三种复方植物精油驱蚊效果实验室观察研究

养殖场中滋生的大量蚊蝇可以在畜禽之间和人畜之间传播蚊媒病毒,不仅会对养殖场造成经济损失,而且还会严重威胁人类健康。本试验为了观察三种复方植物精油在实验室驱蚊的效果。我们根据国标GB/T 13917.9-2009规定的攻击力试验方法,通过使用小鼠模型来测定三种复方植物精油对白纹伊蚊的驱避时效。本试验结果显示在该试验中,以白纹伊蚊作为本次试验蚊虫,两种驱蚊花露水在2 h以内对昆明小鼠有效保护率在70%以上;复方植物精油(APEX)在2 h内对昆明小鼠的有效保护率达到40%;通过调整植物精油成分,复方植物精油(APEX-1)对昆明小鼠有效保护时间为2 h,而且在4 h内有效保护率均可达到80%以上;复方植物精油(APEX-2)型对昆明小鼠有效保护时间为2 h,而且在4 h内有效保护率均可达到90%以上。结果表明,复方植物精油(APEX)是一种有效的蚊蝇驱避剂,通过调整植物精油成分后,有效保护率达到80%以上,其高效绿色环保的优势在养殖场蚊蝇驱避方面有较大应用前景。

PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

猪链球菌2型在感染兔体内的分布及其致病性研究

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原体,猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)1954年首次在英国分离鉴定,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,已成为危害我国养猪业和公共卫生安全的一个重要传染病。本研究用SS2-ZY05719株按10^(9)、10^(8)、10^(6)CFU腹腔注射途径人工感染健康的新西兰兔,3种剂量均可引起发病并死亡,新西兰兔临床症状明显,感染组平均体温升高1℃~2℃。同时分析了SS2在兔体各组织中的分布,结果显示,高剂量感染组出现明显的临床症状且快速死亡,感染剂量与发病程度有正相关性,对各试验组新西兰兔内脏组织进行检测发现,SS2主要集中在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异,本文研究了SS2感染新西兰兔后的临床症状和各组织载菌量,为猪链球菌的防治及致病机理研究提供参考。

2017-2020年华东地区猪源多杀性巴氏杆菌耐药性和PFGE分析

为了解华东地区猪源多杀性巴氏杆菌的耐药情况及流行特征,本研究收集了2017—2020年华东地区分离的31株猪源多杀性巴氏杆菌,通过琼脂稀释法检测其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型探求菌株亲缘关系。结果显示:31株猪源多杀性巴氏杆菌,对复方新诺明的耐药率最高(61.29%),其次为泰妙菌素(32.26%)、氟苯尼考(25.81%)、多西环素(12.90%)和大观霉素(3.23%)。所有菌株对头孢噻呋、庆大霉素、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、恩诺沙星完全敏感;耐药谱型呈现多样化特点,31株猪源多杀性巴氏杆菌共表现为8种耐药谱型,其中有2株3药耐药菌株,耐药谱型分别为DOX+TIA+SPT和FFC+TIA+SXT;依据85%相似性标准可将其分为14个PFGE分型,其中A、G、H、J簇共有19株菌,占61.29%,并且PFGE分型相同的菌株耐药表型也高度相似。研究结果表明,华东地区猪源多杀性巴氏杆菌呈现耐药模式和PFGE分子分型多样化的特性,PFGE分型与耐药表型之间存在一定的相关性,应加强猪源多杀性巴氏杆菌的耐药性监测和流行性防控。

PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

基于FPGA的远程直流电机控制系统研究

针对外场试验中运动控制系统实时性与准确性问题,提出了以FPGA为核心的以太网传输电机运动控制系统方案;通过上位机完成对多个直流电机方向、速度、位置等的远程控制,实现了软硬件相结合;采用YT8511/H芯片、RGMII接口和Altera官方IP核搭建了FPGA的高速以太网通信接口,运用三段式状态机实现了UDP通信协议,通过增量式光电编码器完成电机位置反馈,以Verilog硬件描述语言为基础,编写了电机驱动程序和编码器信号处理程序,对系统的通信、输出脉冲以及编码器信号处理进行了实验和仿真;结果表明,系统满足远距离控制需求,定位精度可达0.09°,有较好的移植性。

认知行为疗法联合氟西汀治疗青少年抑郁症疗效研究

目的观察认知行为疗法联合氟西汀治疗青少年抑郁症的临床效果。方法选取2022年1月至2023年1月南阳市第四人民医院收治的122例青少年抑郁症患者作为研究对象,采用随机数表法将患者分为对照组和观察组各61例,对照组患者给予氟西汀治疗,观察组患者给予认知行为疗法联合氟西汀治疗,两组均治疗3个月,比较两组患者的疗效、以及治疗前后抑郁症状、抗抑郁药副反应量表(SERS)评分、记忆情况以及生活质量。结果观察组患者的治疗总有效率为93.44%,明显高于对照组的80.33%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者汉密顿抑郁量表(HAMD)评分均降低,且观察组患者HAMD评分为(8.32±2.11)分,明显低于对照组的(15.48±5.66)分,差异有统计学意义(P<0.05);治疗1周后及治疗4周后观察组患者抗抑郁药副反应量表(SERS)评分分别为(10.61±3.12)分、(7.63±2.17)分,明显低于对照组的(13.63±3.56)分、(9.58±2.62)分,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组图片回忆、联想学习、理解记忆、背数评分均升高,且观察组图片回忆、联想学习、理解记忆、背数评分分别为(7.28±2.02)分、(5.03±1.38)分、(6.77±1.63)分、(6.91±1.66)分,明显高于对照组的(6.15±1.77)分、(4.13±1.14)分、(6.01±1.38)分、(6.08±1.73)分,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者心理功能、躯体功能、社会功能、物质生活评分均升高,且观察组心理功能、躯体功能、社会功能、物质生活评分分别为(78.65±8.33)分、(76.23±9.21)分、(69.88±6.94)分、(75.34±9.52)分,明显高于对照组的(70.22±8.34)分、(66.52±9.45)分、(63.21±5.42)分、(70.32±9.75)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论认知行为疗法联合氟西汀治疗青少年抑郁症能显著改善抑郁症状,减轻患者副反应,同时可改善患者记忆能力并提高生活质量,临床应用效果显著。

基于卷积神经网络与特征融合的天气识别方法

在太阳能热水器及太阳能电池等太阳能发电领域,下雨、下雪、阴天等气候因素将严重影响发电效果,而太阳能随动系统工作也必须消耗能量,所以迅速判断当前的天气状况,并设计自适应的开关随动系统极其重要。当天气状况为阴雨或者雪天时,系统应当关闭从而减少能耗。鉴于传统的天气识别方法效率低、准确度差、计算量大的问题,在公开的天气图像基础上创建了一个具有多种类别的天气分类集,并提供了一种基于卷积神经网络与特征融合的天气图像识别技术。通过采用传统方式获取图像的颜色、纹理、形状3种特征作为整个模型的底层特征,在原本的VGG16(visual geometry group-16)模型基础上进行了改进,从而提取图像的深层特征,最后将底层特征与深层特征融合起来在Softmax上进行输出,总识别率达到94%。

基因Ⅰ/Ⅴ型日本脑炎嵌合病毒的构建及其生物学特性和致病性研究

为了构建基因Ⅰ/Ⅴ型日本脑炎嵌合病毒并对其生物学特性和致病性进行研究,本研究通过反向遗传技术,以GI型JEV SD12-F120株为骨架获得了含有GV型JEV XZ0934株结构蛋白的嵌合病毒,进一步通过间接免疫荧光、生长曲线、蚀斑和动物试验对其生物学特征和致病性进行了鉴定。结果显示,嵌合病毒拯救成功,与亲本病毒相比,其在BHK-21细胞上的复制效率具有显著差异,而蚀斑大小显著大于亲本病毒(P<0.001)。采用脑内和腹腔注射小鼠测得嵌合病毒的半数致死量(LD_(50))分别为10^(-2.2)PFU和10^(-1.5)PFU,表明该嵌合病毒具有强神经毒力和神经侵袭力,为后续GV型JEV的致病机制和疫苗的研究奠定了基础。

MALDI-TOF质谱技术对猪肠道菌群中携带mcr-1细菌的鉴定与聚类分型

为了解多粘菌素耐药基因mcr-1在猪肠道微生物群落中的分布特征,本研究采集分离同一猪肠道样品中的多粘菌素耐药菌,利用PCR进行mcr-1基因检测,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对mcr-1阳性菌株进行种属鉴定与亲缘关系分析。结果显示,在收集获得的325株多粘菌素耐药菌中,136株(41.8%)含有mcr-1基因,包括大肠杆菌70株,肺炎克雷伯菌19株,放线杆菌47株。细菌蛋白指纹图谱进行聚类分析显示,70株mcr-1阳性大肠杆菌被划分为13个亚型,19株肺炎克雷伯菌被分为3个亚型,其中有17株菌属于同一亚型(占89.5%),47株放线杆菌均为同一克隆。上述结果表明mcr-1在肠道菌群中存在克隆传播现象,细菌指纹图谱的多样性也提示可能存在质粒或者其他转移元件介导的mcr-1水平传播。MALDI-TOF-MS作为一种新的技术,不仅能够实现细菌的快速鉴定,而且可基于细菌蛋白指纹图谱对菌株进行初步的亲缘关系分析。

猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立

本实验为了研究猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌7型(SS7)及猪链球菌9型(SS9)菌株对BALB/c小鼠的致病性,探究BALB/c小鼠作为猪链球菌动物感染模型的可行性以及作为后续实验的依据的可靠性。本研究通过腹腔注射猪链球菌感染BALB/c小鼠,对死亡小鼠进行无菌解剖分离菌株并培养,对培养的菌株进行革兰氏染色法和PCR鉴定;同时利用荧光定量的方法检测各个脏器细菌的载量和组织切片HE染色观察脏器的病理变化。实验结果显示:攻毒的小鼠出现典型的临床症状并死亡,经过实验验证后确定小鼠是由于感染猪链球菌而致病、致死;测定SS2、SS7及SS9的LD_(50)分别为3.7×10^(7)、4.1×10^(7)、7.9×10^(7) CFU/mL。因此BALB/c小鼠对猪链球菌易感,可以作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。

非洲猪瘟病毒EP364R蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

非洲猪瘟病毒(ASFV)EP364R蛋白是ASFV的ERCC4核酸酶结构域。为了获得具有免疫原性的EP364R蛋白,本研究将ASFV EP364R基因构建到杆状病毒表达载体上,将重组质粒转座DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,获得重组BacmidEP364R质粒,将Bacmid-EP364R质粒转染至细胞中,收获上清,在正常细胞中传三代,以获得重组杆状病毒rBac-EP364R。使用Western blot和间接免疫荧光(IFA)实验鉴定重组蛋白得到表达及其免疫原性。本研究结果显示,在感染的细胞可检测到EP364R蛋白的表达,并可被His单克隆抗体特异性识别。结果表明杆状病毒系统成功表达EP364R蛋白并具有良好的反应活性,为后续开展ASFV血清学诊断和亚单位疫苗的研究奠定基础。

猪TRIM32分子的克隆、表达及其功能分析

TRIM32作为TRIM家族中的一员,在宿主先天性免疫防御中起着重要的作用。然而,现今对猪TRIM32分子的研究鲜有报道。首先,利用RT-PCR从猪肺中扩增获得了猪TRIM32分子,并将其克隆入真核表达载体p3xFlag-CMV-14,构建重组真核表达载体pFlag-porTRIM32。随后,在Marc145细胞上利用过表达猪TRIM32,鉴定其在PRRSV感染中的作用。此外,为了进一步验证其在PRRSV感染中的作用,在沉默Marc145细胞中内源性TRIM32表达的情况下,检测了PRRSV的感染情况。结果显示:成功构建了pFlag-porTRIM32真核表达载体;Western blot的结果显示,Flag抗体能识别瞬时表达的融合蛋白Flag-porTRIM32;在Marc145细胞上过表达猪TRIM32分子,可显著地抑制PRRSV的复制;相反,在Marc145细胞上干扰TRIM32的表达,可明显增加PRRSV的复制。因此,我们的研究结果初步揭示了猪TRIM32分子具有抗PRRSV感染的作用,为进一步探究猪TRIM32抗HP-PRRSV感染的机制奠定基础。

表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定

旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白的Marc-145细胞系。以PRRSV SH1株感染性克隆质粒为模板,通过PCR扩增N基因,并将其克隆到慢病毒载体中,获得重组慢病毒质粒pSin-Ires-Puro-N,将重组质粒pSin-Ires-Puro-N与辅助质粒psPAS2、pMD2.G、pRSV-Rev共转染293T细胞进行慢病毒包装,获得表达N蛋白的重组慢病毒颗粒并将其感染Marc-145细胞,嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,筛选几代后的细胞采用有限稀释法和终点稀释法获得稳定表达N蛋白的Marc-145细胞系。通过PCR鉴定表明细胞系中存在N蛋白基因,通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验验证N蛋白能在细胞系中能稳定表达。本研究成功构建了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系,为研制PRRSV新型复制缺陷型疫苗奠定基础。

乙型脑炎病毒结构蛋白PrM单克隆抗体的制备和分析

为了制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)结构蛋白PrM单克隆抗体,首先根据NCBI参考序列(GQ918133.2)设计PrM引物扩增目的基因,将目的基因构建至pColdⅠ原核表达质粒上;然后鉴定阳性克隆质粒并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达蛋白纯化后。免疫6周龄BALB/c小鼠,进行杂交瘤细胞融合,并对融合细胞进行克隆筛选;最后将筛选阳性的杂交瘤细胞制备腹水获取单克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,Western blot和间接免疫荧光检测抗体特异性和病毒感染过程。结果显示:成功构建了pCold I-PrM原核表达载体,PrM蛋白在1 mmol/L IPTG 16℃过夜诱导培养时表达量较高,亚克隆后经腹水制备获得2株针对PrM区域的单克隆抗体,Western blot和间接免疫荧光检测2株单抗能够特异性识别JEV的PrM区蛋白,获得的单抗能够鉴定JEV在细胞内的感染过程。本研究为进一步研究JEV鉴别诊断技术和生物学功能提供基础。

夜视环境分析及头盔式微光夜视仪的设计

本文研究了夜天光照射及激光助视下的景物反射辐射光谱特性,计算并分析了典型光电阴极对常见景物反射的光谱匹配系数及其对照度、对比度等参数的影响,并详细对头盔式微光夜视仪进行结构设计。

面源电子枪灯丝的热均匀性分析和设计

测试像增强器荧光屏的亮度均匀性,需要能够发射均匀电子的面源电子枪,设计面源电子枪要对灯丝各点发射的电子数量、电场分布、电子轨迹,以及均匀电子垂直轰击荧光屏几个方面进行理论分析和计算。指出在真空系统中面源电子枪灯丝的热均匀性是使灯丝各点发射的电子数量相等的先决条件,也是灯丝造型设计首先要解决的问题。在真空系统中,热辐射是影响面源电子枪灯丝各点温度的主要因素。参考相关资料,对热辐射均匀性进行了理论分析,推导出3种几何形状的热辐射公式;通过计算和比较,得出了锥状螺旋灯丝的热平衡较好的结论,为下一步电场分析和电子轨迹分析做好了准备。

像增强器亮度增益和等效背景照度测试仪的研制

亮度增益和等效背景照度是衡量像增强器性能的两个重要参数 ,针对这两个参数的测试要求 ,阐述像增强器亮度增益和等效背景的测试原理和测试仪的结构设计。利用研制的测试仪对多种型号的像增强器的亮度增益和等效背景照度进行了测试 ,给出并分析了测试结果。结果表明 。

表达GFP基因的马立克氏病病毒(MDV)转移载体的构建及初步应用

利用Primerprimer5.0软件设计两条引物,将loxP位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRESgpt为模板,扩增获得LoxPCMVgptIRESLoxP基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDVUS10区)的BalI位点,获得重组质粒pUSgptIRES(L);对重组质粒pUSgptIRES(L)进行测序分析,发现两同向的loxP位点正确插入到pUSgptIRES(L)中;将含有完整的GFP基因以及polyA尾的基因片段,连入pUSgptIRES(L)中,把gpt基因替换掉,从而获得重组质粒pUSGFPIRES(L)。将转移载体pUSGFPIRES(L)瞬时转染CHO细胞,可以观察到绿色荧光,说明GFP基因获得有效表达;将pUSGFPIRES(L)转染已感染MDVCVI988株的CEF细胞,可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒;通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线,发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合。为进一步探讨MDV在体内的特性奠定基础,同时,为Cre/LoxP重组酶系统在MDV中的应用奠定基础。

面源灯丝的热电子发射电流密度和均匀性分析

为了测试像增强器荧光屏的均匀性参数,需要均匀的电子发射源。根据真空热辐射特点,设计了3种面源灯丝造型的理论模型。对电子发射源造型进行了理论模拟、热平衡分析;在此基础上,参照热电子发射理论进一步分析了电子发射源的热电子发射电流密度,并分析电子发射源发射的热电子均匀性,得出最合理的灯丝造型,对电子发射源的理论研究和实际制作具有指导意义。