固有免疫受体NLRX1在中枢神经系统疾病中作用的研究进展

中枢神经系统(CNS)正常功能的发挥高度依赖细胞能量供给与固有免疫体系提供的内环境稳定。NOD样受体家族成员X1(NLRX1)是定位于线粒体的固有免疫模式识别受体,具有调节线粒体自噬、炎性反应、活性氧的生成等多种功能,因而可影响炎症、肿瘤等多种疾病的进展。近年来的研究表明,NLRX1通过抑制炎性反应、调节神经细胞线粒体自噬、线粒体动力变化和氧化应激反应等机制,在自身免疫性脱髓鞘疾病、缺血缺氧性疾病、创伤等CNS疾病中发挥神经保护作用。了解NLRX1参与CNS疾病过程的机制,可加深对CNS固有免疫分子的认识,并可望为CNS疾病的治疗提供新的思路与靶点。

利用伊文思蓝的荧光显示肾上腺素诱发的血脑屏障开放

本文采用伊文思蓝静脉注射，在荧光显微镜下观察了不同剂量的肾上腺素诱发的大鼠血脑屏障开放状况，结果发现：（1）伊文思蓝在血脑屏障开放局部呈现出鲜艳明亮的荧光斑；（2）随着肾上腺素剂量加大，光斑数量增加；（3）光斑在实验组全脑的分布，以下丘脑、丘脑、小脑和尾壳核内密度最高。上述结果表明利用伊文思蓝的荧光染料性质观察血脑屏障的开放具有简便易行、灵敏度高等优越性．

学科竞赛对医学类专业本科生综合能力培塑作用的研究

目的了解各类学科竞赛对医学类专业本科生综合能力的培塑作用。方法2024年1—3月,选取空军军医大学2019—2023级不同专业的422名医学生进行问卷调查。采用交叉分析及卡方检验等方法,比较不同专业、年级、性别、学习成绩排名的学生参与学科竞赛情况以及参赛对个人能力的影响。结果62.8%的学生参加过学科竞赛,包括医学专科类竞赛、交叉学科类竞赛和拓展延伸类竞赛等;参加学科竞赛对学生的团队协作能力、表达沟通能力、实践操作能力、创新创业能力和综合素质均有提升作用,参赛频率不同提升效果不同;学习成绩排名不同的学生参赛频率也不同,排名靠前者更愿意参与学科竞赛。结论多数医学类专业本科生参与学科竞赛意愿较强,且参赛经历对本专业学习产生正向激励作用,同时对个人能力有较大提升作用,但同时也发现参与度不高的学生不同程度地面临着学赛平衡的难题。因此,学校在竞赛组织选配中应当区分层次类别,提供针对性帮助,充分挖掘、锻炼和培养创新型医学人才。

静脉注射脂多糖和小剂量肾上腺素后血脑屏障的开放

目的 为了解机体免疫系统受激发的状态下血脑屏障能否开放及血压升高对此过程的影响 .方法 以大肠杆菌来源的脂多糖 L PS为免疫刺激物 ,或 (和 )给以单独给药时不能开放血脑屏障的小剂量 (3μg· kg- 1 )肾上腺素 ,以伊文思蓝为血脑屏障开放的指示剂进行研究 .结果 大剂量 (2 5 0μg· kg- 1 ) L PS和 3μg· kg- 1肾上腺素分别单独注射不能使血脑屏障开放 ;而静脉注射 L PS 3h后再给予同样剂量的肾上腺素 ,则可开放血脑屏障 .结论 在 L PS激发的免疫状态下 ,血脑屏障的开放阈降低 ,更易于受其他因素影响而开放 .本研究为免疫信息分子通过血脑屏障开放传入脑内的假说提供了一个佐证 .

大鼠侧脑室置管方法的改良

国际上公认的实验动物脑室内给药方法是先在侧脑室内埋置固定于颅顶的套管,5～10 d后待动物从埋管过程造成的应激反应恢复后再经内管给药,这可以去除插管过程造成的应激对实验结果的干扰.但目前此种方法所用的管道系统多依赖进口,价格昂贵,且为一次性使用,其代价是很多国内实验室难以承受的.故国内神经生物学实验中动物脑室内给药的方法多为在颅骨钻孔后以微量注射器或玻璃微电极直接插入脑室内即刻给药,这种方法显然是有缺陷的.为克服这一问题,我们研究出了重复使用进口管道系统的方法,自行设计了置管时将管道固定在立体定向仪上的装置以取代国外公司昂贵的相关产品并可适用于国产定向仪.实验结果证实了这种方法是可行的.本文对这一实验方法的改造进行了详细的描述.

IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌

目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G(IgG)刺激对小胶质细胞表达Toll样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用。方法:用不同浓度的IgG(2mg/L、20mg/L、200mg/L)及脂多糖(LPS)(10mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化。作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌。结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌。结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用。

浅层巩膜静脉烧烙法诱发大鼠慢性高眼压的研究

目的 :证明大鼠基础眼压的昼夜节律并建立稳定的大鼠慢性高眼压模型 .方法 :健康雌性SD大鼠 4 0只 ,建立模型前早晚各测眼压一次 ,连续测量 1wk ,之后将 4 0只大鼠完全随机分为对照组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、模型Ⅲ组 ,每组 1 0只 .对照组只打开球结膜 ,巩膜静脉不做处理 ;模型Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ组分别烧烙 1 ,2 ,3条浅层巩膜静脉 ,术后即刻、术后 30min ,1h ,1 2h ,1d ,1wk ,4wk ,8wk分别测量各组眼压 ,并于术后观察术眼的局部表现 .大鼠眼压用TONO PEN测量 .结果 :大鼠白天正常眼压界于 1 .0 6kPa～ 1 .99kPa之间 ,平均眼压值为 (1 .4 6± 0 .2 5 )kPa ;夜间正常眼压界于 1 .73kPa～ 2 .6 6kPa之间 ,平均眼压值为 (1 .86± 0 .2 3)kPa .大鼠夜间平均眼压高于白天 (P >0 .0 1 ) .术后 8wk对照组平均眼压值为 (1 .6 8± 0 .2 5 )kPa ,模型Ⅰ组平均眼压值为 (1 .6 5±0 .2 6 )kPa ,模型Ⅱ组平均眼压值为 (4 .0 4± 0 .2 1 )kPa,模型Ⅲ组平均眼压值为 (4 .1 2± 0 .1 9)kPa .术后 8wk各组平均眼压值 ,对照组与模型Ⅰ组间以及模型Ⅱ组与模型Ⅲ组间平均眼压值没有差别 (P >0 .0 5 ) ,前两组与后两组分别进行比较 ,平均眼压值差别显著 (P >0 .0 1 ) .模型Ⅲ组术后有 3只眼出现角膜大泡、热伤性白内障等并发症 .结论 :

器官系统神经科学模块化教学初探

神经科学是研究神经系统的综合性整合学科,人才的培养需要与之相适应教学模式。第四军医大学神经生物学教研室和人体解剖学组织胚胎学教研室联合开展模块化教学,采用理论、讲座、实验和PBL等多种方式,教师联合备课和穿插授课,探索适合神经科学的整合授课模式,提高了学员学习能力,也促进了教师授课能力和知识结构的提高。

共聚物-1对慢性高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞凋亡及IL-6R表达的影响

目的 :观察共聚物 1(copolymer 1,COP 1)诱导的自身免疫反应对慢性高眼压 (elevatedintraocularpressre,EIOP)模型SD大鼠视网膜神经节细胞 (retinalganglioncell,RGC)凋亡和白细胞介素 6受体 (IL 6R)表达的影响。方法 :将SD大鼠随机分为正常对照组、安慰剂免疫的EIOP组和COP 1免疫的EIOP组。应用烧灼巩膜静脉的方法制作大鼠慢性EIOP模型。于COP 1免疫的EIOP组动物的后足皮下注射COP 1,安慰剂免疫的EIOP组动物注射生理盐水 ,对照组动物不做任何处理。用免疫组化染色法检测RGC上IL 6R的表达 ,用TUNEL染色法检测各组RGC的凋亡。结果 :COP 1免疫的EIOP组的RGC凋亡数较安慰剂免疫的EIOP组减少 (P <0 .0 5 )。IL 6R在正常大鼠RGC上有表达 ,安慰剂免疫的EIOP组表达增强 (P <0 .0 5 ) ,COP 1免疫的EIOP组表达水平最高 (P <0 .0 5 )。结论 :COP 1诱导的自身免疫对慢性EIOP条件下的RGC具有保护作用 ,并可使RGC表达IL 6R的水平升高。推测COP 1诱导的RGC上IL 6R表达水平的增高 ,可能与自体免疫反应的神经元保护作用有关。本研究结果对青光眼患者视网膜损伤的治疗具有一定的意义。

小胶质细胞极化与负性情绪的相关研究

负性情绪如抑郁、焦虑对人类工作生活影响巨大,而且通常伴随许多疾病产生。情绪的产生主要是脑内神经环路共同作用的结果,而神经胶质细胞对神经环路的作用已经成为神经科学关注的热点。中枢神经系统内的小胶质细胞可以活化为促炎(M1)和抗炎(M2)两种状态,即极化现象。越来越多的证据表明,不同极化状态的小胶质细胞可能通过直接或间接的方式影响情绪的产生,并参与许多伴有负性情绪的疾病过程。文章对小胶质细胞的生理功能、在病理条件下的极化现象、极化后行使的功能以及对负性情绪的影响进行综述,以期进一步认识小胶质细胞对情绪的影响作用。

色素上皮衍生因子在慢性高眼压大鼠视网膜的表达

目的:探讨色素上皮衍生因子(pigmentepitheliumderivedfactor,PEDF)在大鼠视网膜的表达及其与慢性高眼压视神经损伤的关系.方法:雌性SD大鼠102只,随机分为实验组G(包括G1h,G12h,G1d,G3d,G7d,G14d,G21d,G28d),对照组C(包括C1h,C12h,C1d,C3d,C7d,C14d,C21d,C28d)和空白对照组D,各组均为6只,随机选一只眼为实验眼.应用巩膜浅层静脉烧烙法制作慢性高眼压(elevatedintraocularpressure,EIOP)模型,用免疫组织化学染色法观察视网膜各层结构PEDF的表达和变化规律.结果:免疫组化染色显示,G组术后1d大鼠视网膜PEDF染色阳性的细胞增多(P<0.05),并且呈现递增趋势,到7d达到高峰(P<0.05),并持续至28d之后(P<0.05),而C和D组视网膜PEDF阳性细胞数量没有显著变化(P0.05).C和D组PEDF阳性细胞主要分布在视网膜的色素上皮层(RPE)、视杆视锥细胞层(PRL)、外界膜(OLM)、外颗粒层(ONL)、内颗粒层(INL)、内网状层(IPL)、神经节细胞层(RGCL)、神经纤维层(RNFL).G组PEDF除了在上述的结构有相同的表达以外,在RGCL,RNFL显著增多.结论:视网膜PEDF阳性细胞表达的变化与EIOP损伤有一定的时效和空间关系,视网膜PEDF阳性细胞表达的增强可能是EIOP损伤的应激反应.

视神经切断激活小胶质细胞后血-视网膜屏障的功能状态

目的观察视神经切断激活视网膜小胶质细胞后血-视网膜屏障(BRB)的功能状态。方法自眶内切断18只成年大鼠左侧视神经,12只近侧断端留置浸有50g/L荧光金的明胶海绵,分别于术后7d或14d(每时间点各6只)处死动物,取左眼视网膜后固定,荧光显微镜下观察小胶质细胞的反应。另外6只存活7d或14d(每时间点各3只)后,股静脉注射30g/L伊文思蓝。2h后,以温生理盐水灌注动物,立即摘除双侧眼球,行冰冻切片,荧光显微镜下观察;右眼球为内对照。结果视神经切断后视网膜节细胞层活化的小胶质细胞随时间逐渐增多,部分小胶质细胞位于视神经层。术后7d和14d均未发现伊文思蓝渗漏至手术侧视网膜。结论视神经切断后视网膜内增多的活化小胶质细胞尚不足以破坏BRB,BRB的功能性完整得以维持。

小胶质细胞M1型极化诱发小鼠焦虑样行为及其对前额叶神经元树突棘密度的影响

目的:焦虑样行为与脑内小胶质细胞M1型极化关系密切,但M1型小胶质细胞如何作用于神经元导致焦虑样行为并不清楚,因此本研究的目的在于观察小鼠脑内小胶质细胞向M1型极化诱发产生焦虑样行为,并探讨其对神经元树突棘的影响。方法:实验组采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)脑内注射诱导C57小鼠小胶质细胞向M1型极化,通过旷场实验和高架十字迷宫实验观察小鼠的行为学改变;应用免疫荧光染色方法观察实验组和对照组小鼠的内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,m PFC)内一氧化氮合酶(i NOS)与小胶质细胞标志物iba-1的表达变化,通过Western Blot方法观察实验组和对照组小鼠的m PFC内i NOS、致炎因子白介素1(IL-1)β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达变化,以i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均显著增加作为小胶质细胞向M1型极化的标志。采用高尔基(Golgi)染色观察m PFC内神经元树突棘的变化。结果:(1)实验组小鼠mPFC内小胶质细胞i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均升高,提示小胶质细胞向M1型极化。(2)实验组小鼠在旷场内的中央活动距离和中央活动时间比对照组均明显减少(P<0.001);实验组小鼠在高架十字迷宫开臂停留时间比正常组明显减少(P<0.05)。(3)Golgi染色结果显示实验组小鼠mPFC内神经元树突棘的密度相较于对照组增多(P<0.05)。结论:mPFC内小胶质细胞M1型极化可诱发小鼠产生焦虑样行为,并伴随mPFC内神经元树突棘密度增多,提示脑内小胶质细胞M1型极化可诱导焦虑样行为,可能与内侧前额叶皮质锥体神经元树突棘可塑性改变相关。

限制饮水对大鼠脑核团内蛋白激酶ERK1/2磷酸化水平的影响

目的研究限制饮水应激对大鼠脑内磷酸化蛋白激酶ERK1/2(pERK1/2)水平的影响。方法58只雄性Wistar大鼠分为对照组(C,n=4)、定时给水组(TW,n=18)、空瓶刺激组(EB,n=18)、限制饮水组(WR,n=18),后3组动物同置一室。TW组、EB组和WR组再按限制饮水时间分为3d、7d和14d 3个亚组。各实验组在最后一次实验刺激后1 h用免疫组织化学方法观察脑内pERK1/2表达的变化,并对相关核团中pERK1/2阳性细胞的面积进行图像分析。结果与对照组相比,实验刺激后引起大鼠脑内下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)、腹外侧隔区(LSV)、内侧杏仁核(MeA)、中央杏仁核(CeA)和孤束核(NTS)等核团的pERK1/2表达显著增强;其中,EB组和WR组在SON、LSV、MeA和CeA pERK1/2的表达均显著强于TW组,且EB组在LSV、MeA、CeA和NTS pERK1/2的表达增强和回落的时间要显著早于WR组。除PVN仅与刺激时间有关外,其余核团均与刺激时间和方式双重因素有关。结论限制饮水应激激活脑内PVN、SON、LSV、MeA、CeA和NTS等核团。物理性应激和心理性应激激活的中枢核团活动有一定差别。

重症肌无力中枢损害脾脏改变及细胞凋亡相关蛋白表达

目的 :探讨在重症肌无力 (MG)中枢损害模型中脾脏变化和细胞凋亡相关蛋白改变及其意义 .方法 :分别将自MG患者血中提取的IgG和健康人血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,建立大鼠MG模型和健康对照组模型 ,一组大鼠不予任何处理作为空白对照组 .脾常规HE染色 ,并用免疫细胞化学方法观察FasL和Bag 1在脾脏中的表达 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型样症状 .在MG组脾脏淋巴细胞增生明显 ,淋巴小结及生发中心数目增多 ,Bag 1抗原阳性细胞弥漫分布于白、红髓区 ,FasL仅偶见或无 .在健康对照组脾脏中可散见Bag 1和FasL表达 (P <0 .0 5 ) ,两种对照模型镜下改变相似 .结论 :脑室注射抗神经肌接头 (NMJ)处的AchRab能够同中枢神经系统的AchR结合 ,引起外周免疫的变化 ,脾淋巴细胞增生 ,Bag 1表达增加 ,Fas/FasL表达受抑制 .这些可能导致EAMG脾脏中激活免疫细胞的正常凋亡过程抑制 。

肌苷对原代培养的少突胶质前体细胞化学性缺氧损伤后存活的作用

目的:探讨肌苷对化学性缺氧损伤后少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPC)存活的影响。方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为四个组,即空白对照组、肌苷对照组、鱼藤酮损伤组和肌苷治疗组。肌苷治疗组是在添加肌苷30 min后再用鱼藤酮损伤,24 h后用MTT、PI染色和免疫荧光组织化学染色检测各组细胞吸光值的差异、细胞死亡比率的差异和细胞凋亡比率的差异。结果:与对照组比较,鱼藤酮损伤组的吸光值明显下降(P<0.001)、细胞死亡比率明显增加(P<0.001)但细胞凋亡比率没有差异;与空白对照组比较,10 mmol/L肌苷对照组的的吸光值明显下降(P<0.01);与鱼藤酮损伤组比较不同剂量肌苷治疗组的吸光值、细胞死亡比率和细胞凋亡比率均没有差异。结论:在鱼藤酮介导的化学性缺氧损伤条件下,肌苷对OPC的存活没有明显的保护作用,而且大剂量肌苷还可损伤正常的OPC,提示大剂量肌苷在中枢神经系统损伤后髓鞘的修复过程中可能具有负面作用。

小胶质细胞参与神经病理性痛机制的几个信号通路

神经病理性痛是指由于外周或中枢神经系统病变、功能障碍或短暂的脏器损伤所致的疼痛,也可以是糖尿病、癌症或传染因素带来的继发损伤症状;其特征性临床表现有疼痛过敏、异常疼痛和自发疼痛等,对于患者的身心健康有极为严重的影响,而现有的治疗方法疗效均不理想。因此,认识神经病理性痛形成机制对于发展新的有效的疗法必不可缺。

纯化的结核菌素衍生蛋白免疫刺激后小鼠脑内的Fos表达

目的 进一步阐明中枢神经系统参与免疫调节的部位 .方法 用免疫组织化学方法观察纯化的结核菌素衍生蛋白 (PPD)免疫刺激后不同时间点小鼠脑内的 Fos蛋白表达 .结果 PPD初次免疫后 3,9,14,18和 2 1d时再追加免疫后7,14d的动物 ,孤束核、延髓腹外侧区、中央灰质、海马、新皮质等多数脑区在各个时间点均可见到较强的 Fos表达 .但不同时间点的 Fos表达不完全相同 ,尤为明显的是 ,追加免疫后扣带回出现明显的 Fos表达 ,且左侧较右侧强 .结论 免疫应答过程中有多个脑区参与对免疫信息的感知和调控 。

脉冲式电磁辐射对大鼠血脑屏障影响的量效关系

目的 研究脉冲式电磁辐射 (EMR)对大鼠血脑屏障 (BBB)影响的量效关系。方法 采用伊文思蓝静脉注射 ,荧光显微镜下观察不同脉冲次数的 EMR辐照对大鼠 BBB开放的影响。结果 伊文思蓝在 EMR诱发的大鼠 BBB开放局部呈现荧光斑 ;随着 EMR脉冲次数 (0～ 2 0 0次 )的增加 ,荧光斑数量增加、面积增大 ;荧光斑在 EMR组全脑的分布 ,以皮质、丘脑、下丘脑、小脑、尾壳核和延髓较多。结论 不同脉冲次数 EMR诱发大鼠 BBB开放程度不同 ,随脉冲次数增加 ,血管通透性增强 ,2 0 0次时达开放高峰 ,皮质区 BBB开放最明显。