基于HPLC与LC-MS/MS分析食品组合物桑瓜饮的化学成分

解析具有调节血糖功能的食品组合物桑瓜饮(Sang-Gua-Yin,SGY)的成分。使用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)归属桑叶总生物碱组分、苦瓜总皂苷组分、葛根总黄酮组分的色谱峰,高效液相色谱-蒸发光散射器(High Performance Liquid Chromatography-Evaporative light Scattering Detector,HPLC-ELSD)与液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)分析组合物桑瓜饮中的化学成分。对食品组合物桑瓜饮的色谱峰进行归属,标定了11个色谱峰,其中7种成分属于葛根总黄酮,3种成分属于苦瓜总皂苷,1种成分属于桑叶总生物碱;对16个化学成分进行了鉴定,分别为1-DNJ、苦瓜苷A、苦瓜苷K、葛根素、6′′-O-acetyldaidzin、pueroside D、染料木苷、大豆苷、大豆苷元、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、3′-氢化葛根素木糖苷、葛根素-7-木糖苷、葛根素-6′′-O-木糖苷、puerarin-7-O-glucoside、葛根素-4′-O-β-D-葡萄糖苷。该研究提示食品组合物桑瓜饮成分选择1-DNJ、苦瓜苷A与葛根素作为评价指标,为食品组合物桑瓜饮的后续开发利用提供科学依据。

肺热止咳颗粒制备工艺和质量标准研究

目的初步筛选肺热止咳颗粒的制备工艺,并建立质量标准。方法采用L9(34)正交设计试验,考察浸泡时间、提取时间和加水量对黄芩苷的转移率以及干膏得率的影响,优选肺热止咳颗粒的最佳提取工艺。以制软材情况、颗粒收率、休止角及溶化性为评价指标,对赋形剂种类进行考察,优选制剂成型工艺。采用薄层色谱(TLC)法对陈皮、桑白皮进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中黄芩苷的质量分数。结果最佳提取工艺为浸泡0.5 h,分别加8倍和6倍水,加热回流提取0.5 h和0.25 h;赋形剂以糊精最优;薄层色谱斑点清晰、分离良好,阴性无干扰,专属性强;黄芩苷在质量浓度0.0075~0.75μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率为99.137%;肺热止咳颗粒中黄芩苷平均质量分数为8.25 mg/g。结论该工艺稳定可行,建立的TLC和HPLC法专属性强、灵敏度高、重复性好,为后续研发和质量控制奠定了基础。

高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量

目的测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为LichrospherC18,流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液(30∶70),梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:306nm进样量20mL。结果白藜芦醇的回归方程为:Y=83.7120X+2501.7909,r=0.8351。白藜芦醇在41.8-10.22×103μg含量范围内线性关系良好;白藜芦醇苷的回归方程为:Y=89.5637X+1045.3914,r=0.8324。白藜芦醇苷在109.056-4260μg含量范围内线性关系良好。结论该法准确、简便、重现性好,适用于虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的定量分析。

高效液相色谱法测定牛至挥发油羟丙基-β-环糊精包合物中麝香草酚、香荆芥酚、对聚伞花素的含量

目的建立牛至挥发油羟丙基-β-环糊精包合物中麝香草酚、香荆芥酚、对聚伞花素含量测定方法。方法采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水(43∶57)为流动相;柱温:35℃;检测波长:272 nm;流速:1.0mL/min;进样量:50μL。结果在上述色谱条件下,香荆芥酚在0.2-4.0μg范围内呈良好线性关系,回归方程为:Y=525.7652X-12.2981,r=0.9994;麝香草酚在0.1-2.0μg范围内呈良好线性关系,回归方程为:Y=752.6134X-2.8428,r=0.9999;对-聚伞花素在0.1-2.0μg范围内呈良好线性关系,回归方程为:Y=1265.1478X-35.4011,r=0.9999。结论以HPLC法测定牛至挥发油羟丙基-β-CD中麝香草酚、香荆芥酚和对-聚伞花素含量方法简单、快速,结果准确。

佛手山药多糖对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及氧化应激的影响

目的:探讨佛手山药多糖对实验性2型糖尿病大鼠糖脂代谢及体内氧化应激的影响。方法:SD大鼠高脂饲料喂养,结合小剂量腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、阳性对照组(二甲双胍150 mg/(kg·d))和佛手山药多糖组(400 mg/(kg·d)),并设正常组。观察给药期间各组体质量及血糖变化,给药6周后摘眼球取血,检测甘油三酯(triacylglyceride,TG)、胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,并解剖称取新鲜肝脏,测定肝糖原含量。结果:与模型组比较,佛手山药多糖能有效缓解糖尿病大鼠的症状,能明显降低实验性2型糖尿病大鼠空腹血糖水平(P<0.05),对TC和LDL-C含量有极显著的降低作用(P<0.01),对TG含量有显著降低作用(P<0.05),能显著增加SOD和CAT的活力,而对肝糖原,HDL-C、MDA、NO含量及GSH-Px的活力无显著影响。结论:佛手山药多糖对实验性2型糖尿病大鼠有降低血糖作用,对血脂代谢紊乱有一定的调节作用,其降糖和降脂的具体机制可能与提高机体SOD、CAT活性相关。

牛至挥发油正交提取工艺研究

目的对牛至挥发油的正交提取工艺进行研究,确定最佳工艺条件。方法采用水蒸气蒸馏法提取牛至挥发油,同时采用气相色谱法,以牛至主要抗菌成分对-聚伞花素、麝香草酚、香荆芥酚为标示成分,对牛至挥发油进行质量评价。结果确定了牛至挥发油的最佳提取工艺:加药材重量的10倍量水,浸泡30min,提取6h,收油率为0.49%。结论采用水蒸气蒸馏法提取牛至挥发油,稳定可行。

牛至挥发油羟丙基-β-环糊精制备的工艺研究

目的建立牛至挥发油的包合参数,使挥发油固体化,减少挥发油的损失。方法采用正交试验法,以包合物得率、挥发油包结率为评价指标,考察了包合温度、油与HP-β-CD比例、包合时间对包合效果的影响。结果最后确定包合温度40℃,油与HP-β-CD比例1∶8,包合时间40min的最佳包合工艺。结论牛至油的水不溶性很大程度上限制了该成分的应用,通过制备牛至油HP-β-CD包合物,一方面改善其水溶性,另一方面保证了挥发油的稳定性,为下一步的制剂奠定有利基础。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

中药及其成分治疗糖尿病足溃疡的实验性研究进展

糖尿病足溃疡是糖尿病常见的严重慢性并发症之一,若未得到及时治疗,可能会导致患者截肢甚至死亡,给患者带来极大的心理压力和经济负担。近年的研究表明,中药及其成分,如紫朱软膏、京万红软膏、回阳生肌膏、白及/三七复合物、白及多糖和溃疡油等,对糖尿病足溃疡具有一定的治疗效果,其作用机制主要与减轻炎症反应、促进血管生成和肉芽组织生长、抑制含NLR家族pyrin域蛋白3炎症小体活化、阻断高迁移率族蛋白B/细胞外信号调节蛋白激酶信号通路、激活Wnt/β连环蛋白信号通路和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮合酶信号通路等有关。本文就近年来中药及其成分治疗糖尿病足溃疡的实验性研究进行综述,以期为临床上采用中医药防治糖尿病足溃疡提供新的思路和依据。

当归四逆汤治疗糖尿病周围神经病变靶点预测和机制探讨

目的采用网络药理学方法对当归四逆汤治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的相关靶点进行预测,并探讨其作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选当归四逆汤有效成分和相关靶点蛋白,通过Drugbank、TTD、DisGeNET数据库检索并筛选DPN疾病相关靶点,整合筛选出当归四逆汤有效成分与DPN交集靶点,运用Cytoscape3.2.1软件构建当归四逆汤成分-靶点-疾病网络,通过在线分析工具Enrichr对当归四逆汤治疗DPN作用靶点进行GO生物过程和KEGG通路富集分析。结果当归四逆汤中28个活性成分对应作用于152个靶点蛋白,其中32个靶点与DPN相关。富集分析结果显示,该方可能通过作用MAPK级联正向调节等生物过程和糖基化终末产物-受体等信号通路发挥作用。结论当归四逆汤治疗DPN具有多靶点、多途径、整体调节作用特点。

基于网络药理学研究芍药苷治疗糖尿病周围神经病变作用机制

目的芍药苷(PF)是一种单萜类糖苷化合物,是中药芍药中重要的活性单体。研究表明芍药苷具有降低血糖、抗氧化、减轻神经炎症和疼痛等功效,在治疗糖尿病周围神经病变(DPN)中具有潜在的应用价值。本研究基于网络药理学理论,预测PF作用靶点,阐释其治疗DPN的分子机制。方法通过PharmMapper、Swiss Target Prediction和SEA数据库检测PF可能的作用靶点,通过TTD、DrugBank和DisGeNET数据库检索DPN疾病相关靶点,两者交集靶点通过Enrichr在线基因富集分析工具行KEGG pathway分析,构建药物-靶点-通路网络,并采用Cytoscape 3.2.1对该网络进行可视化,同时通过检索STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI),分析获得核心作用靶点。结果预测获得PF作用于DPN相关靶点22个,富集分析结果显示PF可能参与脂肪酸转运、血管平滑肌细胞增殖等生物过程,并通过过氧化物酶体增殖物激活受体、肾素-血管紧张素系统和糖基化终末产物等通路对DPN起到防治作用;PPI网络分析结果显示度中心性(degree)排名前五的关键靶标分别是过氧化物酶体增殖物激活受体γ、72 kuⅣ型胶原酶、胰岛素样生长因子1、胱天蛋白酶3和血管紧张素转化酶。结论PF治疗DPN涉及到多个直接或间接影响DPN发生发展的靶点和通路,本研究为阐释PF治疗DPN作用机制奠定了科学基础。

基于文献挖掘和网络药理探讨中药治疗DPN用药规律和作用机制

目的基于文献挖掘中药治疗糖尿病周围神经病变(DPN)用药规律,并借助网络药理学分析核心药对作用靶点和通路,阐释其分子机制。方法从中国知网检索收集2009年1月至2020年9月运用中药方剂治疗DPN文献,运用中医传承辅助系统软件(V3.0)分析用药规律,基于关联规则分析获得核心药对,检索中药系统药理学数据库与分析平台、DrugBank、TTD和DisGeNET数据库获得核心药对化学成分、作用靶点和疾病靶点,通过DAVID数据库对该药对治疗DPN作用靶点进行GO及KEGG分析。最后使用分子对接技术对核心化学成分与关键靶点进行对接验证。结果数据挖掘方面,治疗DPN的437首中药方剂中共应用中药204味。应用较多的是补虚类、活血化瘀类等中药,基于关联规则分析获得核心药对,其中黄芪-当归支持度最高;网络药理部分,黄芪-当归中104个化合物共作用于218个靶点,与DPN疾病相关靶点33个,KEGG富集分析得到药对治疗DPN的作用机制主要涉及神经活性配体受体相互作用、钙信号传导等信号通路,GO分析得到刺激反应等140个生物过程,细胞膜等18个细胞组成,蛋白结合等25条分子功能。分子对接验证药对核心化学成分与DPN关键靶点具有良好的亲和力。结论中医治疗DPN以益气养阴、活血化瘀、温阳散寒为基本大法。黄芪-当归药对可通过多成分多靶点多作用途径干预DPN病程。

基于GEO数据库的DPN相关靶点挖掘及与芍药苷分子对接研究

目的基于GEO数据库挖掘与糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)发生发展相关的潜在基因与靶点,并通过分子对接探讨芍药苷的干预作用。方法从GEO数据库中收集DPN和糖尿病人群研究的全基因组微阵列共计12例。在GEO2R平台内对两组的数据做差异基因分析,将筛选出的差异基因导入STRING在线数据库,获得差异基因所编码的蛋白质之间的相互作用并分析筛选核心靶点。采用AutoDock VINA对芍药苷与上述筛选的核心靶点进行对接打分,并采用Western blot法检测芍药苷对mCCL2/CCR2激活的MAPK表达的影响进行验证。结果通过GEO数据库筛选出DPN组相对于糖尿病组表达差异基因共计有132个,其中CCR2、TNF和BDNF处于蛋白相互作用网络核心位置,芍药苷与相应靶点对接分数分别为-8.0,-5.2和-5.0,具有较强亲和力,芍药苷能够抑制mCCL2/CCR2激活的MAPK表达。结论芍药苷抗DPN机制可能与通过调节神经生长因子(BDNF)、调控趋化因子受体(CCR2)和促炎因子(TNF)以促进神经修复和减轻炎性疼痛有关。

中药复方抗实验性糖尿病视网膜病变的研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)为持续性高血糖引起的有害代谢效应,是一种常见、可致盲的糖尿病微血管并发症。近几年的中药复方抗实验性DR研究表明,复方血栓通、和营清热方、活血解毒方、驻景丸、络通方、复视明胶囊、丹红化瘀口服液等对DR具有一定的防治作用,涉及的作用机制与抑制血管内皮生长因子(VEGF)及YAP的表达,调节紧密连接蛋白,阻断TGF-β1/Smad2/3信号通路、Hippo信号通路、Notch信号通路、OCS3-STAT3和TIMP1-A2M信号通路,抑制糖基化终末产物(AGEs)受体表达,抗炎和抗氧化有关。本文综述了近几年中药复方抗实验性DR的研究进展,希望为临床上中药复方防治DR提供科学的实验依据和参考。

miR-223-3p调控人肝星状细胞增殖及迁移的作用及分子机制

目的探讨miR-223-3p抑制人肝星状细胞LX-2增殖、迁移的作用及分子机制。方法以TGF-β1诱导活化的LX-2细胞为研究对象,分为空白对照组、miR-223-3p mimics组、NC mimics组,分别采用空白溶剂、miR-223-3p mimics、模拟物对照(NC mimics)转染干预24,48 h。采用CCK-8法检测miR-223-3p mimics对LX-2细胞增殖活性的影响,划痕实验检测miR-223-3p mimics对LX-2细胞迁移的抑制作用。采用miRNA靶基因预测数据库Targetscan、miRanda预测miR-223-3p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因,RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-223-3p mimics对NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达的影响。结果与空白组及NC mimics相比,miR-223-3p mimics组LX-2细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.05)。靶基因预测结果显示NLRP3与miR-223-3p碱基序列存在8个连续的碱基互补配对,表明NLRP3可能为miR-223-3p的下游靶基因。双荧光素酶报告基因实验显示,NLRP3为miR-223-3p的靶基因。实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示,与空白组及阴性对照NC mimics组相比,miR-223-3p mimics组LX-2细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论miR-223-3p通过靶向作用于NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路进而抑制人肝星状细胞株LX-2的增殖及迁移。

桑瓜饮对2型糖尿病大鼠降血糖作用考察及机制初探

目的探讨中药复方桑瓜饮对实验性2型糖尿病大鼠降血糖作用及其作用机制。方法 SD大鼠高脂饲料喂养,结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg·kg-1,根据血糖值大于11.1mmol·L-1建立糖尿病大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、阳性对照组(二甲双胍0.15g·kg-1)和桑瓜饮组(按生药量计为8.3g·kg-1)。另设正常组。观察给药期间各组血糖(FBG)变化,给药6周后摘眼球取血,检测血清中糖化血红蛋白(Hb A1c)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,并解剖称取新鲜肝脏,测定肝糖原含量。结果桑瓜饮能降低实验性2型糖尿病大鼠FBG和Hb A1c水平,升高肝糖原含量,并提高GSH-Px活力及降低MDA含量,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论桑瓜饮对实验性2型糖尿病大鼠模型有降低血糖作用,其降糖机制可能与减少肝糖原分解和提高机体抗氧化能力有关。

基于“五原则”结合蛛网模型辨析肺热止咳颗粒质量标志物

目的以质量标志物(quality markers,Q-Marker)“五原则”为指导,结合质谱、网络药理学和蛛网模型等手段,开展肺热止咳颗粒治疗咳嗽的Q-Marker研究。方法采用液质联用技术辨析肺热止咳颗粒中主要化学成分;检索TCMSP数据库收集肺热止咳颗粒处方中11味药材活性成分和对应靶点,同时检索GeneCards数据库收集咳嗽相关蛋白编码基因,构建药材-成分-靶点网络图,根据靶点数对活性成分进行有效性赋值;查阅药典和文献,获得各味药材可测性成分;基于配伍原则,确定原药材在复方中的君臣佐使归属;检索文献和TCMSP数据库筛选原药材特有性成分。结果基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS共鉴定肺热止咳颗粒中43个化学成分可“传递”至制剂中;从TCMSP数据库中筛选获得124个活性化合物,并作用于120个靶标,其中93个靶标与咳嗽相关;药典中载明定量方法的成分有6个;复方中11味药材特有性成分26个;另结合君臣佐使配伍规则和蛛网模式赋分规则为上述成分打分排序,前10个成分分别为汉黄芩素、黄芩素、甘草查尔酮A、川陈皮素、金合欢素、橙皮苷、甘草苷、对叶百部碱、β-谷甾醇和高良姜素。结论该10个成分可以作为肺热止咳颗粒的Q-Marker。