医学院校实验室准入制度实践与研究

实验室是学生教学、科研的主要场所,同时也是培养社会责任感的教学基地。实验室安全准入制度为其提供保障条件。文章以广东医科大学—生物化学与分子生物学实验室为例,剖析存在的主要问题,通过实践实验室的安全准入制度,阐述生物化学与分子生物学实验室安全准入制度的必要性及效果性,提升实验室的安全水平,为其他院校提供经验之谈。

1q21扩增型乳腺癌致癌基因的研究进展

乳腺癌是一种异质性较高的肿瘤,染色体扩增是驱动肿瘤细胞异质性的主要原因之一。1q21区域的扩增是人类乳腺癌中最常见的基因组拷贝数变化事件,该区域扩增型乳腺癌患者的疾病进展、耐药性和死亡的风险均增加。与1q21扩增相关的染色体畸变会导致该区域内致癌基因的表达失调,进而诱发乳腺癌转移、化学耐药及肿瘤复发等。该文对1q21扩增型乳腺癌相关的致癌基因及其功能研究进行综述,以期为开发和优化针对1q21扩增型乳腺癌的诊疗提供科学依据。

化州柚不同栽培品种总黄酮及柚皮苷含量的比较研究

目的通过对化州柚不同栽培品种总黄酮和柚皮苷的含量考察,分析比较不同品种间的质量差异,为进一步筛选优良品种,实现该药材资源的合理应用和规范化种植奠定坚实基础。方法以柚皮苷为对照品,利用紫外分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定柚皮苷含量。结果大茶岭和凤尾中总黄酮分别为19.24%,18.06%;柚皮苷的含量分别为11.72%,12.38%,均明显高于其他栽培品种。结论不同栽培品种的化州柚中总黄酮和柚皮苷的含量均不相同,大茶岭和凤尾这两个品种的品质可能较其他品种好。

乙烯利刺激对檀香叶中总黄酮含量的影响

【目的】建立檀香叶总黄酮含量的测定方法，分析乙烯利刺激对檀香叶中总黄酮含量的影响。【方法】采用紫外分光光度法测定檀香叶中总黄酮含量。【结果】未经刺激的檀香叶总黄酮含量在69．67～72．81mg／g之间。经过刺激的檀香叶总黄酮含量在105．71～167．98mg／g之间。【结论】乙烯利刺激能提高檀香叶中总黄酮含量。

檀香萜烯合成酶基因的克隆与序列分析

目的通过克隆技术获得参与檀香挥发油形成的萜烯合成酶基因。方法利用CTAB-LiCl法提取檀香已结香心材总RNA,采用RT-PCR技术克隆萜烯合成酶基因。结果克隆获得了一个檀香萜烯合成酶基因,该基因编码区全长1 731 bp,编码576个氨基酸残基。结论 CTAB-LiCl法能提取较高质量的檀香心材总RNA,克隆获得的萜烯合成酶具有编码区。

乙烯利刺激对檀香叶中多糖含量影响的初步研究

目的:建立檀香叶水溶性多糖含量的测定方法,分析乙烯利刺激对檀香叶中多糖含量的影响。方法:分别采用蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法两种方法,利用紫外-可见分光光度计测定檀香叶中水溶性多糖的含量。结果:两种方法测定的檀香叶中水溶性多糖含量在8.86%～15.61%之间。结论:两种方法简便、准确、重现性好,均可用于檀香叶多糖含量的测定;乙烯利刺激檀香能提高其叶片中水溶性多糖的含量。

甲型流感病毒H1N1亚型HA基因的克隆及序列分析

目的克隆甲型流感病毒H1N1亚型血凝素HA基因,并对其进行序列分析。方法利用TRIzol Rea-gent法提取甲型流感病毒H1N1亚型的总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增HA基因,经酶切、连接后,构建pET 28a(+)-HA重组质粒。利用生物信息学工具对HA的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果成功构建了pET 28a(+)-HA重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的HA基因序列同源性达到99%。结论对HA基因进行克隆及生物信息学的分析,为深入研究HA在病毒侵入细胞及抗原变异中的作用机制及后续HA抑制剂的体外筛选奠定基础。

人Hsp90α基因克隆、中试发酵及生物信息学分析

目的:克隆获得人热休克蛋白90α(Hsp90α)基因,构建其原核表达载体,分离纯化重组蛋白,为Hsp90抑制剂的体外筛选奠定基础。方法:TRIzol Reagent法提取K562细胞总RNA,通过RT-PCR获得Hsp90α-cDNA。以该cDNA为模板PCR扩增Hsp90α基因,目的基因和质粒pET28a(+)经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接酶切片段,将重组DNA转化DH5α,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导,经条件优化后进行中试发酵、纯化以及Western blot鉴定。结果:原核表达载体pET28a(+)-Hsp90α成功构建,可在Rosetta(DE3)中正确表达,中试发酵收菌574g且表达产物以可溶性形式存在,纯化产物纯度为97%。结论:利用分子克隆技术建立了Hsp90α基因的原核表达和中试发酵的条件,为更深入地研究其在抗肿瘤治疗中的作用打下基础。

中药诱导间充质干细胞成骨分化信号通路的研究进展

间充质干细胞(MSCs)来源于中胚层,具有自我更新、修复机体系统和多向分化潜能的细胞。近年来已筛选出许多诱导MSCs成骨分化的中药单体。该文总结了中药诱导MSCs成骨分化作用及其相关信号通路。

人Aurora B基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

目的:克隆出人Aurora B基因,并将其于大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达,获得重组蛋白。方法:利用TRIzol Reagent法提取食管癌ECa 109细胞总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增Aurora B基因,构建pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,将其转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG体外诱导表达重组蛋白。利用生物信息学工具对Aurora B的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果:成功构建了pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人Aurora B基因序列同源性达到了99%;获得Aurora B蛋白,大小约39kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的28%。结论:对人Aurora B基因进行克隆、原核表达及生物信息学分析,为深入研究Aurora B在细胞周期调控中的作用机制及后续Aurora B抑制剂的体外筛选奠定基础。

GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究

食管癌在中国是高发性肿瘤,并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质,葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatedprotein,GRP78)作为分子伴侣,在蛋白质的折叠、组装、修饰和错误折叠蛋白的降解过程中发挥着重要作用。该研究通过构建pGRP78-EGFP-N1重组质粒,瞬时转染ECA-109细胞,研究GRP78过表达对细胞增殖能力的影响;采用RNA干扰技术,瞬时转染靶向GRP78的siRNA,研究敲低GRP78对细胞增殖能力的影响。该研究发现GRP78过表达后,更多的细胞从G1期进入S期和G2/M期,细胞增殖速率加快,细胞克隆形成率亦明显提高;敲低GRP78后,细胞更多地被阻滞在G1期而无法进入S期和G2/M期,细胞增殖速率减慢,细胞克隆形成率降低。GRP78可能通过调节细胞周期而促进ECA-109细胞的增殖。

多胺代谢在精神分裂症中的研究进展

多胺代谢在中枢神经系统和其他器官的多种细胞功能中发挥重要作用。越来越多研究表明多胺代谢与精神分裂症(schizophrenia,SCZ)的病理变化密切相关。在SCZ患者和该疾病的动物模型中,已经证实了多胺以及其前体、衍生物、代谢酶和相关基因表达的变化。该文就多胺代谢在SCZ中的研究进展进行综述,以期为靶向多胺代谢的SCZ治疗提供新的思路。