化因子受体CCR4在Tregs的表达量差异,并研究其与肿瘤大小的相关性。【结果】大黄素组的肿瘤质量显著低于模型组(P<0.05),抑瘤率达74%;大黄素组Tregs在肿瘤局部的比例及其CCR4+Tregs的比例显著低于荷瘤模型组(均P<0.01)。【结论】大黄素抑制小鼠结肠癌的发展与其影响Tregs的迁徙相关,其机制与大黄素降低了CCR4在Tregs上的表达有关。

大黄牡丹汤提取液对结肠炎小鼠的治疗及作用机制研究

目的研究大黄牡丹汤提取液对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎小鼠的治疗作用。方法TNBS/乙醇溶液一次性灌肠建立结肠炎小鼠模型,大黄牡丹汤提取液低剂量(0.5 g.L-1)、中剂量(1 g.L-1)、高剂量(2 g.L-1)3个不同剂量灌胃治疗6 d,通过观察小鼠一般情况及结肠病理学变化,检测大黄牡丹汤提取液对结肠炎小鼠的治疗作用。用流式细胞术检测外周血、派氏结、肠系膜淋巴结中Treg细胞的变化,ELISA检测小鼠外周血白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子(TGF-β)的变化。结果与模型组比较,大黄牡丹汤提取液各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、大体评分、病理学评分都有降低趋势。中剂量组小鼠大体评分、病理学评分都明显降低(2.29±0.76,2.86±0.69 VS 5.86±0.90,5.86±1.07,P<0.05),外周血、肠系膜淋巴结、派氏结Treg细胞,外周血IL-10、TGF-β升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄牡丹汤提取液各剂量组对结肠炎小鼠均有一定的治疗作用,治疗的机制可能与提高Treg细胞水平有关。

大黄素对CT26结肠癌小鼠调节性T细胞功能的影响

目的:探讨大黄素对CT26结肠癌小鼠调节性T细胞免疫抑制功能的影响。方法:CT26结肠癌小鼠分为阴性对照组、大黄素治疗组和荷瘤模型组,给药14 d,分别检测以下指标:小鼠不同组织T细胞IFN-γ的分泌、效应细胞CD8+CD3+T细胞的比例、血清细胞因子IFN-γ、TNF-β1、IL-10的水平、不同组织CD4+CD25+Tregs IL-10的分泌。结果:大黄素明显升高CD8+CD3+T细胞在肿瘤局部的比例(P<0.05);大黄素显著提高外周血和淋巴结中T细胞分泌IFN-γ的能力(P<0.05);大黄素显著降低IFN-γ、TNF-β1、IL-10在血清中的水平(P<0.01);大黄素有抑制CD4+CD25+Tregs分泌IL-10的作用(P<0.01)。结论:大黄素可能通过影响Tregs的免疫抑制功能发挥抗肿瘤的作用。

芬戈莫德影响Tregs迁徙与抑制小鼠结肠癌发展的研究

目的探讨芬戈莫德(FTY720)影响调节性T细胞(Tregs)迁徙与抑制小鼠结肠癌发展的关系。方法灌胃给予结肠癌模型小鼠FTY720,检测Tregs在模型小鼠各组织中的相对比例,以及趋化因子受体CCR4在Tregs的表达量,确定Tregs表达与肿瘤大小的相关性;检测混合细胞培养体系中Tregs的相对比例和CCR4m RNA表达,对比CCR4的表达差异,明确FTY720与Tregs迁徙的相关性。结果 FTY720组瘤质量显著低于模型组(P<0.05),FTY720组Tregs在肿瘤组织局部的比例明显小于模型组(P<0.01),其CCR4+Tregs的比例同样低于模型组(P<0.01);FTY720显著降低Tregs在混合培养体系中的百分比,下调CCR4 m RNA的表达,且呈剂量依赖性。结论 FTY720抑制小鼠结肠癌的发展与影响Tregs的迁徙相关,其机制可能与FTY720下调CCR4在Tregs的表达有关。

大黄素对小鼠结肠癌CT26.WT细胞的抑制作用

目的探讨大黄素对小鼠结肠癌细胞CT26.WT的抑制作用。方法 MTT法检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT增殖的抑制作用;细胞划痕实验检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT迁徙的抑制作用;流式细胞仪检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT表达CC族趋化因子受体4(CCR4)和叉头蛋白3(Foxp3)的影响。结果大黄素明显抑制CT26.WT细胞的增殖,加入的大黄素浓度越高抑制效果越好(P<0.05);大黄素抑制CT26.WT细胞的迁徙,抑制效果随浓度升高而愈加明显(P<0.01);大黄素抑制CT26.WT细胞的Foxp3表达,而表达CCR4的肿瘤细胞的比例同样低于不加药组,这种抑制作用与大黄素的药物浓度呈负相关(P<0.01)。结论大黄素抑制小鼠结肠癌的CT26.WT细胞增殖,Foxp3和CCR4在CT26.WT细胞的表达降低,可能是大黄素抑制其迁徙的原故。

不同分子量的枸杞多糖组分对树突状细胞成熟的影响

目的:本研究旨在筛选诱导树突状细胞(DCs)成熟活性最强的枸杞多糖(LBPs)组分。方法:体外诱导培养未度,CBA法检测培养上清中细胞因子(IL-6、IL-10、MCP-1、TNF-α和IFN-γ)的分泌情况。流式细胞术检测LBP3刺激后DCs表著。LBP3可明显上调DCs表面分子CD11c、MHCⅡ、CD80和CD86表达,与对照组相比,差异具有统计学差异(P<0.01)。结论:中等分子量的LBP3是LBPs中诱导DCs成熟的主要活性成分。

一种大鼠腹腔肥大细胞分离方法

目的介绍一种密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞(RPMC)的技术。方法比较改良方法和原方法2种分离的细胞量、活性及纯度。台盼蓝染色检测细胞存活率;甲苯胺蓝染色检测肥大细胞纯度。将弃去密度梯度离心上液2 m(lA方法)与2.5 m(lB方法)比较,以分析弃去的细胞液的量与肥大细胞纯度的关系。用C48/80刺激分离的RPMC,检测细胞释放的β-氨基己糖苷酶和组胺以确定分离的RPMC脱颗粒活性;透视电镜扫描观察细胞。结果改良方法分离的细胞显著多于原方法分离的细胞数;两种方法分离的细胞存活率都在99%以上;肥大细胞纯度都在90%以上。C48/80刺激RPMC,分离的细胞释放大量的β-氨基己糖苷酶和组胺,高于空白对照组。电镜观察细胞具有明显的肥大细胞形态。结论改良的Percoll密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞的方法可行。

香菇多糖对树突状细胞代谢的影响

目的利用代谢组学的方法研究香菇多糖(lentinan,LNT)对树突状细胞(dendritic cell,DC)代谢的影响,揭示其调节DC功能的潜在机制。方法将DC2.4细胞与LNT共孵育24 h,采用MTT比色法检测DC2.4细胞活性;采用ELISA检测细胞上清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)含量;利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)检测DC2.4细胞代谢谱变化,再采用多远协变量与生物信息学、偏最小二乘法-判别分析(artial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)分析差异代谢物,最后通过MetaboAnalyst 5.0进行代谢通路分析。结果LNT在实验剂量(25~100 mg·L^(-1))下对DC2.4细胞活性无明显抑制作用;LNT(100 mg·L^(-1))可以明显刺激DC2.4细胞分泌IL-6、TNF-α和IL-12;DC2.4细胞经LNT(100 mg·L^(-1))刺激后,可鉴定出20种差异代谢物,涉及尿素循环、精氨酸和脯氨酸代谢等在内的25条氨基酸代谢通路。结论LNT对DC功能的调节机制涉及多种氨基酸代谢途径。

课程思政融入中医诊断学理论与实践结合教学方法初探

开展课程思政是各高校学科教育的必然要求,是实现全过程、全方位育人的必然选择。中医诊断学是中医基础课和临床各科之间的一门桥梁课程,具有课程内容多、知识点广泛、实践性强的特点。在教学过程中,需要理论教学与实践教学两手抓。文章探讨了如何在中医诊断学的理论、实践教学过程中,融入课程思政教育,提高学生的综合素质,培养学生的医德医风,引导学生做新时代的好青年。为全面推进课程思政,实现新时代立德树人的要求提供思路与借鉴。

骨宝丸对维甲酸诱导小鼠骨质疏松的防治作用及机制探讨

目的研究骨宝丸对维甲酸诱导小鼠骨质疏松的防治作用,并探讨相关作用机制。方法将雌性BALB/c小鼠分为正常组(Control)、模型组(Model)以及骨宝丸高剂量组(GBW-H)、中剂量组(GBW-M)和低剂量组(GBW-L)。实验第1~30天,模型组和骨宝丸各剂量组小鼠灌服维甲酸(100 mg/kg)建立骨质疏松模型,同时骨宝丸各剂量组小鼠灌服药物溶液进行防治。实验结束后,取小鼠股骨,称取质量、测量股骨直径和股骨长度;利用HE染色法在光学显微镜下观察股骨组织变化;利用Micro-CT检测骨密度;采用ELISA试剂盒检测血清中BMP-2、OC、BALP、P1NP分泌水平。结果骨宝丸对维甲酸导致的小鼠股骨的质量、直径、骨密度和骨髓组织减少有防治作用,而且骨宝丸对维甲酸诱导小鼠血清OC和P1NP分泌增加、BALP和BMP-2分泌减少均有拮抗作用。结论骨宝丸可防治维甲酸诱导的小鼠骨质疏松,其作用机制可能与保护BMP-2分泌进而促进骨形成有关。