抗体监测在规模猪场猪繁殖与呼吸综合征防控中的预警作用

为了揭示猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体水平在免疫猪群与非免疫猪群中的变化规律,本研究选取福建省龙岩市两个规模相似的自繁自养猪场,其中一个场免疫国内某厂家的TJM-F92株,另一个场不进行免疫。试验采用ELISA方法对两个场不同周龄的商品猪进行PRRS抗体检测及分析,通过RT-PCR方法对临床样品中检测到的两株PRRSV的ORF5基因进行测序,并结合参考株进行序列分析。抗体检测结果表明,未免疫场248份血清中PRRS抗体阳性率从4周龄的70.0%下降至10周龄的26.7%,14周龄后抗体阳性率开始上升直至18周龄,保持在97.1%~100%;免疫场170份血清中未免疫的2周龄抗体水平较高,阳性率为100%,免疫后除6周龄、8周龄、10周龄分别为80%、70%、90%,其他周龄均为100%。ORF5基因遗传演化分析表明,免疫场检出毒株为HP-PRRSV,与HP-PRRSV(JXA1、HuN4等)、疫苗株HP-PRRSV TJM-F92等的同源性为70.5%~93.8%,并与JXA1、HuN4等处于同一小分支。未免疫场检出毒株与PRRSV NADC30株同源性为87.2%,属于NADC30-like分支。因此,当发现PRRS抗体阳性率较低、出现个别S/P值高且离散度大时,猪场要立刻采取处理措施预防因PRRSV感染而引起的继发感染。表明抗体定期监测在疫苗免疫场和阳性稳定场PRRS防控上可发挥有效的预警作用。

6型及4型猪细小病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据6型猪细小病毒(porcine parvovirus 6,PPV6)和4型猪细小病毒(porcine parvovirus 4,PPV4)全基因组的保守区域基因序列,分别设计了2对特异性的引物和2种不同荧光基团标记的Taqman探针。经过条件优化,建立能够同时诊断PPV6和PPV4的双重荧光定量PCR方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性以及与常规PCR方法的符合率进行研究。结果显示,该方法能够同时检测鉴别PPV6和PPV4,且特异性良好,与猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及猪细小病毒1型核酸均无交叉反应;本方法灵敏性强,PPV6和PPV4的最小检出限分别为7.7拷贝/μL和9.3拷贝/μL;组间和组内变异系数均未超过2%,具有良好的重复性;利用所建立的双重荧光定量PCR方法对福建省采集的68份猪血清及20份组织样本进行检测,PPV6阳性率为37.5%(33/88),PPV4阳性率为12.5%(11/88),混合感染率为11.36%,该结果与常规PCR的符合率分别为81.8%(PPV6),90.9%(PPV4)和90.05%(混合感染率),并且常规PCR鉴定的阳性样品通过本研究建立的方法复检时均未出现漏检。结果表明,本试验建立的检测方法对PPV6和PPV4的鉴别诊断、病原监测、流行病学调查等具有重要意义。