碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮生长因子 (EGF)对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法 :用体外细胞培养技术和噻唑蓝 (MTT)比色法 ,观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果 :0 .1～ 10 0ng/mLbFGF、0 .1～ 10ng/mLEGF对细胞有促增殖作用 ,并呈浓度依赖性 ,两种生长因子均在 10ng/mL浓度时作用最强 ,并于培养第 5d达到促增殖高峰。结论

Beyond冷光美白牙齿的疗效及安全性评价

目的评价Beyond冷光美白术漂白着色牙-黄牙(含先天黄牙、增龄性变色牙)和四环素牙的疗效及安全性。方法用Beyond冷光美白仪及配套的冷光美白剂对31例(496颗)黄牙、34例(544颗)四环素牙进行漂白。以第二双尖牙为空白对照。用VITA比色板作脱色前后比较,分析脱色效果;观察术中、术后患者敏感情况,术中牙龈损伤情况。结果黄牙组平均提高6.32个色阶,有效率100.0%。四环素牙平均提高5.37个色阶,有效率98.5%。术中约84.6%的患者有程度不等的牙齿敏感症状,术后约89.2%的患者有不同程度牙齿敏感症状,约13.8%的患者出现牙髓刺激症状,24～72h可自动消除。约10.5%的患牙术中出现牙龈灼伤。结论Beyond冷光美白术对黄牙脱色疗效显著;对轻、中度四环素牙脱色明显,对重度四环素牙疗效欠佳。该产品对牙髓有一定刺激性,为短时性、一过性。

牙齿非龋性颈部损害的病因

牙齿非龋性颈部损害 (NCCL)的临床发病率高 ,形态多样。其发病为多因素作用的结果。酸蚀、磨损、牙合力被认为是导致NCCL的主要病因 。

TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化

目的 :探讨TGFβ、rhBMP - 2体外诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力。 方法 :取妊娠 12 .5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞 ,分别在含 60、10 0mmol/L的TGF - β和 1.6、3 .2mmol/L的rhBMP- 2的DMEM/F12中培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化 ,免疫组化鉴定细胞性质。结果 :培养 2d ,60pmol/L的TGF - β组细胞形态发生明显变化 ,细胞变得大而扁平 ,培养 4d ,免疫组化鉴定约 70 %的细胞分化为平滑肌细胞。rhBMP - 2组细胞形态未见明显改变 ,1.6nmol/L组免疫组化鉴定约 5 %的细胞分化为平滑肌细胞 ,未能诱导分化出神经元细胞。未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化。结论 :TGFβ、rhBMP

Forskolin体外诱导Balb/c小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化

目的 :探讨forskolin诱导小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞的分化过程。方法 :取妊娠 12 .5d胎鼠第 3代下颌外胚间充质细胞 ,分别在含 5、2 5、5 0 μmol/Lforskolin的DMEM/F12 培养基中培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化 ,免疫组化鉴定细胞性质。结果 :培养 2d ,细胞形态及排列发生明显变化 ,呈两突的长梭形 ;胞体中有空泡样改变 ,随时间的增加而明显。变化以 2 5 μmol/L组较明显。免疫组化鉴定 :抗神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)及S - 10 0染色阳性 ;NSE及NF染色阴性。结论 :forskolin可诱导外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化。

Root ZX根尖电测仪测定根管长度的准确性评价

目的:评价RootZX根尖电测仪测定根管长度的准确性。方法:49颗(70个根管)根尖发育完全、因正畸 需拔除的牙齿在局麻下,开髓、拔髓。RootZX根尖电测仪测定根管长度,拔除后测定根管实长,比较二者的差异。 分别以0.5mm、1.0mm、1.5mm误差评定测量结果的准确性。结果:体内测量平均根管长度为20.81mm,体外测 量根管实际长度为21.21mm。84.29%(59/70)测量值位于根管内,8.57%(6/70)恰好位于根尖孔,7.14%(5/70) 超出根尖孔。以0.5mm为标准,准确率为64.29%,以1.0mm为标准,准确率为81.43%。若以1.5mm以内为可 接受范围,则准确率为90%。结论:RootZX根尖电测仪能较准确测定根管工作长度,提高根管治疗的质量和工作 效率。但仍需和X线照片结合指导临床工作。

酶消化法培养Balb/c胎鼠下颌突未分化外胚间充质细胞

目的 :用酶消化法培养Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞 ,并与组织块法相比较 ,研究其形态和生长特性。方法 :采用 1.2 5 g/L的胰酶消化法获取E 12 .5dBalb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞 ,用含 10 6U/LLIF的D/F12 培养细胞 ,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况 ,免疫组化鉴定细胞来源及分化状况。结果 :培养的细胞呈单层生长 ,长梭形 ,有 2～ 4个突起 ,抗HNK - 1、Vimentin、S - 10 0、NSE染色阳性 ,抗GFAP、NF、MA染色阴性 ,证实为未分化外胚间充质细胞。结论 :用酶消化法可在短期内获得大量的未分化外胚间充质细胞。

牙髓状态对Root ZX根尖电测仪准确性的影响

目的:评价牙髓状态对Root ZX根尖电测仪测定根管长度准确性的影响。方法:选择根尖发育完全,因正畸、牙周疾病及义齿修复需拔除的单根牙,利用活力检测仪测定牙髓状态,获得活髓牙及死髓牙各31例。开髓,分别在保存牙髓及拔除牙髓后,Root ZX根尖电测仪测定根管长度,然后拔除该牙测定根管实长,比较牙髓存在前后测量长度与实际长度间的差别。结果:活髓牙牙髓存在时根管测量长度为(19.95±1.77)mm,拔髓后测量长度为(20.04±1.79)mm,拔牙后根管实际长度为(20.39±2.01)mm。死髓牙拔髓前根管测量长度为(19.72±1.77)mm,拔髓后测量长度为(19.80±1.76)mm,拔牙后根管实际长度为(20.12±1.74)mm。拔髓前/后与实际长度比较均没有显著差异(P>0.05)。以0.5 mm准确标准,活髓牙拔髓前/后准确率分别是61.29%和64.52%,死髓牙拔髓前/后准确率分别是64.52%和67.74%。拔髓前/后及活髓/死髓牙准确率均无显著差异(P>0.05)。结论:牙髓状态及牙髓存在与否对Root ZX根尖电测仪测定根管工作长度的准确性没有明显的影响。

胚胎面突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化的可能性。 方法 将妊娠 5 0天人胚胎面突外胚间充质干细胞 ,培养于含 10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、10 0 μg/ml维生素 C、10 nmol/L地塞米松和 15 %胎牛血清的DMEM矿化诱导液中。相差显微镜下观察细胞的形态变化 ,免疫组织化学检测 型胶原的表达 ,碱性磷酸酶活性检测 ,矿化结节 Von Kossa染色 ,逆转录聚合酶链反应 ( reverse transcription- polymerase chain reaction,RT- PCR)检测骨钙素的表达。 结果 诱导 3天 ,细胞体积变大 ,由成纤维样变扁平 ,密集处细胞呈多边形、立方形 ,抗 型胶原染色阳性 ,碱性磷酸酶活性增高 ;15天后有矿化结节形成 ;2 5天 Von Kossa染色阳性。RT- PCR显示诱导细胞表达成骨细胞特异的骨钙素。

DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的浓度优化

目的探讨牙本质非胶原蛋白(DNCP)诱导大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的最适浓度。方法取妊娠12.5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,DNCP诱导浓度分别为10、50、100、200、500、1 000μg/mL,观察细胞形态变化,诱导6d后采用定量RT-PCR检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达。结果6d后除10μg/mL组和1000μg/mL组外,其他诱导组细胞出现极性改变,部分细胞出现平行排列趋势;细胞表达DSPP和DMP1,以200μg/mL组最强,500μg/mL组和200μg/mL组表达量相当,而1 000μg/mL组细胞死亡。结论在DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中过低浓度不利于成牙本质细胞的分化,而过高浓度则引起细胞死亡。200μg/mL是较为合适的有效诱导浓度。

诱导成牙本质样细胞在体内外的矿化研究

目的 :人早期胚胎颌突外胚间充质细胞在体外能被诱导分化为成牙本质样细胞 ,表达牙本质特异的涎磷蛋白。本研究探讨该诱导分化细胞在体内外矿化的可能。方法 :转化生长因子 - β1(TGF - β1)和牙本质非胶原蛋白 (DNCP)作用于三维培养的外胚间充质细胞 ,诱导 10d ,然后将诱导的成牙本质样细胞接种于裸鼠皮下 ,X线照相 ,组织切片 ,HE染色 ,观察细胞在体内的矿化情况。同时消化细胞 ,培养于矿化液中 ,观察细胞在体外的矿化能力。结果 :8周后 ,裸鼠皮下接种的胶原细胞密度明显高于对照组。 5周 ,胶原内的细胞为单极长突起 ;8周时 ,细胞周围可见牙本质样基质结构沉积。矿化液中的细胞 3d出现复层生长 ,2 1d ,VonKossa染色阳性。结论 :诱导的成牙本质样细胞在体内可以形成类似牙本质样基质 ,在体外能形成矿化结节 ,为有功能的终末分化的成牙本质细胞。

端粒酶在面突外胚间充质细胞干细胞中的表达

目的 :探讨面突外胚间充质干细胞的端粒酶活性状况 .方法 :体外培养妊娠 5 0d人胚胎面突外胚间充质干细胞 ,白血病抑制因子 (LIF)抑制细胞分化 ,于第 1,8,15和第2 2代免疫组化检测人端粒酶逆转录酶 (hTERT)的表达并进行图像分析 ,同时检测无LIF抑制下 ,第 5代细胞自发分化 10d端粒酶逆转录酶的表达情况 .结果 :外胚间充质干细胞表达端粒酶逆转录酶 ,表达强度随传代次数的增多而下降 .在分化状态 ,该细胞不再表达端粒酶逆转录酶 .结论 :早期胚胎面突外胚间充质干细胞具有较高的端粒酶活性 。

外胚间充质干细胞永生化的实验研究

目的 :探讨端粒酶催化亚基 (hTERT)在外胚间充质干细胞永生化中的作用。方法 :质粒pCI neo -hTERT转染外胚间充质干细胞 ,经G4 18筛选后获得抗性克隆。免疫细胞化学法及图像分析检测hTERT的表达 ,累计生长曲线检测细胞增殖能力。结果 :转染后获 3个抗性克隆。转染第 3代细胞hTERT染色呈强阳性 ,转染后第 15代细胞hTERT活性较正常培养的第 15代细胞明显增强。转染细胞增殖能力有不同程度的增加 ,其中克隆 2越过衰老期 ,寿命延长。结论 :外源性hTERT介入可重建外胚间充质干细胞的端粒酶活性 ,使细胞延长寿命 ,得以永生。

外胚间充质在牙胚形成中的作用及信号调控

颅神经嵴来源的外胚间充质经过定向分化 ,可形成牙、上下颌骨等组织结构。在牙胚形成过程中 ,一系列信号分子在上下颌突上皮———外胚间充质之间进行信息传递 ,相互协同 ,相互制约。其中骨形成蛋白 (Bmps)及成纤维细胞生长因子 (Fgfs)在牙齿发育中起重要作用。

多种生长因子对胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的诱导作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)、TGFβ1+DNCP、肝素+胰岛素样生长因子1(IGF-1)在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法:取妊娠12.5 d SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质细胞(第4代),在转化生长因子β1(TGFβ1)(2 ng/mL)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)(100μg/mL)、TGFβ1(2 ng/mL)+DNCP(100μg/mL)、肝素(1μg/mL)+IGF-1(100 ng/mL)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,探索生长因子在外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。结果:6 d后,在DNCP、TGFβ1+DNCP作用下,胎鼠面突外胚间充质细胞出现明显的形态改变,细胞由成纤维样变为梭形,部分核极化,有很长的突起,部分细胞呈现平行排列趋势。TGFβ1组部分细胞出现极化改变。DNCP、TGFβ1+DNCP诱导组抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应,RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP),另外DMP1亦呈阳性表达。TGFβ1组不表达DSPP、DMP1。肝素+IGF-1组在细胞形态和蛋白、mRNA上均未出现成牙本质细胞特异的表达。结论:胎鼠面突外胚间充质细胞在DNCP和TGFβ1+DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。表明在诱导中起关键作用的是DNCP。TGFβ1可诱导细胞在形态学上分化成类成牙本质细胞。本结果与该细胞在三维体系中的诱导分化结果相似,表明胚胎面突外胚间充质细胞在体外被诱导分化为成牙本质样细胞不是偶然现象,这为研究牙齿的分化和发育提供了良好的模型和实验依据。

大鼠第一腮弓细胞构建组织工程牙本质-牙髓复合体样结构

目的观察胚胎12.5d(E12.5d)大鼠第一腮弓上皮及外胚间充质细胞离散后肾被膜下移植的成牙能力。方法切取E12.5d大鼠第一腮弓(下颌突),酶消化离心后与明胶海绵支架复合植入大鼠肾被膜下,4周后收获移植物,对移植物进行组织学观察和免疫组化抗牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)检测。结果种植4周,植入细胞在肾被膜下形成牙本质-牙髓复合体样结构。DSP在新生的牙本质组织中呈阳性表达。Masson三色法显示绿色矿化基质形成。结论E12.5d大鼠第一腮弓细胞部分保留了牙齿自然发育的遗传信号,在肾被膜下可以构建形成牙本质-牙髓复合体样结构。

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的 :探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法 :采用体外细胞三维立体培养的方法 ,在转化生长因子 β1 ( TGFβ1 )、牙本质非胶原蛋白 ( DNCP)的诱导下 ,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法 ,探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果 :人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养 4d,在 TGFβ1 +DNCP组中细胞出现核极化 ,有很长的突起 ,细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白( DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示 m RNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白 ( DSPP)。结论 :三维立体培养下 ,人胚胎面突外胚间充质干细胞在 TGFβ1及 DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体 ,诱导分化出成牙本质样细胞 ,为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。

永生化外胚间充质干细胞的生物学特性

目的 :探讨端粒酶催化亚基 (hTERT)介导的永生化外胚间充质干细胞的生长、增殖特性及转化特征。方法 :测定永生化外胚间充质干细胞的生长曲线、群体倍增时间 ;流式细胞术检测细胞增殖周期 ;绘制细胞累计生长曲线 ;检测细胞的平板克隆形成率、软琼脂克隆形成情况 ;胰蛋白酶 -Giemsa染色法分析染色体核型 ;接种于裸鼠皮下检测细胞的致瘤性。结果 :永生化外胚间充质干细胞越过衰老期 ,增殖较活跃 ,S期细胞比例明显增加 ;该细胞不能在软琼脂内形成细胞克隆 ;第 2 5代细胞染色体形态结构正常 ,为二倍体核型 ;在裸鼠皮下不能形成肿瘤。结论 :永生化外胚间充质干细胞增殖旺盛 ,核型正常 ,无悬浮生长能力 ,在裸鼠体内不具成瘤性 ,是正常细胞而非转化细胞 ,可以作为组织工程的种子细胞。

有效教学的理念和策略初探

在当前教改形势下,教学的有效性作为教学的评价标准而备受重视。探索有效教学的理念和为实现目标而实施的策略,具有十分重要的意义。本文初步探讨了有效教学的特征及有效教学的实施策略,为有效教学理论在新时期《口腔医学》教学中的应用提供了理论支持。

胚胎面突外胚间充质细胞的培养鉴定及向平滑肌细胞的自分化研究

目的 探讨胚胎面突外胚间充质细胞在体外的生长特性、表型特征及在无分化抑制剂 -白血病抑制因子 (L IF)的 DMEM/ F12培养基中向平滑肌细胞自分化的过程。 方法 取孕 5 0天人胚面突 ,用消化法培养获得外胚间充质细胞 ,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况 ,免疫组织化学鉴定细胞分化表型。用无 L IF的 DMEM/ F12培养基培养 ,2天后进行抗α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)单克隆抗体免疫组织化学检测 ,通过 RT- PCR在 m RNA水平检测α- SMA的表达 ,透射电镜观察细胞超微结构。 结果 培养的细胞呈单层生长 ,成纤维状 ,长梭形 ,有 2～ 4个突起 ,抗人自然杀伤细胞标志、波形丝蛋白、S- 10 0蛋白、神经元特异性烯醇化酶、肌红蛋白及 因子染色阳性 ,抗神经胶质纤维酸性蛋白、神经纤维细丝蛋白、α- SMA、角蛋白染色阴性。去除 L IF2天后 ,抗 α- SMA免疫组织化学检测呈阳性 ,RT- PCR显示细胞在 RNA水平表达平滑肌细胞特异的 α- SMA,透射电镜可见超微结构与平滑肌细胞相类似。 结论 所获得的外胚间充质细胞具有干细胞特性。在无分化抑制剂存在时 ,面突外胚间充质细胞呈明显向平滑肌细胞的自然分化。