间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞 IBRS- 2增殖猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂 A株 ,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr2 0 0 0 0 )浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清 Ig G免疫家兔 ,HRP标记提取的兔抗猪 Ig G,制备出高效价的酶标抗体 ,酶标抗体工作浓度为 1∶ 5 0 0 0 0 ;经各种条件的选择 ,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接 EL ISA。所建立的间接 EL ISA抗原包被浓度为 39.2 mg/ L ,血清最佳稀释度为 1∶ 2 0 ,与猪细小病毒、猪瘟、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应 ,与标准阴性血清和临床未感染 PRV的猪血清呈阴性反应 ;与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应 ;与美国进口的 PRV抗体检测 EL ISA诊断试剂盒检测结果比较 ,45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为 10 0 %。表明建立的间接 EL ISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。

乳胶凝集试验与血清中和试验检测猪伪狂犬病血清抗体的比较

应用血清中和试验 (SNT)和伪狂犬病乳胶凝集试验 (LAT)诊断试剂盒对两种伪狂犬病标准阳性血清、伪狂犬病病毒 (PRV)高免血清及 6 0份被检猪血清进行了PRV抗体效价测定和相关性分析 ,两种方法测得的抗体效价之间呈强相关性 (r=0 .96 ) ,且LAT效价比SNT一般高出一个滴度 ;对来自 35个猪场的 414份猪血清进行了PRV抗体检测 ,并与SNT检测结果进行了对比 ,结果在SNT检测为阳性的 171份血清中 ,LAT检出阳性 16 8份 ,阳性符合率为 98.2 % (16 8/ 171) ,在SNT检测为阴性的 2 43份血清中 ,LAT检出 5 2份血清为PRV抗体阳性 ;对猪瘟、口蹄疫 (O型 )、猪细小病毒、猪衣原体四种标准阳性血清和来自无伪狂犬病猪场的 18头健康猪血清进行检测 ,检测结果均为阴性 ,其符合率为 10 0 % (2 2 / 2 2 )。结果表明 ,两种方法检测结果符合率高 ,特异性强 ,LAT比SNT敏感、快速简便和实用。

乳胶凝集试验检测鸡新城疫病毒血清抗体的研究

用硫酸铵沉淀、透析浓缩的鸡新城疫病毒 (NDV)抗原致敏乳胶 ,然后与鸡新城疫阳性血清进行方阵滴定 ,选择出最佳致敏条件并制成新城疫病毒乳胶抗原 ,由此建立起乳胶凝集试验 (LAT) ,用来检测新城疫血清抗体 ;用所建立的乳胶凝集试验 (LAT)和血凝抑制试验 (HI)同步检测 6 9份鸡血清 ,结果乳胶凝集试验阳性 6 2份 ,阴性 7份 ;血凝抑制试验阳性 6 6份 ,阴性 3份 ,两者的总符合率为 94.2 % (6 5 / 6 9) ,且两者的检出率基本一致。结果表明 ,乳胶凝集试验具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测等优点 。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的安全性和体液免疫研究

采用转瓶生产技术 ,在MARC 14 5细胞中增殖PRRSV克隆 2 0株 ,经过条件的优化选择 ,得到TCID50 ≥ 10 -7.55/mL的高滴度PRRSV溶液 ,为生产疫苗打下基础 ;所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性 ,能刺激猪产生特异性抗体应答 ,接种后第 14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大 ,冻干疫苗在 4～ 8℃保存有效期为 6个月 ,- 2 0℃保存有效期达 18个月 ,表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答 ,可用于PRRS的预防接种。

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达研究

采用RT-PCR方法自猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组分离出核衣壳蛋白基因(orf 7),克隆到pMD18-T载体构建成重组质粒pMD18N并进行测序比较,结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与PRRSV美洲型ATCC VR-2332株的同源性为100%,表明orf 7 是PRRSV基因组内很保守的序列;将orf 7亚克隆到原核表达载体pGEX-KG,构建成重组质粒pGEX-KGN,用pGEX-KGN转化表达菌株BL21,经SDS-PAGE和 Western-blot分析表明:克隆在谷胱苷肽转移酶(Glutathione S-transferase(GST)下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子量约为41kDa,并且有免疫学反应活性;这为猪繁殖与呼吸综合征的血清学诊断方法的建立打下了基础。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的安全性和体液免疫研究

采用转瓶生产技术,在MARC-145细胞中增殖PRRSV克隆20株,经过条件的优化选择,得到TCID≥10-7.55/mL的高滴度PRRSV溶液,为生产疫苗打下基础;所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性,能刺激猪产生特异性抗体应答,接种后第14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大,冻干疫苗在4-8℃保存有效期为6个月,-20℃保存有效期达18个月,表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答,可用于PRRS的预防接种。

坚持深化教学改革 打造国家精品课程

随着经济全球化的发展和我国加入WTO以后经济、文化形势的变化，以及我国高等教育内部发展规模不断增长等因素的影响，高等农业教育所面临的内外环境发生了巨大的变化，社会对动物科学和动物医学人才的需求量日益增多，招生量随之不断扩大，同时，对所培养的人才也提出了更高的要求。为了应对这种高要求和高速度的发展，

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒，而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清，其中血凝抑制抗体阳性为161份，阴性为42份，阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份，阴性为53份，阳性率为73.89％，两种方法阳性符合率为93.16％，经统计学检验P＞0.05，两者差异不显著。结果表明，乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛，具有简便、准确的优点，在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。

乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病血清抗体的研究

用ＢＨＫ－２１细胞增殖猪伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）鄂Ａ株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇浓缩后与等量经胰酶处理的乳胶制成凝集试验抗原。此抗原与伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清以及新鲜血清样品均呈现明显的凝集反应；与标准阴性血清和临床未感染ＰＲＶ的猪血清均不发生凝集反应；与猪瘟阳性血清、衣原体病阳性血清均呈阴性反应。证实所建立的乳胶凝集试验具有微量、简便、快速、敏感性高、特异性强的优点，可用于伪狂犬病抗体的定性和定量检测，特别适宜基层现场检疫应用。

神经肽Orexins的研究进展

orexins是一组神经肽 ,分为orexinA、orexinB (OXA、OXB) 2种 ,它们来源于同一前体。orexins主要由下丘脑神经元产生 ,通过其神经纤维的直接投射或释放入脑脊髓液作用于靶位点 ,激活 2种与G蛋白耦联的细胞表面受体OX1R、OX2 R ,参与机体对摄食、能量代谢、睡眠—觉醒循环等生理活动的调节。

Orexin A在鹌鹑间脑内定位分布的SABC法研究

采用免疫组织化学SABC法 ,研究orexinA在鹌鹑间脑内的分布。结果显示 ,orexinA阳性神经元胞体主要分布在间脑中下丘脑区的室旁核、室周区、外侧核和后内侧核 ,其阳性纤维则投射到丘脑和下丘脑的广大区域 ,其中在圆核、三角核、前脑外侧束、第五额束、视顶盖、中央白质层和外侧核等处较密集。结果表明orexinA存在于鹌鹑的间脑内 ,但其分布与大鼠之间有明显的差异。

课堂教学中实现育人目的的“四个结合”

育人是润物无声的系统教学工程,要以多种形式贯穿于每个教学环节。小动物疾病学课程主要是通过"每讲赠言"实现育人目的的。每讲赠言仅仅围绕"四个结合"展开,内容均为原创,均与学校、学院、专业、行业或自我发展有关。所谓"四个结合"是指与学校精神内涵结合,与专业培养目标结合,与学生人生蓝图结合和与社会当下形势结合,旨在引导学生认清自我、认清专业、认清学校和认清社会。

动物医学专业创新性人才培养途径的初步研究——以塔里木大学“悬疑讲堂”为例

以塔里木大学悬疑讲堂为例,介绍了"悬疑讲堂"的设立性质、讲座内容、组织方法和学习效果,探讨了动物医学专业创新性人才培养的途径。认为"悬疑讲堂"的自由开放的方式,活跃的氛围,培养学生创新性思维的环节以及将兽医史、哲学文化、专业内容融为一体的做法值得推广。

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了1对寡核苷酸引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出445 bp片段,回收该片段用EcoR Ⅰ酶切得到了预期的结果,证实了该扩增片段的特异性.敏感性试验表明,该方法可以检测出104个TCID50的病毒含量.利用该方法对临床上24份流产病料的检测,查出阳性16份,而同时利用HA检测阳性只有10份.这些结果说明本试验建立的PCR诊断方法灵敏度高、特异性强.

神经肽Orexins的研究进展

orexins是一组神经肽,分为orexinA、orexinB(OXA、OXB)2种,它们来源于同一前体。orexins主要由下丘脑神经元产生,通过其神经纤维的直接投射或释放入脑脊髓液作用于靶位点,激活2种与G蛋白耦联的细胞表面受体OX1R、OX2R,参与机体对摄食、能量代谢、睡眠—觉醒循环等生理活动的调节。

猪繁殖与呼吸综合征病毒orf7和orf5双基因的原核表达研究

根据PRRSV已知序列设计两对引物,采用RT-PCR方法分别扩增orf7和orf5基因片段。利用EcoRI、SpeI和HindⅢ位点将orf7和orf5基因片段依次克隆到pMD-18T载体,构建成重组质粒pMD18NE,并比较所克隆基因序列的同源性。将串联的orf7和orf5基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG,构建重组原核融合表达质粒pGEX-KGNE,并转化BL21,SDS-PAGE和Western-blot分析表明:orf7和orf5基因与GST获得了融合表达,并且表达的融合蛋白GST-NE具有免疫学反应活性,这为猪繁殖与呼吸综合征血清学诊断方法的建立及疫苗研究打下基础。

马先蒿水煎液对小鼠血清ALT、ALP、AST的影响

目的:探索西北草场生长的马先蒿的毒性作用。方法:将85只昆明小鼠分5组,1个对照组和4个试验组,对照组饮用清水,4个试验组饮用等量不同浓度的马先蒿水煎液1～3周,分别于试验后第7天、第14天和第21天采集小鼠血液并分离血清,用ELISA试剂盒分别检测小鼠血清中AST、ALT、ALP水平。结果:不同浓度的马先蒿水煎液均可使小鼠AST、ALT水平升高;除高浓度组小鼠ALP浓度下降外,其它各试验组小鼠ALP水平升高。结论:马先蒿水煎液可引起小鼠肝功能损伤。

鸵鸟骨骼的解剖学观察

本文采用解剖学方法，对成年非洲鸵鸟骨骼进行了观察。发现，鸵鸟胸骨极为发达，正方形舟状，无龙骨突，形成平胸。全部腰椎和荐椎与最后２个胸椎及前２个角椎愈合成一整体的腰荐骨。后肢骨特别发达。两侧耻骨在中心线以软骨连接，形成不开放的骨盆联合。鸵鸟的解剖学结构其生活习性和生理功能相适应。