酶法合成核苷类抗病毒药物

综述了近几年酶法合成核苷类抗病毒药物的研究进展，主要包括核苷磷酸化酶、Ｎ－脱氧核糖转移酶的应用，以及应用一些酶进行糖或碱基的修饰等方面。

发酵法生产D-核糖

D 核糖是一种重要的生理物质 ,可用于合成维生素B2 ,风味提高剂以及多种核酸药物等 ,具有广泛的应用前景。由于化学合成法存在污染公害 ,故近年来各国相继研究微生物发酵法生产D 核糖 ,并致力于工业化生产。本文对国内外D 核糖的研究进展作了综述 ,并对D 核糖的提取方法进行了探讨。

酶法合成胸苷

综述了酶法合成胸苷的反应机理，并列举了６个应用实例。

核糖在保护心脏功能中的作用

磷酸戊糖途径在所有动物心脏中的发育都是不好的。心肌缺血之后重新灌流时 ,其心肌ATP水平要经过好几天才能恢复到正常水平。文章综述了核糖溶液灌注心肌细胞 ,可明显提高ATP的恢复速度 ,促进ATP合成 ,改善心脏功能。

酶法生产三氮唑核苷的进展

三氮唑核苷（Ribavirin）化学名为1-β-D呋喃核糖苷-1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺（1-β-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide）,其化学结构式为:

应用固定化细胞连续生产胞二磷胆碱的研究

利用酵母糖酵解-分子葡萄糖可使二分子ADP磷酸化的特性,并应用固定化技术将酵母细胞固定化,便可成为能反复使用的ATP再生体系。当此体系与酵母中存在的胞苷酸激酶、胞二磷胆碱焦磷酸化酶偶联时,在反应溶液中只要添加葡萄糖、磷酸盐、胞苷酸和磷酸胆碱即可生成胞二磷胆碱(图1)。这种固定化酵母是带有ATP再生的多酶体系的综合应用,它还可以用于S-腺苷甲硫氨酸、辅酶A、辅酶Ⅱ等需要ATP参与的各种生物合成反应。

利用固定化酵母细胞生产ATP

利用明胶戊二醛制备的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷酸(AMP)生产腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)。在含有15 mmol/L AMP,75 mmol/L葡萄糖,5mmol/L硫酸镁(MgSO_4·7 H_2O)的0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)中,在34℃振荡反应1h,ATP转化率可达100%,分批连续反应10次,ATP转化率保持在90%以上。

应用D903大孔离子交换树脂提取鸡蛋清溶菌酶

<正> 溶菌酶广泛存在于高等动物组织及分泌物、植物和各种微生物中,在新鲜鸡蛋中含量最高。国外采用直接结晶法或离子交换树脂法制备溶菌酶。我国禽蛋厂常用鸡蛋清或蛋壳上残留的蛋清为原料,用724离子交换树脂提取方法。本文介绍的是采用新型的D903大孔离子交换树脂的提取方法,此法蛋清溶菌酶的提取得率为0.2％,比活>2.4×10~4μ/mg。一。

固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。

酶法合成三氮唑核苷新工艺的研究

本文报道经过低温、培养基条件诱导选育所得的乙酰短杆菌TQ952菌株,在8L和100L发酵罐培养以及该菌体在酶反应过程的优化试验。以100mmol/L鸟苷和三氮唑甲酰胺为底物,利用TQ952菌体的核苷磷酸化酶催化反应,其三氮唑核苷平均转化率86％,最高95％。

D-核糖产生菌的选育及发酵

以枯草芽孢杆菌Ｄ－２ 为出发菌株，经紫外诱变，得到一株莽草酸缺陷型突变株Ｄ－２０２，摇瓶发酵Ｄ－核糖产量可达到５２．６ｇ／Ｌ。该菌遗传稳定性良好。通过发酵条件的优化，最高产量可达６５ｇ／Ｌ。经２ｔ发酵罐中试，发酵单位达到５０ｇ／Ｌ。

用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ-卡拉胶 -魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞 ,经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱 (CDP-胆碱 )。结果表明 :2 5 0 m L摇瓶中加入 5 0 m L反应液 (葡萄糖 40 0 mmol/ L,CMP1 0 mmol/ L,磷酸胆碱 5 0 mmol/ L,K2 HPO4 -KH2 PO4 缓冲液 1 0 0 mmol/ L,Mg SO4 1 0 mmol/ L,p H=8.0 ) ,固定化细胞 1 2 0 0 g/ L,3 4°C、1 5 0 r/ min下 ,反应 4h后补加 40 0 mmol/ L葡萄糖 ,反应 8h可使60 %以上的 CMP转化为 CDP-胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶 I(NAD+ )后 ,固定化细胞可连续使用 4次 ,CDP-胆碱转化率维持在 40

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取 5′-磷酸二酯酶 ,酶活可达 474U/ m L。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸 ,得到 5′-CMP、UMP、GMP、AMP 4种单核苷酸。最佳反应条件为 :底物 RNA浓度为0 .0 1 g/ m L,每毫升底物的酶用量为 3 0 U,酶解温度 70°C,p H7.0 ,时间 2 h,5′-核苷酸转化率达80 %。

酶法合成抗癌新药氟铁龙前体——5-FUR

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌 ,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新药氟铁龙前体 5-氟尿苷 ,所用反应物为鸟苷和 5-氟尿嘧啶。在 1 50 m L的摇瓶装液 1 5m L的条件下进行研究 ,结果显示 :菌体添加量 2 0～ 30 g/L,底物浓度 1 0 0 mmol/L,磷酸盐浓度 50 mmol/L( p H8.0 ) ,60°C,摇床转速 1 60 r/min,反应 4h,5-氟尿苷的转化率可以达到 60

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４°Ｃ干燥处理２～３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。

酶法合成2＇－脱氧－5－氟尿苷

本文采用大肠杆菌核苷磷酸化酶，以５－氟尿嘧啶（ＦＵ）、２＇－脱氧尿苷（ｄＵ）和磷酸盐为底物酶法合成２＇－脱氧－５－氟尿苷，实验结果表明，含１０ｍｍｏｌ／ＬｄＵ、３０ｍｍｏｌ／ＬＦＵ、１０－３０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐的混合物加入５％培养２４ｈ的大肠杆菌湿菌体于ｐＨ７．０反应３ｈ，底物ｄＵ的转化率可达４５．９％。

核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究

以鸟苷和 5 氟尿嘧啶为底物 ,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成 5 氟尿苷。采用酵母浸膏培养基(酵母浸膏 4.0 % ,葡萄糖 0 .4% ,NaCl 0 .3 % ,pH7.0 ) ,较高的溶氧量 ,同时添加 0 .6 %的豆油 ,培养 12h ,产酶量可提高 30 %。

添加物对D-核糖生物合成的影响

采用枯草杆菌D2 0 1转酮醇酶缺陷型突变株 ,研究菌种生长与D 核糖合成优化工艺。在培养剂中添加山梨醇、KH2 PO4和芳香族氨基酸 ,发现对菌的生长有刺激作用 ,特别是山梨醇 ,它可缩短延迟期 ,促进菌的生长。此外 ,用葡萄糖酸钙部分代替葡萄糖能增加D 核糖的产量 ,用葡萄糖和葡萄糖酸的混合碳源发酵 ,D 核糖产量可达到 5 2 g/l。

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ 卡拉胶 魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞 ,由腺苷 (AR)生产三磷酸腺苷 (ATP)。采用HPLC法分析固定化细胞反应过程核苷 (酸 )的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化。固定化细胞反应 1h ,ATP转化率接近 10 0 %。底物溶液灭菌和添加NAD+后 ,该固定化酵母细胞可反复使用 12次 ,ATP的转化率稳定维持在 95 %以上。

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。