间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控

增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。

苏拉明对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响

目的 :观察苏拉明对激素非依赖性前列腺癌 (HRPC)PC 3M细胞生长、细胞周期和凋亡的影响 ,初步探讨其作用机制。 方法 :锥虫蓝活细胞拒染法和四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法检测不同浓度小牛血清 (2 %、5 %、1 0 % )、不同浓度的苏拉明 (1 0、50、1 0 0、2 0 0 μmol/L)对PC 3M细胞增殖的影响 ;流式细胞术 (FCM )测定苏拉明对PC 3M细胞增殖周期分布和凋亡的影响。 结果 :高浓度 (2 0 0 μmol/L)苏拉明可杀伤PC 3M细胞 ,低浓度 (1 0、50、1 0 0μmol/L)条件下则主要发挥生长抑制作用。高浓度 (1 0 % )小牛血清存在时苏拉明仍可发挥抑制和杀伤作用 ,但较低浓度 (5 %、2 % )小牛血清时弱。苏拉明可使PC 3M细胞发生细胞周期G0 /G1 期阻滞 ,并在 2 0 0 μmol/L浓度时诱导细胞凋亡。 结论 :苏拉明较为明显地抑制PC 3M细胞生长 ,并在高浓度时杀伤癌细胞 ;除抑制或阻断细胞因子和生长因子调控的增殖作用外 。

HSV-TK/GCV系统对前列腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应

目的 :研究胸苷激酶 (TK)自杀基因疗法对人前列腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应 ,探讨其治疗前列腺癌的可行性。方法 :采用形态学观察、活细胞拒染法及MTT法检测单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /羟基无环鸟苷 (GCV)系统对前列腺癌细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果 :GCV对转染TK基因前列腺癌细胞的杀伤作用呈剂量及时间依赖关系 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;但其旁观者效应较弱 ,TK基因阳性细胞比例约为 10 %的混合细胞 ,经 10 μmol/L和 10 0 μmol/L的GCV处理 72h后 ,仅有16.15 %± 1.64 %和 2 3 .46%± 3 .2 1%的细胞被杀灭。结论 :HSV TK/GCV系统对前列腺癌有杀伤作用 ,但由于其旁观者效应不够强大 。

连接蛋白介导的GJIC与肿瘤自杀基因治疗时旁观者效应的关系

旁观者效应的存在是自杀基因疗法之所以格外引人注目的重要原因之一 ,但并非对于所有肿瘤细胞均存有这一效应。研究表明 ,靶细胞连接蛋白的表达及细胞间缝隙连接状况与这一现象关系密切。本文分连接蛋白及缝隙连接概述 ,旁观者效应在自杀基因疗法中的重要性及其与缝隙连接细胞间交流的关系 ,加强缝隙连接细胞间交流以促进旁观者效应的方法和策略等三个方面进行了叙述。

芹黄素对前列腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的 :探讨芹黄素 (Apigenin)对前列腺癌 (PCa)细胞的体外杀伤效应 ,及其对前列腺癌 (PCa)细胞周期与凋亡的影响。方法 :以锥虫蓝拒染法进行细胞计数并计算芹黄素组与对照组细胞数比率 ,MTT法检测细胞生长抑制率 ,并采用流式细胞术 (FCM )检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果 :芹黄素 0 .1μmol/L组细胞数未见明显改变 ,其余各组随浓度和时间的推移 ,细胞数比率逐渐下降 ,呈时间和剂量依赖关系 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;这种作用在 1、10 μmol/L组可逆转 ,而在 10 0 μmol/L组不可逆转。MTT检测 1、10、10 0 μmol/L三个浓度组作用至2 4h后 ,细胞生长抑制率分别为 (5 .15± 0 .2 1) %、(10 .6 9± 1.80 ) %和 (18.16± 2 .34) % ;作用至 96h后 ,生长抑制率递增至 (2 4 .0 4± 3.34) % ,(36 .89± 2 .74 ) %和 (5 4 .18± 2 .6 0 ) %。芹黄素可使PC 3m细胞发生G0 /G1期细胞周期阻滞 ,高浓度组尤为明显 ,并在 10 0 μmol/L组诱导一定比例 (16 .19% )的细胞凋亡。结论 :芹黄素可能通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡实现对PCa细胞的生长抑制作用。这为深入研究饮食结构与PCa的预防和治疗提供初步的实验依据。

肾上腺转移癌的非手术治疗

随着医学影像学技术的不断发展及广泛应用，肾上腺转移癌的检出率逐年增多。虽然大多学者认为外科手术是肾上腺转移癌的主要治疗方法，近期却有越来越多证据证明，以放疗和微创技术为代表的非手术治疗方法在肾上腺转移癌的治疗中收效甚佳。

钾离子通道开放剂与逼尿肌不稳定治疗

近年来,运用钾通道开放剂治疗逼尿肌不稳定的研究工作相继展开,取得了鼓舞人心的成果。本文分膀胱平滑肌的钾离子通道类型及其特性、钾通道开放剂治疗逼尿肌不稳定设想的提出、钾通道开放剂治疗逼尿肌不稳定的体内外研究以及其治疗逼尿肌不稳定的作用机制等四个部分对此进行叙述。

白细胞介素6及其受体在前列腺癌方面的研究进展

白细胞介素６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）是近年来研究较多的一种细胞因子。研究发现，它与多发性骨髓瘤、肾细胞癌、宫颈癌、卡波肉瘤及某些Ｔ细胞和Ｂ细胞淋巴瘤关系密切，是上述肿瘤的自分泌生长因子〔１〕。ＩＬ－６及其受体ＩＬ－６Ｒ与前列腺癌（ＰＣ...

细胞间隙连接与肿瘤

细胞间隙连接交流 (GJIC)是相邻细胞间信息传递的一种通讯方式 ,研究发现其与肿瘤的发生发展关系密切 ,本文综述了GJIC的物质基础及其生物学功能 ,其与细胞增殖和肿瘤形成的关系 ,GJIC的诱导途径 。

脂质体介导的单纯疱疹胸苷激酶基因在人前列腺癌细胞中的表达

目的 :提取并鉴定已构建的EB病毒表达载体pDR2 TK ,利用脂质体介导的基因转染技术将 pDR2 TK转染人前列腺癌细胞并对单纯疱疹胸苷激酶 (HSV TK)表达状况进行检测。方法 :采用DNA大量制备及纯化系统提取pDR2 TK ,酶切和DNA测序进行鉴定 ,采用阳离子脂质体法将 pDR2 TK导入激素非依赖性人前列腺癌细胞系PC 3m ,逆转录PCR(RT PCR)法和SABC免疫组化法检测TKmRNA和蛋白的表达。结果 :扩增提取的质粒经PstI和EcoRV酶切后各获得 4个及 2个片段 ,与原基因酶切图谱一致 ;所提取质粒PCR产物经DNA测序 ,与NCBI公布的HSV TK基因序列对照 ,证实所提取质粒含目的基因序列。脂质体法转染PC 3m细胞后 ,mRNA和蛋白均有HSV TK的表达 ,其蛋白表达率约为 2 2 %。结论 :pDR2 TK质粒含有目的基因HSV TK ,阳离子脂质体法可将 pDR2

细胞周期素D1反义寡核苷酸对激素非依赖性前列腺癌细胞增殖的影响

目的:观察细胞周期素D1(Cyclin D1)反义寡核苷酸(ASODN)对激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞生长的影响.方法:将ASODN转染AIPC细胞系PC-3m(ASODN组);逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化法(SP)检测PC-3m细胞Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,锥虫蓝活细胞拒染法和流式细胞术(FCM)检测PC-3m细胞生长和细胞周期分布.并与Cyclin D1正义寡核苷酸转染者(SODN组)对比.结果:ASODN组PC-3m细胞Cyclin D1 mRNA和蛋白表达明显降低;ASODN浓度在0.05～0.3μmol/L时,可对PC-3m细胞生长发挥抑制作用,且呈明显的剂量依赖性关系(P＜0.05);PC-3m细胞G1期细胞比例明显上升而S期细胞比例下降(P＜0.01);SODN组S期细胞百分比稍有增加,但与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Cyclin D1 ASODN可通过有效逆转AIPC细胞内源性Cyclin D1过表达而导致的细胞G1～S期限制点失控,使细胞停滞于G1期,实现对AIPC细胞的生长抑制作用,提示用Cyclin D1 ASODN对AIPC的治疗有望成为可能.

经腹膜后腹腔镜囊肿去顶术治疗肾囊肿的初步体会

目的 :总结经腹膜后腹腔镜囊肿去顶术治疗单纯性肾囊肿的经验 ,讨论手术适应证和手术要点。方法 :采用经腹膜后腹腔镜囊肿去顶术治疗肾囊肿患者 3 2例。结果 :3 1例手术成功 ,1例转为开放手术 ,微小并发症发生率为 16% ,技术熟练后无并发症发生 ,1例术后 3个月复发。术后平均住院 3天。结论 :经腹膜后腹腔镜囊肿去顶术创伤小 ,患者康复快 。

嗜铬细胞瘤50例分析

目的:总结嗜铬细胞瘤的诊治体会。方法:回顾性分析50例嗜铬细胞瘤的临床资料。结果:82％的患者有高血压史,平均病程28个月。血儿茶酚胺和尿香草基苦杏仁酸增高者分别为68％,84％。B超、CT定位诊断阳性率为90％,95％;术前诊断正确率为94％。良性嗜铬细胞瘤43例,恶性嗜铬细胞瘤7例,其中:2例临床病程为良性而病理诊断为恶性,1例初次发病即为恶性,4例为复发性。2例恶性嗜铬细胞瘤伴肝转移放弃治疗,1年后死亡。结论:患者延迟就诊,基层医生对该病缺乏认识是导致误诊的主要原因。复发性嗜铬细胞瘤有很高的恶变性,应尽可能完整切除肿瘤,并加强随访。

经皮肾微造瘘输尿管镜钬激光碎石结合ESWL治疗复杂性肾结石

目的:探讨经皮肾微造瘘输尿管镜钬激光碎石结合ESWL治疗复杂性肾结石的效果。方法:对26例复杂性肾结石患者采用经皮肾微造瘘输尿管镜钬激光碎石结合一次或多次ESWL碎石治疗。结果:经皮肾微造瘘输尿管镜钬激光碎石结合一次ESWL治疗后结石清除率为73.1%,二次ESWL治疗后结石清除率为84.6%,三次ESWL治疗后结石清除率为88.5%。结论:经皮肾微造瘘输尿管镜钬激光碎石结合一次或多次ES-WL治疗复杂性肾结石是安全、有效的方法。

原发性睾丸非精原细胞性生殖细胞肿瘤26例分析

目的 :总结原发性睾丸非精原细胞性生殖细胞肿瘤 (NSGCT)的诊断与治疗体会。方法 :回顾性分析收治的 2 6例NSGCT的临床资料。 2 6例中 ,胚胎癌 7例 (2 6 .9% ) ,畸胎瘤 5例 (19.2 % ) ,卵黄囊瘤 4例(15 .4 % ) ,绒毛膜上皮癌 1例 (3.9% ) ,混合性生殖细胞瘤 (MGCT) 9例 (34.6 % )。睾丸无痛性肿大为其主要临床表现。Ⅰ期 16例 ,Ⅱ期 8例 ,Ⅲ期 2例。在根治性睾丸切除基础上采用腹膜后淋巴结清扫术及化疗等综合治疗措施。结果 :2 2例获随访 ,随访时间 6个月～ 6 .5年 ,术后复发 2例 ,2例死于全身广泛转移 ,其余患者均健康生存。结论 :NSGCT中以MGCT及胚胎癌最为常见 ,B超、CT或MRI为其诊断和临床分期的主要手段。

趋化因子受体4联合P504S或P63在良、恶性前列腺疾病鉴别诊断中的应用

目的:评价趋化因子受体4(CXCR4)联合P504S或P63蛋白在前列腺良、恶性疾病诊断和鉴别诊断中的应用价值,为前列腺疾病的诊断、鉴别诊断提供理论依据。方法:采用EnVision两步免疫组织化学方法,检测40例未经任何抗癌治疗的前列腺癌(PCa)和30例良性前列腺增生(BPH)石蜡标本中P504S、CXCR4和P63蛋白的表达情况,结合临床分析CXCR4与PCa转移特征相关性。结果:在40例PCa中,CXCR4蛋白表达阳性率为82.5%(33/40),P504S阳性率为92.5%(37/40),P63蛋白表达阳性率为5%(2/40)。30例BPH组织中,P63表达均为阳性,P504S阳性率为3.3%(1/30),而CXCR4阳性率16.7%(5/30)。P504S联合P63对PCa的诊断正确率要高于CXCR4+P63和P504S+CXCR4。PCa中CXCR4表达与癌转移特征相关性具有统计学差异(P<0.05)。结论:P504S、CXCR4及P63对良、恶性前列腺病变的诊断及鉴别诊断都有一定的参考作用。虽然CXCR4单独应用于诊断特异性差,诊断准确率相对较低,但CXCR4联合P504S或P63诊断准确率高,对前列腺疾病的良、恶性鉴别诊断有重要临床应用价值。

改良W形回肠代膀胱术的疗效观察(附36例报告)

目的 :探讨改良W形回肠代膀胱术的疗效。方法 :对 36例膀胱肿瘤患者行根治性膀胱切除、W形回肠代膀胱术 ,并对术式进行改进。结果 :36例手术时间平均 4 .2h。术后 31例随访 4～ 19个月 ,平均 10 .6个月 ,无严重并发症 ,均无瘤生存。患者一般于术后 3周自主可控性排尿 ,日间尿控率为 10 0 % ,术后 3、6、12个月夜间尿失禁发生率分别为 2 2 .5 %、11.1%及 6 .2 %。术后 6个月尿动力学检查膀胱容量 (36 0± 30 )ml,最大尿流率 (13.6± 2 .6 )ml/s,剩余尿量 (11.5± 5 .8)ml,充盈期膀胱压力明显低于尿道闭合压。新膀胱造影发现新膀胱呈球形 ,完全位于盆腔 ,未见输尿管反流。B超及IVU检查发现原上尿路积水 4例均明显减轻 ,其余未发现输尿管狭窄和上尿路积水征象。无高氯性酸中毒 ,肾功能正常。结论 :改良W形回肠代膀胱术手术时间短 ,操作简单 ,创伤轻 ,并发症少 ;新膀胱容量大 ,内压低 ,顺应性好 ,功能接近于正常膀胱 ,保持原位排尿 ,明显提高了患者术后生活质量 ,值得临床推广应用。

逆转录病毒介导CXCR4-siRNA对前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响

目的设计构建趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,探讨干扰CXCR4表达对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。方法用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的Pgensil-1质粒中,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体PLX-SN中,行限制性酶切及测序鉴定。重组逆转录病毒载体转染包装细胞PA317,获取病毒上清转染前列腺癌细胞,RT-PCR检测CXCR4mRNA表达。Transwell小室侵袭实验检测前列腺癌细胞体外侵袭能力的变化。结果通过酶切及测序鉴定,成功构建了PLXSN/EGFP-U6-siCXCR4。干扰质粒抑制CXCR4mRNA的表达,与空载体组比较,PC-3m、LNCaPsiRNA对CXCR4mRNA的抑制率分别为(84.26±10.20)%和(88.17±11.23)%。Transwell侵袭实验结果显示,干扰组微膜下孔细胞数PC-3m、LNCaP分别为(14.7±3.1)和(18.9±4.2)个,空载体组分别为(46.9±5.3)和(66.7±6.0)个,两者差异显著(P<0.05)。结论PLXSN/EGFP-U6-siCXCR4可以有效地抑制前列腺癌细胞CXCR4mRNA的表达,干扰CXCR4可以显著抑制前列腺癌细胞体外侵袭转移能力。

CXCR4-siRNA逆转录病毒载体体外靶向抑制hTERT^+肿瘤细胞CXCR4基因的表达

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并研究其在hTERT+前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中的表达。方法:用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siR-NA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的Pgensil-1质粒,以hTERT启动子代替U6启动子,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体PLXSN中,行限制性酶切鉴定。转染PA317病毒包装细胞,收获病毒上清分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP及人胚肺成纤维细胞MRC5和人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测CXCR4mRNA表达。结果:限制性酶切鉴定该重组质粒,成功构建了PLXSN/EGFP-hTERT-siCXCR4。与空载体组比较,PC-3m、LNCaP、MCF7细胞中CXCR4-siRNA对CXCR4mRNA的48h抑制率分别为(87.02±10.34)%、(61.70±9.77)%、(88.31±9.20)%。MRC5细胞中PLXSN-hTERT-siCXCR4对CXCR4mRNA不抑制。结论:该逆转录病毒系统中hTERT启动子调控的下游RNA干扰序列可选择性地在hTERT+前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中表达,在hTERT-MRC5细胞不表达,具有显著的靶向性。

膀胱全切术后原位回结肠代膀胱并发尿瘘的原因分析

目的：探讨膀胱全切原位回结肠代膀胱术后新膀胱并发尿瘘的原因及处理措施。方法：对膀胱肿瘤行膀胱全切原位W形回肠代膀胱手术210例，行膀胱全切原位U形乙状结肠代膀胱术26例，术后随访3个月～4年（平均1年），观察新膀胱功能及有无尿瘘并发症并分析其病因和进行相应处理。结果：11例男性，3例女性术后出现新膀胱皮肤瘘；1例女性出现新膀胱阴道瘘。其中〉70岁新膀胱瘘发病率为55．6％，≤60岁发病率为1．1％；Ⅱ型糖尿病的患者新膀胱瘘发病率为11．8％，非糖尿病患者为5．9％。经5％碳酸氢钠冲洗新膀胱，改善患者营养状态和严格控制糖尿病患者血糖水平并进行二期手术修补，除1例男性患者术后半年新膀胱皮肤瘘迁延未愈，其余均治愈。结论：全膀胱切除原位回结肠代膀胱术后新膀胱并发尿瘘的原因众多，结合其发病原因加强预防和治疗，是可以大幅减少甚至可以避免的。