HBP21抑制胰岛素诱导的PI3K/AKT信号通路机制

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肝细胞癌中处于异常激活的状态,并且促进癌症的发生发展.在肝细胞癌中,热休克蛋白HSP70结合蛋白21(Hsp70 binding protein 21,HBP21)处于低表达状态,过表达HBP21显著诱发癌细胞发生凋亡.利用qRT-PCR技术检测肝癌组织中HBP21的mRNA水平,发现癌组织中HBP21的mRNA水平要低于癌旁组织.用胰岛素处理肝癌细胞Huh7以激活细胞内PI3K/AKT信号通路,采用qRT-PCR技术和蛋白免疫印迹实验检测细胞内HBP21的转录和翻译水平,随着胰岛素处理时间的延长,HBP21的mRNA水平和蛋白水平都呈现下降趋势.在Huh7内过表达HBP21显著抑制胰岛素诱导的AKT和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化;通过泛素化实验和蛋白免疫印迹实验发现,HBP21不影响AKT的K48及K63位泛素化及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的蛋白水平.利用抑制剂LY294002处理Huh7细胞,确定HBP21作用于PI3K/AKT信号通路.进一步研究发现,HBP21不影响IRS1和IRS2的mRNA水平,而是抑制胰岛素受体β亚基(insulin receptor beta,IRβ)的磷酸化进而影响PI3K/AKT信号通路的活化.在Huh7细胞中,HBP21抑制肝癌细胞中异常活化的PI3K/AKT发挥着重要作用.HBP21在肝细胞癌中的缺失表达,以及其抑制PI3K/AKT信号通路使其有可能成为潜在治疗癌症的靶点.

乙型肝炎病毒促进肝细胞PD-L1蛋白表达机理

为了研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)能否借助肿瘤细胞的抗免疫机制来逃逸机体免疫,利用HBV感染去肝细胞,研究受感染后的肝细胞对宿主免疫应答的变化.通过实时荧光定量PCR的方法分析HBV感染后的肝细胞内Axin和PD-L1的转录水平,发现HBV不影响Axin和PD-L1的转录水平,采用蛋白免疫印迹技术发现HBV能下调肝细胞内Axin蛋白水平,同时上调PD-L1蛋白水平.进一步在细胞内转染表达HBV的组成蛋白的质粒,通过蛋白免疫印迹技术发现HBV的组成蛋白HBx能下调细胞内Axin蛋白的表达.通过数据相关性分析以及泛素化实验发现,Axin能通过增加PD-L1的E3泛素连接酶SPOP的表达,促进PD-L1泛素蛋白酶体降解.进一步对PD-L1的泛素化方式进行探讨,发现Axin促进PD-L1的K48依赖的泛素化降解作用.结果表明,HBV可能通过HBx下调Axin和SPOP蛋白水平,抑制PD-L1泛素化降解,进而逃逸宿主免疫应答.本研究揭示了HBV免疫逃逸新机制,为治疗HBV奠定了新的基础,在一定程度上推动了抗HBV药物开发.

USP18促进溶瘤病毒诱导的肝癌细胞凋亡机制

NDV感染肝癌细胞后,能够诱导细胞的凋亡,在NDV感染肝癌细胞Huh7之后,能够诱导一种去泛素化酶USP18的表达显著上调.为了探究USP18在NDV诱导的肝癌细胞的凋亡过程中起什么作用,以肝癌细胞系Huh7为实验体系,以western blot蛋白免疫印迹和定量PCR为主要方法.在细胞中过表达USP18,发现其能够明显促进肝癌细胞的凋亡,这表明USP18具有抗癌的功能.反之,敲低细胞中USP18的表达水平,能够有效地抑制NDV诱导的肝癌细胞凋亡.进一步揭示了USP18促进NDV诱导的细胞凋亡的机制,USP18上调了定位于线粒体上的Bax的蛋白水平,Bax能与Bak在线粒体外膜上形成孔道,增加线粒体外膜的通透性,从而促进凋亡蛋白细胞色素C的释放.同时,USP18还能诱导NOXA切割效应凋亡蛋白Caspase-7,进一步促进细胞凋亡.此外,USP18上调干扰素刺激基因ISG12a(IFN-stimulated gene 12a)的蛋白水平,抑制ISG12a的泛素化降解,这也是从另一个角度解释了其促进凋亡作用.

小鼠肥胖介导的肠道炎症反应与肠癌发病关系研究

探讨TNF-α激发Wnt/β-catenin信号通路介导的结肠癌形成与发展机制,以及姜黄素作为肥胖预防药物的抗炎抗癌的作用。通过建立高脂饮食诱导的肥胖模型,以及氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)诱导的结肠癌模型;并结合天然药物姜黄素治疗结肠炎和癌症,采用RT-PCR、Western blot等技术检测肥胖相关炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10以及Wnt/β-catenin信号通路中p-GSK-3β和β-catenin的表达情况,采用HE染色法观察各组结肠组织病理结构。实验结果表明:肥胖组炎症状态比较明显,与结肠癌模型组各个指标都接近。姜黄素组有缓解肥胖引起的炎症以及氧化偶氮甲烷引起的结肠组织损伤。因此,肥胖诱导的炎症,可能通过TNF-α激发Wnt/β-catenin信号通路,导致p-GSK-3β和β-catenin的积累,从而诱发结肠癌。

PD-L1和BAFF-R在胃弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的探讨程序性死亡蛋白受体-1配体(programmed death ligand-1, PD-L1)和TNF家族的B细胞活化因子(B cell-activating factor belonging to the TNF family, BAFF-R)在胃弥漫性大B细胞淋巴瘤(gastric diffuse large B-cell lymphoma, GDLBCL)的瘤组织和瘤旁组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和定量逆转录-聚合酶链反应法(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测26例GDLBCL瘤组织和瘤旁组织中的PD-L1和BAFF-R的表达,分析PD-L1和BAFF-R的表达与GDLBCL临床分期和病理分型之间的关系和PD-L1与BAFF-R表达的相关性。结果 PD-L1和BAFF-R在GDLBCL中的表达显著高于瘤旁组织(P<0.01)。PD-L1和BAFF-R表达与GDLBCL分期及病理分型均有明显相关性(P<0.01),PD-L1与BAFF-R有相关性(P<0.01)。结论 PDL-1和BAFF-R表达上调与GDLBCL分期及病理分型密切相关,联合检测PD-L1和BAFF-R可能成为GDLBCL有价值的预后指标。以PD-L1和BAFF-R信号通路为靶点的治疗有望成为GDLBLC免疫治疗的潜在方案。

长非编码RNA基因Z38对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响

为探讨稳定干扰长非编码RNA基因Z38对乳腺癌细胞BT549的影响,向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选获得稳定干扰的细胞,采用RT-PCR检测Z38的表达水平、MTT法检测细胞增殖及耐药性、克隆法检测细胞集落形成能力、碘化丙啶染色方法分析细胞周期、流式细胞术分析肿瘤干细胞标志物CD44和CD24的表达.结果表明,特异性的慢病毒能显著降低Z38表达水平,使细胞增殖能力、抗化疗药物能力及细胞集落形成能力显著降低,导致G_2/M期细胞数目显著减少,细胞周期受阻,并且显著降低了CD44^+/CD24^-细胞群百分比而导致细胞的肿瘤干细胞特性降低.

TRIM28通过抑制干扰素JAK-STAT信号通路促进乙肝病毒复制机制

对TRIM28和乙肝病毒(HBV)持续感染之间的联系进行了初步探讨.研究发现,在支持HBV感染和复制的人肝细胞HLCZ01中,过表达TRIM28抑制α-干扰素(IFN-α)的抗HBV作用,且降低了干扰素诱导基因(ISGs)的表达水平;而在细胞内沉默TRIM28则增强IFN-α的抗HBV作用,并且上调多种ISGs的表达.在HBV复制的HepG2.2.15中,也得到了类似的实验结果.在HLCZ01细胞内,TRIM28仅抑制IFN诱导的ISGs产生,但不影响IFN上游信号分子STAT1与STAT2的磷酸化水平.TRIM28的表达水平在乙肝病人肝组织中显著高于正常人肝组织,同时HBV感染HLCZ01细胞后,使得细胞内TRIM28表达水平上调.研究结果表明,TRIM28通过抑制JAK-STAT信号通路来减弱IFN-α的抗HBV作用,并且HBV可能通过上调TRIM28的表达来实现其免疫逃逸,为研究HBV的慢性感染机制提供了新思路.

长链非编码RNALINC00673和ISG15蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA LINC00673和ISG15蛋白在胰腺癌组织中的表达情况及其临床意义。方法回顾性分析2014年1月至2018年12月在中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的经病理诊断为胰腺导管癌(PDAC)的57例患者临床资料。采用定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胰腺癌组织和瘤旁正常组织(距癌组织边缘3 cm以内)中LINC00673的相对表达量, 采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织和癌旁正常组织中ISG15蛋白的表达情况。比较ISG15蛋白阳性和阴性患者间LINC00673表达差异, 采用Spearman等级相关分析法分析LINC00673和ISG15蛋白表达的相关性, 分析二者与胰腺癌患者临床分期和病理分型的关系。结果胰腺癌组织ISG15蛋白阳性表达率为40.4%(23/57), 高于癌旁正常组织的15.8%(9/57)(χ^(2)=7.90, P=0.004), 胰腺癌组织LINC00673相对表达量为0.99±0.36, 低于癌旁正常组织的1.26±0.41(t=4.80, P<0.001)。ISG15阳性23例(40.4%), ISG15阴性34例(59.7%), ISG15阳性和阴性患者LINC00673的相对表达量分别为0.77±0.46、0.45±0.27(P<0.001)。Spearman法分析显示LINC00673和ISG15蛋白表达有相关性(ρ=-0.429, P=0.001)。低或未分化、血管侵犯、淋巴结转移患者LINC00673相对表达量均降低(均P<0.05), LINC00673相对表达量与患者性别、年龄、肿瘤部位、术前CA199水平、TNM分期均无关(均P>0.05);低或未分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、血管侵犯、淋巴结转移患者ISG15蛋白表达水平均升高(均P<0.05), ISG15蛋白表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位和术前CA199水平均无关(均P>0.05)。结论 LINC00673在胰腺癌中的表达与血管侵犯、肿瘤分化程度和淋巴结转移相关, ISG15在胰腺癌中表达与血管侵犯、肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关。联合检测LINC00673和ISG15蛋白可作为胰腺癌有价值的预后指标。以LINC00673和ISG15蛋白信号通路为靶点的治疗有望成为胰腺癌免疫治疗的潜在方案。