癌基因与抗癌基因

本文从癌基因和抗癌基因两个领域概述了目前国内外的研究成果和方向。癌基因的研究不但可使人们从分子水平认识肿瘤多阶段发展的机理以及细胞生长、分化调节的机制,而且还有可能对肿瘤的诊断、预后判断及生物化学治疗起推动作用。抗癌基因(或称抑癌基因)则是参与维持细胞正常功能的另一组基因。虽然目前识别、克隆出的抗癌基因不多,它们的生物功能也不十分清楚,但是可以预见抗癌基因的研究必将极大地促进细胞功能调控及肿瘤基因治疗研究的发展。

一种测定癌基因c-Ha-ras点突变的简易方法——PCR-RFLP法

利用多聚酶DNA链延伸反应与限制性内切酶酶解片段长度多态性分析相结合,可简单、迅速、准确地对胃癌组织及细胞株DNA中癌基因c-Ha-ras第12位密码子是否存在点突变进行测定。这个方法是使用非同位素方法对单拷贝基因点突变进行检测的首次报道。

乳腺癌患者外周血清中APC基因启动子甲基化异常的检测及其意义

背景与目的:检测肿瘤患者外周血中肿瘤相关标志物是当前肿瘤研究的热点之一,恶性肿瘤患者外周血中存在游离的肿瘤相关DNA已引起肿瘤学界的极大关注,人们曾在多种肿瘤患者血清中发现与原发肿瘤相同的DNA变异。本研究以APC(adenomatouspolyposiscoli)基因启动子甲基化作为肿瘤标志物,探讨乳腺癌患者外周血清中游离的肿瘤相关DNA与肿瘤组织及临床病理参数的相关性。方法:采用甲基化特异性PCR(methylationspecific-PCR,MSP)方法分别检测84例乳腺癌组织、癌旁正常腺体组织及外周血清中游离DNAAPC基因启动子甲基化状况。结果:84例乳腺癌组织APC基因启动子甲基化频率为45.2%(38/84),相应外周血清中同样DNA变异阳性检出率为31.0%(26/84)。外周血清中DNA甲基化变异与肿瘤组织的甲基化状况显著相关(r=0.977,P0.002)。检测外周血清中APC基因甲基化的敏感性为68.4%,特异性为97.8%肿瘤组织及外周血清中游离DNA甲基化异常与临床分期、病理类型、肿块大小及受体状况无相关性(P>0.05)。肿瘤组织未检测到甲基化患者的血清中及健康人血清中均未检测到该基因甲基化变异。结论:乳腺癌患者外周血清中肿瘤相关DNA甲基化与肿瘤组织中相同基因的变异显著相关。

PCR-RFLP 方法测定 ras 癌基因点突变

曾使用 PCR-RFLP 方法分析过 c-Ha-ras 癌基因第12密码子的点突变.因N-ras 基因第12位密码子、K-ras 基因第12和13位密码子无已知的限制性内切酶的酶切位点,不能使用 PCR-RFLP 方法分析这些位点的突变.在 PCR 引物的3′端引入一个误配的碱基使之正好成为某限制性内切酶的酶切位点,这样便能使用PCR-RFLP 技术分析 c-Ha-ras 基因第61位、N-ras 基因第12位、K-ras 基因第12和13位密码子的点突变.

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增的研究

如何从石蜡包埋组织中高质量的提取DNA从而进行分子生物学特别是基因工程方面的科研工作,目前在国内尚未见报道。我们采用二甲苯或水浴法对2块胃癌石蜡包埋组织进行脱蜡,并提取、纯化了DNA,进行PCR扩增,获得了成功。另外对用甲醛浸泡的组织其DNA的受损程度与上述进行了比较,现报告如下。

儿童急性淋巴细胞白血病CASP8AP2基因启动子甲基化水平及其临床意义

目的:研究半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8相关蛋白2(Caspase 8 associated protein 2,CASP8AP2)基因在儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)初诊和缓解时的启动子区Cp G位点的甲基化水平,及其与儿童ALL临床特征、预后的关系。方法:收集2007年8月到2010年3月于我院就诊的109例ALL患儿的初诊DNA样本,及其中94例患儿的缓解期DNA标本。DNA样本经硫化处理后,用本研究组建立的甲基化荧光法,测定CASP8AP2基因转录起始点上游的两个关键Cp G位点(-1189和-1176)的甲基化水平。结果:初诊患儿CASP8AP2基因启动子区上述2个位点的平均甲基化水平为(71.1±1.7)%,高于缓解患儿的样本(64.2±21.2%)(P=0.008)。受试者工作特征曲线下面积为0.687(P=0.024),说明这2个位点的甲基化水平具有一定的预测复发的能力。以76.9%为分界点,将初诊患儿分为高甲基化组(49例)和低甲基化组(60例)。高甲基化患儿更容易出现复发(20.4%vs 6.7%)(P=0.044),5年无复发生存率明显低于低甲基化组(Log rank,P=0.033)。初诊高甲基化与巩固治疗前微小残留病(minimal residual disease,MRD)高水平相关(P=0.011)。诱导缓解治疗后MRD≥10-4的34例患儿中,高甲基化患儿的复发率明显高于低甲基化患儿(8/16例vs 3/18例,P=0.038)。结论:CASP8AP2基因启动子区-1189和-1176两个Cp G位点的异常高甲基化可能与儿童ALL的发病相关,且高甲基化患儿的预后较差;将上述位点的甲基化水平与诱导缓解治疗结束时MRD水平相结合,能够更好地预测复发。

白血病患者外周血细胞bcr重排的研究

１６例正常人，１６例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ），１１例急性粒细胞白血病（ＡＭＬ），２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）和１例慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）病人外周血白细胞ＤＮＡ，分别ＢｇｌⅡ或ＢａｍＨＩ酶切后与１．２ｋｂＢｇｌⅡ／ＨｉｎｄⅢ３，ｂｃｒ探针作分子杂交。结果在２例ＡＬＬ、１例ＡＭＬ和２例ＣＭＬ中检出ｂｃｒ重排，其中２例ＡＬＬ和１例ＣＭＬ属于高危白血病患者，并在短期内死亡。这提示ｂｃｒ重排可能与不良的预后有联系。对白血病患者ｂｃｒ重排检测的意义进行了讨论。

消化道肿瘤组织原癌基因c-erbB-2的扩增与重排(简报)

癌症是一种获得性基因异常疾病。原癌基因c-erbB-2位于人染色体17q21,可编码一个性质极类似人表皮生长因子受体的蛋白,并具有酪氨酸激酶活性。国外许多研究报告表明,原癌基因c-erbB-2在乳腺癌的扩增程度与患者术后的存活率有显著的相关性,因此可能作为乳腺癌的一项预后指标,但在消化道恶性肿瘤中尚难得到肯定。本文应用Southern印迹。

癌基因激活与肿瘤的诊断及预后

近年来随着癌基因研究的不断深入,许多分子生物学家都在寻找癌基因激活与肿瘤临床行为的关系。一些研究结果显示,某些癌基因检测可用于诊断或有可能成为早期监测肿瘤发生的指标;一些癌基因激活与肿瘤的预后有关。

HER-2原癌基因在乳腺癌中的异常表达

采用分子杂交技术检测２例人原发性乳腺癌ＨＥＲ－２原癌基因ＤＮＡ及ＲＮＡ水平的改变。结果该基因在肿瘤组织未见扩增与重排，但其中１例在ＲＮＡ水平却异常表达，推测这种现象可能与该基因转录调控的失调有关。提示ＨＥＲ－２原癌基因的激活亦可能依赖其转录途径完成。

应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因c-Ha-ras第12位密码点突变测定

本文初步建立了以胃癌石蜡切片组织为材料,应用PCR—RFLP法对癌基因c-Ha-ras第12位密码点突变进行测定的技术,这一技术方法的建立,对于肿瘤研究方面,在进一步扩大基础理论研究和临床的联系上有一定的意义。

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增

对石蜡色埋组织用二甲苯或水浴法脱石蜡,乙醇进行梯度水化,溶液A裂解细胞,对经抽提、纯化后的DNA进行PCR扩增,获得了较满意的效果。同时对石蜡包埋组织与甲醛浸泡组织中的DNA受损程度进行了比较,此工作为能使肿瘤等症病将在基因水平上进行回顾性分析提供了一个良好开端.

胃癌和癌旁组织癌基因c—Ha—ras第12位密码点突变测定的研究

本文利用PCR—RFLP法,测定了18例胃癌和18例癌旁组织的癌基因cHa-ras第12位密码子点突变。结果表明,胃癌点突变率为39％,癌旁组织点突变率为11％,其中癌旁组织所能测出的点突变在同一标本来源的胃癌组织中也可测出。因此,对于癌瘤的诊断,我们应尽早地创立一种更灵敏、更准确的能检测出癌早期细胞中基因改变的分子生物学的诊断方法。

胃癌手术前后血浆中p16基因的异常甲基化检测

目的:研究胃癌患者手术前后外周血浆、对应原发肿瘤以及癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的检出状况,探讨其在胃癌疗效评估中的应用.方法:采用甲基化特异性PGR方法,扩增84例胃癌患者的原发肿瘤、癌旁组织、手术前血浆中pl6基因启动子区,以及上述患者中30例行胃癌根治性手术患者术后14～21天血浆中p16基因启动子区,以15例健康人血浆作为正常对照.采用凝胶电泳-溴乙锭显色以及高效液相色谱两种方法检测产物.结果:84例患者样品中,原发肿瘤中存在pl6基因异常甲基化26例(31.0%),癌旁组织中阳性2例(0.02%),术前血浆中阳性12例(14.3%),15例健康人血浆检测均为阴性.患者血浆阳性者同时也存在对应肿瘤组织阳性.30例同时有手术前后血浆标本的胃癌根治手术患者中,原发肿瘤组织中p16异常甲基化14例,其中6例术前血浆阳性,术后5例转阴.在检测样本中,高效液相色谱的检测结果与凝胶电泳-溴乙锭显色结果一致.结论:胃癌患者外周血浆中可以检测到与原发肿瘤一致的p16异常甲基化,手术后血浆中p16甲基化状态的变化与手术治疗有关,高效液相色谱作为一种便捷的技术可以应用于PCR产物的检测.

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况。方法:从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照。结果:96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变。肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性。结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一。

反向表达癌基因Ha-ras载体的体外重组

反义RNA是近年来研究基因表达调控的新领域,它可以特异性地抑制核苷酸顺序与之互补的RNA的表达。本实验利用DNA重组技术,将从胃癌细胞系BGC 823中克隆出的转化基因Ha-ras第一外显子及其5′端上游区反向重组入真核表达载体pECE的SV40启动子之后,此质粒具备在真核细胞中表达的所有条件,从而为进一步研究反义RNA对Ha-ras基因恶性功能的抑制作用打下基础。

转化相关蛋白p86的鉴定

以转化细胞Rat3-3免疫大鼠,获得单克隆抗体E5(MeAb E5)。其对应抗原耐热,是分子量为86kD的蛋白质(P86)。它在c-Ha-ras癌基因转化的细胞上均有较高的阳性表达,而在其相应的非转化细胞上含量甚微。以人工合成的反义c-Ha-ras寡聚核苷酸As-Ⅱ处理Rat3-3细胞,该细胞生长受抑(44.2％),,此对p86的表达亦降低(39.1％)。P86在五种人胃癌细胞系中均有较高表达,在原发胃癌及其转移灶中阳性率达82.6％。p86不仅是一种与C-Ha-ras转化相关的蛋白,而且为胃癌相关抗原。

大鼠实验性腺胃粘膜癌变过程中Ha－ras基因第12位密码子点突变的研究

大鼠实验性腺胃粘膜癌变过程中Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变的研究李春启，刘为纹，吕有勇，张青云，邓国仁，房殿春（第三军医大学西南医院消化内科）６３００３８癌基因的激活和抗癌基因的失活是肿瘤发生、发展的分子基础。ｒａｓ基因家族是目前研究得较深入的...

人胃癌细胞系中p53抑癌基因变异的检测及其序列分析

ｐ５３抑癌基因由于点突变，缺失或易位等方式而丧失活性是多种肿瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应─—单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法，对四种人胃癌细胞系ＭＧＣ８０３，ＢＧＣ８２３，ＧＣ７９０１和ＰＡＭＣ－８２中ｐ５３基因的第５、６、７、８四个外显子进行检测，结果发现，ＰＡＭＣ－８２的第５和第８外显子，ＧＣ７９０１的第６外显子存在突变。ＰＣＲ－直接测序证明，它们分别在１７４位、２８０位、２０４位密码子发生缺失Ｇ，ＧＣ→ＣＧ，ＡＴ→ＣＧ转变，因而可使其编码的ｐ５３蛋白分别发生移码突变，Ａｒｇ→Ｔｈｒ，Ｇｌｕ→Ａｌａ，而丧失肿瘤抑制功能。实验结果表明，ｐ５３基因在胃癌发生发展过程中，尤其是较晚阶段具有重要作用。

ras基因突变与人类肿瘤

自八十年代发现ras基因以来,科学家们对ras基因激活在肿瘤发生发展中的作用作了深入的研究。目前已在多种人类肿瘤中发现ras基因的激活,激活的主要方式是点寒变。ras基因突变在肿瘤发生的分子机制中起到了十分重要的作用,所以ras基因突变的研究已成为目前研究的焦点之一。