17β-雌二醇对雄性金鱼卵黄原蛋白的诱导作用

采用腹腔注射17β-雌二醇的方法诱导雄性金鱼卵黄原蛋白产生,注射浓度为0.05mg·g-1BW,诱导2周后取尾静脉血,离心分离血浆,进行血浆常规聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过对卵黄原蛋白特性基团磷、脂和糖蛋白的染色,确定了卵黄原蛋白在电泳图谱上的位置,开发了一种简便、高效的定性卵黄原蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。电泳结果表明,在0.05mg·g-1BW的注射浓度下,2周后17β-雌二醇诱导了雄性金鱼卵黄原蛋白产生,并通过ELISA检测卵黄原蛋白的平均含量为690.2ng·mL-1,与对照组雄性金鱼平均含量为10.7ng·mL-1的差异极显著(P<0.01),比雌性对照组检出量285.5ng·mL-1高1倍多;17β-雌二醇诱导组雄鱼血浆钙离子和血总蛋白含量明显增加。

久效磷对真鲷鳃、肝和肾细胞超微结构的影响

0.5mg/L的久效磷处理真鲷4d和10d后 ,利用电子显微镜观察真鲷鳃氯细胞、肝细胞和肾小管细胞的超微结构变化,结果表明 :鳃氯细胞微小管严重水肿 ;肝细胞核膜水肿、溶解 ,部分线粒体外膜和嵴溶解 ,内质网明显水肿 ;肾小管细胞内质网和刷状缘严重水肿。

久效磷对雄性金鱼的生殖毒性研究

分别用 0 .0 1 ,0 .1和 0 .5mg/ L的久效磷暴露雄性金鱼 ,取尾静脉血进行血浆聚丙烯酰胺凝胶电泳和精子超微结构的电镜观察。结果表明 ,与对照组雄鱼和雌鱼相比 ,各浓度暴露组均发现了 1条特异性蛋白。这条蛋白带在电泳凝胶上的位置与 1 7β-雌二醇诱导雄性金鱼分泌的卵黄原蛋白相同 ,因而可以认定这条特异性蛋白为卵黄原蛋白 ;0 .0 1 mg/ L暴露组金鱼精子质膜局部出现溶解 ,0 .1 mg/ L暴露组的多数精子细胞质膜溶解并断裂 ,少量精子颈部中心粒复合体和线粒体溶解。

四种拟除虫菊酯类农药的环境雌激素活性研究

将金鱼(Carassius auratus)分别暴露于0.1mg/L甲氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯和0.5mg/L氯氰菊酯21d后,尾静脉取血,离心分离获得血浆,利用Western-blot方法检测金鱼血浆中是否有卵黄原蛋白产生,同时测定金鱼生殖腺指数、γ-谷氨酰转移酶和乳酸脱氢酶活性.结果表明,对照组雄性金鱼血浆中未检测到卵黄原蛋白,4种拟除虫菊酯农药均能诱导雄性金鱼分泌卵黄原蛋白,而且溴氰菊酯和氯氰菊酯明显降低了雄鱼生殖腺指数,4种农药均能够明显抑制精巢γ-谷氨酰转移酶和乳酸脱氢酶活性.由此可见,4种拟除虫菊酯类农药具有潜在的环境雌激素活性和生殖毒性.

久效磷对金鱼的环境雌激素效应的研究

采用0．01、0．1和1．0mg L^-1久效磷暴露金鱼21d，对其血浆样品进行了免疫印迹检测，检测发现，各暴露浓度的久效磷均能诱导雄性金鱼分泌卵黄原蛋白；对照组和三个暴露组金鱼精巢γ-谷胺酰转移酶（γ-GTP）活性分别为6．028、4．332、3．472和3．080U L^-1，经显著性检验，各浓度久效磷对γ-GTP活性的抑制作用显著；0．01mg L^-1久效磷暴露组金鱼精巢支持细胞的细胞膜、核膜和线粒体嵴部分溶解，脂滴增加；0．1mg L^-1暴露组支持细胞超微结构的损伤加重，胞质内出现了髓磷脂象，脂滴更多。检测结果表明，久效磷可能具有环境雌激素活性。

内分泌扰乱化学物质生物筛选技术研究进展

内分泌扰乱化学物质是环境科学领域研究的热点之一 ,已报道的内分泌扰乱化学物质达 10 0种左右 ,但环境中大量的具有内分泌扰乱作用的化学物质还没有被认定。因此开展内分泌扰乱化学物质的筛选是当前的首要任务。笔者综述了国外内分泌扰乱化学物质的活体和离体生物筛选技术最新进展 。

真鲷(Pagrosomus major)卵黄原蛋白的分离纯化及抗血清制备

采用分子筛和离子交换两步层析法分离纯化了真鲷(Pagrosomus major)的卵黄原蛋白(VTG),并采用非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了真鲷VTG的分子量,发现真鲷VTG在非变性条件下的分子量大约为450kDa;在SDS变性条件下,两条亚基的分子量大约分别为170kDa和120kDa。Western-blot检测结果表明这两条亚基都能够与真鲷VTG多克隆抗血清产生免疫反应,而真鲷VTG的170kDa亚基是检测真鲷VTG的特异性条带,且最低检出浓度为0.1μg L^(-1)。鼠抗真鲷VTG多克隆抗血清对真鲷VTG具有良好的特异性,这一结果为采用真鲷为模式生物检测海洋环境雌激素奠定了实验基础。

尼罗红-荧光光谱法测定布朗葡萄藻油脂含量的方法研究

布朗葡萄藻因胞外分泌物多、细胞壁厚、聚集生长等原因,不能用传统的尼罗红染色方法进行油脂含量测定。通过探索染色前处理和染色条件,优化了布朗葡萄藻的染色方法:藻液摇匀后超声波处理3 min(超声波参数为温度20℃、发射功率100 W、频率40 k Hz),3 000×g离心去除培养基,用体积分数8%的DMSO重悬细胞,调整悬液OD750到0.16,每1 m L样品加入10#L 120μg/m L的尼罗红丙酮溶液(尼罗红质量浓度1.2#g/m L),40℃水浴锅中染色10 min,荧光激发光波长520nm。改进的方法促进了尼罗红与布朗葡萄藻的结合,提高了测定的稳定性和准确度。

蔬菜农药残留GC-MS分析方法改进与基质效应探讨

改进了国家标准GB／T5009．20-2003和农业部标准NY／T761—2004中的2种样品前处理方法，适用于GC—MS多农药残留检测。并探讨了基质效应的影响。使用GC—MS-SIM检测，做到了快速准确地检测多种农药残留、排除假阳性；采用基质标准结合单点校正进行定量分析，解决了保留时间的漂移。基质增强效应和个别有机磷农药拖尾的问题。建议使用农业部标准的改进方法进行多种农药的检测，而在甲胺磷或乙酰甲胺磷的单项检测中使用国标改进方法。采用2次脱水的国标改进方法，加标回收率在70％～105％；采用丙酮＋正己烷混合溶剂溶样的农业部标准改进方法，加标回收率在90％～105％（甲胺磷和乙酰甲胺磷在65％左右），2种方法的相对标准偏差均在15％以内。

枝管藻多糖对久效磷暴露水体中鱼类保护作用的研究

以金鱼 (Carassiusauratus)体内超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase,SOD)活力、乙酰胆碱酯酶 (Acetylcholinesterase,ACh E)活力变化为指标 ,观察了枝管藻多糖对久效磷暴露的水体中鱼类生理功能的影响。结果表明 :用枝管藻多糖灌胃鲫鱼 1 5d,枝管藻多糖能显著降低久效磷对鱼类体内 SOD活力的诱导和有效阻止久效磷对鱼类中枢神经系统 ACh E活性的抑制 ,具有拮抗久效磷农药对鱼类毒害的作用。

苯乙烯对几种海洋生物的急性毒性效应

在封闭静水式条件下,苯乙烯对小新月菱形藻和扁藻的96hEC50分别为8.96mg/L和5.94mg/L。苯乙烯对甲壳动物和鱼类的实验采取开放静水式方法。中国对虾仔虾和中华绒螯蟹幼蟹的96hLC50分别为7.96mg/L和72.77mg/L,牙鲆的96hLC50为18.55mg/L。按新化学物质危害评估导则中的分级标准,苯乙烯对两种实验藻和中国对虾的毒性属高毒性,对中华绒螯蟹和牙鲆具有中毒性。计算出苯乙烯的无影响阈值(ENEV)为0.594mg/L,可以为制定苯乙烯的水生生物安全阈值提供参考。

久效磷对黄鳝过氧化氢酶和Na^+,K^+-ATP酶活性的影响

采用静态急性毒性试验方法,研究了久效磷对黄鳝的鳃、肝脏和肾脏组织中过氧化氢酶(CAT)和Na+,K+-ATP酶活性的影响.结果表明:在水温为(20±2)℃的条件下,久效磷对黄鳝的96 h LC50为3.27 mg/L.经0.25,0.50,1.00和2.00 mg/L的久效磷暴露96 h后,0.25和0.50 mg/L暴露组黄鳝3种组织中的CAT活性均比对照组高,其中0.25 mg/L暴露组有显著升高(P<0.05);1.00和2.00 mg/L暴露组的CAT活性受到明显抑制,其中2.00 mg/L暴露组与对照组相比抑制作用显著(P<0.05);不同质量浓度的久效磷对黄鳝3种组织中的Na+,K+-ATP酶活性均表现出抑制作用,Na+,K+-ATP酶活性对久效磷的敏感性由大到小的顺序为鳃>肾脏>肝脏.

环境激素对鱼类内分泌轴线的干扰作用及其机制研究进展

多种环境激素能够影响鱼类的生长、发育和生殖,为进一步揭示环境激素影响鱼类生长、发育和生殖的机制,分析环境激素对内分泌系统中3个主要轴线的影响。鱼类下丘脑-垂体-性腺轴、下丘脑-垂体-甲状腺轴和下丘脑-垂体-肾间腺轴是影响鱼类生殖、生长发育和免疫应答的3个最主要轴线。环境激素对这3个内分泌轴线的影响主要包括与激素受体结合,干扰激素合成与分泌,干扰激素的代谢与运输,干扰神经内分泌系统的调节,最终表现为性激素、甲状腺激素和肾上腺激素等激素水平的改变。本研究展望了该领域的发展趋势与研究方向,为环境激素的筛选和生态风险评价提供了理论基础。

美国红鱼卵黄原蛋白的分离纯化及电泳性质鉴定

腹腔注射0.02mg/gBW17β-雌二醇,诱导美国红鱼1wk后取尾静脉血,离心分离得到的血浆经Sephacryl S-300 high resolution分子筛分离、纯化卵黄原蛋白.常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的考马斯亮蓝染色和糖、磷、脂的特征性基团染色结果表明,17β-雌二醇诱导美国红鱼产生了两种形式的卵黄原蛋白,以Native-PAGE方法计算出美国红鱼两种卵黄原蛋白的分子量分别为344×103和247×103,以SDS-PAGE方法得出卵黄原蛋白3种亚基的分子量为152×103、133×103和118×103.分子筛凝胶过滤能较好地分离纯化美国红鱼血浆中的卵黄原蛋白.

采用Caco-2和PC12细胞检测有机磷农药的细胞毒性

建立了采用哺乳动物细胞系Caco-2和PC12细胞检测有机磷农药细胞毒性的新方法。1 0μmol L甲基对硫磷、敌敌畏、氧乐果、辛硫磷处理经过单层培养的Caco-2细胞,随着农药处理时间的延长,Caco-2细胞跨上皮细胞电阻抗值逐渐降低,处理60min时,辛硫磷和甲基对硫磷对Caco-2细胞具有明显的透过性,约是正常组的1 5倍,4种农药对Caco-2细胞透过性由大到小的顺序为:甲基对硫磷,辛硫磷,敌敌畏,氧乐果;0 01μmol L的甲基对硫磷和辛硫磷使PC12细胞乙酰胆碱酯酶活性迅速降低,随着处理浓度的增加酶活性降低不明显;而小于1 0μmol L的氧乐果和敌敌畏呈现渐进降低的趋势,当浓度大于1 0μmol L时酶活性降低比较显著。

气相色谱-质谱联用法测定塑料中的十溴二苯醚

建立了气相色谱-质谱联用法测定塑料产品中的十溴二苯醚的方法,优化了色谱柱、进样方式、进样口温度、程序升温和离子源温度等仪器条件,十溴二苯醚的质量浓度与峰面积在较宽的范围内呈良好线性关系,方法的检出限为0.1mg/kg。加标回收率为93.2-95.7%,标准偏差为4.51-6.37,该法可满足实际塑料样品的分析检测。

金鱼(Carassius auratus)腺垂体激素细胞中的球形病毒及其细胞病理学研究

利用电镜技术 ,在金鱼腺垂体促性腺激素细胞、促甲状腺激素细胞和促生长激素细胞中发现了一种球形病毒及其发生基质。该病毒在细胞核中形成不规则形态的包涵体 ,病毒粒子直径为 80～ 10 0nm ,呈中等电子密度 ,无囊膜。病毒侵染造成了促性腺激素细胞、促甲状腺激素细胞和促生长激素细胞的核膜溶解 ,染色质变性解体 ,内质网膨胀以及线粒体内嵴与外膜的溶解。此外 ,病毒的增殖导致了腺垂体中大量促性腺激素细胞、促甲状腺激素细胞和促生长激素细胞的凋亡。

铌酸锂晶体中本征缺陷的模拟计算

在现有晶体势参数的基础上,利用GULP软件计算了铌酸锂(LiNbO3,LN)晶体的各类本征缺陷的缺陷生成能,并对LN晶体中可能存在的缺陷反应进行了讨论。结果表明,LN晶体中最容易形成(++4VLi-+Nb4+Li)缺陷,且这两类点缺陷倾向于以缺陷簇的形式存在。与此同时,LN晶体中还可能形成(2VLi-+V2+O)缺陷。

食品中己烯雌酚的检测方法

己烯雌酚是人工合成的雌激素,主要添加在饲料中,能引起人体内激素失调等疾病。综述了己烯雌酚的理化性质、存在的危害、测定方法等,重点介绍了己烯雌酚的定性和定量测定方法,为我国食品检测方法的研究提供借鉴的依据。

久效磷对金鱼精巢超显微结构和特征性酶活性的影响

用0.01、0.10、1.00 mg.L-1久效磷暴露金鱼21 d,测定了精巢乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)的活性,并观察了精巢显微和超微结构的变化。结果表明:久效磷暴露21 d,精巢小叶基膜断裂,Leydig氏细胞水肿,小叶间质扩大,支持细胞核膜溶解,胞质内脂滴和髓磷脂象数量增多。1.00 mg.L-1久效磷造成了生殖腺指数的显著下降,对精巢发育有一定程度的延迟作用。随着久效磷暴露浓度的升高,LDH,ACP,ALP的活性逐渐下降,0.10、1.00 mg.L-1久效磷暴露组精巢LDH,ACP的活性下降显著,而各暴露组的精巢ALP活性呈现不显著下降趋势。推测久效磷可能通过损伤精巢超显微结构和降低LDH,ACP和ALP活性,干扰精巢能量代谢,造成对雄性金鱼的生殖毒性。