HSP70基因对B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞生物学功能的影响

为了研究热休克蛋白70(HSP70)基因对C57BL/6J-角膜混浊(B6-Co)小鼠眼睑成纤维细胞生物学功能的影响,本试验将前期研究并验证的siRNA-HSP70转染C57BL/6J(B6)小鼠眼睑成纤维细胞敲低HSP70基因,体外构建HSP70基因过表达载体转染B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞过表达HSP70基因,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证转染效率;CCK8法检测B6和B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的增殖水平;Annexin V-FITC法检测B6和B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的凋亡水平,Transwell试验检测B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的迁移能力。结果显示,B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞转染HSP70基因过表达载体后,HSP70在mRNA和蛋白水平的表达均极显著提高(P<0.01);siRNA-HSP70组B6小鼠成纤维细胞增殖水平极显著低于siRNA-NC组(P<0.01),凋亡水平显著高于siRNA-NC组(P<0.05或P<0.01);pcDNA3.1-HSP70质粒转染组B6-Co小鼠成纤维细胞增殖水平和细胞迁移能力均极显著高于pcDNA3.1-NC组(P<0.01),凋亡水平极显著低于pcDNA3.1-NC组(P<0.01)。结果表明,B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞转染过表达质粒后,HSP70基因表达显著提高,并显著促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡;B6小鼠眼睑成纤维细胞中敲低HSP70基因表达后,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;故HSP70表达水平显著影响成纤维细胞的生物学行为。

B6-Co小鼠角膜病的细菌学因素探讨

目的探讨B6-Co小鼠角膜浑浊形成的细菌学因素。方法以正常B6和B6-Co小鼠为研究对象,从不同日龄组的小鼠眼部取角膜分泌物或角膜刮片,分别接种到血平板和营养肉汤上,恒温培养24h。挑取菌落或肉汤管内的悬浮液涂片,革兰氏氏染色,镜检,记录结果。将纯化培养获得的细菌进行鉴定。结果正常B6小鼠与角膜浑浊小鼠存在角膜细菌学差异。结论B6-Co小鼠角膜混浊与微生物感染有关。

遗传性角膜基质变性小鼠及其突变基因的定位

以ENU诱导C57BL/6小鼠获得的角膜浑浊突变系小鼠(B6-Cd)为研究对象,遗传试验及病理切片证实为单基因显性遗传的角膜基质变性;采用连锁分析法,用39个微卫星对角膜基质变性小鼠的150只F2代个体[(B6×D2)F1×D2]进行基因组扫描,发现突变基因与D13M it262(距着丝粒42.6 cM)的LOD值为40.54,与D13M it76(距着丝粒47 cM)的LOD值为38.77,突变基因初步定位于13号染色体距着丝粒45.24 cM处.本研究提供了一种人类遗传性角膜基质变性的极好模型,为该病发生机制、药物开发及突变基因的克隆提供了新型材料.

光化学法诱导建立兔脑梗死模型的效果及特征(英文)

背景:脑梗死动物模型是研究人的脑梗死疾病的前提和条件。传统的模型制作方式有两种,一种是采用开颅结扎或电凝血管方法阻断供血动脉;另一种是采用导管法引用栓子或水凝胶微球栓塞供血动脉。但这两种模型制作不易,结果不稳定,应用受到限制。光化学法诱导建立脑梗死动物模型是一种新方法。目的:应用光化学诱导法建立兔局灶性脑梗死模型。设计:单一样本实验。可行性及其特征,探索人类脑梗死疾病的新的实验研究手段。单位:南通大学实验动物中心。材料:实验于2003-05/11在南通大学实验动物中心(二级实验室)完成。随机选取1012月龄日本大耳兔63只,雌33只,雄30只,体质量1.7～3.3kg。方法:兔麻醉后,沿颅骨的中央与眼后角垂直交叉处纵行切开皮肤约2cm,暴露颅骨,刮离骨膜,在矢状缝左(或右)侧外0.5cm与冠状缝后0.5cm处,用钻头直径0.5cm的颅钻钻透颅骨,造成颅骨圆形洞窗,随即由耳缘静脉按1mL/kg一次性缓慢注入35g/L四氯四碘荧光素钠盐。约3min后用冷光源(波长540nm,功率140lx)对准颅骨洞窗,连续照射8min后,缝合皮肤切口。术后24h,进行神经缺失功能5分制评分(0分:无神经损伤症状;1分:对侧(左侧)后下肢肌张力降低,回缩反射减弱;2分:对侧肢体瘫痪明显,后肢外展;3分:行走明显向外侧拖行,躯体倾向对侧;4分:不能自发行走和意识丧失)。术后48h处死兔,测量梗死灶面积、体积,并制作病理切片观察损伤程度。主要观察指标:兔肢体功能状态,脑梗死灶面积和体积,病理损伤程度。结果:59只兔成功建立起梗死灶,模型成功率为98%。①神经功能缺失评分:56只兔为1或2分,有3只兔达到3分。②梗死灶平均面积为(0.465±0.012)cm2,平均体积(长×宽×高)为(0.268±0.009)cm3。③切片观察损伤程度:梗死灶呈典型的损伤、渗出和炎症反应病理过程。轻度22只(37%)。中度32只(54%)。重度5只(9%)。结论:①应用光化学法诱导兔脑梗死模型制作简单、快速、重复性好,短时间内即可制作较多的供各种研究目的使用的模型。②模型动物存活时间长,死亡率低,有利于慢性脑血管病的研究。③此方法避免了对脑血管和脑组织的机械损伤。④可根据需要选定皮质区域制作梗死灶,梗死灶大小恒定并可控制其大小和深度,为皮层定位研究提供方法。⑤该模型可造成血小板聚集及血管内皮细胞损伤,为抗血小板聚集药物及脑缺血保护疗法的研究提供可能性。⑥但此模型也有其局限性犤9犦:由于血栓阻塞发生于终末动脉,所以不利于侧支循环及再灌注损伤的研究;该模型更近似于人类微血管病变,而不能说明人类其他缺血性卒中的发生机制。

光化学法诱导兔脑梗塞模型

应用光化学诱导法建立免局灶性脑梗塞模型,为临床治疗人的脑梗塞疾病提供有效的实验研究手段。结果显示,模型制作成功率98%,梗塞灶面积为0.465±0.012 cm2,体积为0.268±0.009 cm3,梗塞灶呈典型的损伤、渗出和炎症反应病理过程。结果提示,光化学诱导法建立免局灶性脑梗塞模型方便、快速、稳定。

浅谈实验动物学教学

实验动物学课程已逐步在相关院校开设起来。作为一门新兴学科 ,实验动物学教学有许多问题亟需实验动物学教学工作者去探索解决。本文从实验动物学教学的必要性 ,教学内容安排 ,教学方法 ,教学效果评价 ,教学发展趋势等方面作了初步探讨。

现代科学技术革命与实验动物科学

实验动物科学是在现代科学技术革命带动下诞生的一门综合性的新兴学科 ,是现代科学技术的重要组成部分。为了更好地推进生命科学等相关领域的科技进步和创新 ,促进人类生存质量的不断提高 ,必须大力发展实验动物科学。本文在就此进行充分论述的基础上 。

深切缅怀李厚达教授

2022年12月30日,敬爱的长者、慈爱的老师、杰出的实验动物科学家及教育家李厚达教授永远离开了我们。2023年12月16日,在先生仙逝一周年之际,扬州大学兽医学院举办了实验动物学专业人才发展暨科技创新论坛,并隆重开展了“致敬李厚达教授”的追思活动。来自全国各地的200余名知名学者、扬州大学实验动物专业的毕业生及李厚达教授的挚友齐聚扬州,深切缅怀李厚达教授积极进取、艰苦创业、成果卓著的精彩人生。

外科教学实验犬重复利用率的比较研究

目的 :确立提高外科学总论实验犬重复利用率的最佳途径。方法 :把实验犬以年度分组 ,共分 3组 ,采取不同的护理措施 ,对其结果进行统计分析。结果 :对教学实验犬术后采取保温 ,抗菌 ,呼吸严重抑制者肌注盐酸洛贝林注射液 3 mg/条。腹腔手术后的犬继续禁食 2 4～ 3 6h后 ,饲以稀粥状全价饲料。教学实验犬的重复利用率由原先的3 .0 6,提高到 4 .88。结论 :改进并加强外总实验犬的术后护理 ,能显著提高实验犬的重复利用率 ,有效地节约教学经费。

SNP标记对角膜混浊小鼠突变相关基因的精细定位

为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提取F2代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明:B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283～113 397 654bp之间,因该区间内有5个已知基因,其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关,提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。

江苏省实验兔球虫感染情况调查研究

为了解江苏省实验兔球虫病流行情况,通过收集卵囊及显微镜观察,对江苏省4个实验兔养殖供应基地进行了球虫感染情况的调查,结果显示,调查的实验兔球虫感染率为100%,并且均为混合感染。共检测出10种艾美耳属的球虫,分别是斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)、穿孔艾美耳球虫(E.perforans)、中型艾美耳球虫(E.media)、大型艾美耳球虫(E.magma)、梨形艾美耳球虫(E.piriformis)、无残艾美耳球虫(E.irresdua)、盲肠艾美耳球虫(E.coecicola)、肠艾美耳球虫(E.intestinalis)、小型艾美耳球虫(E.exigua)、黄氏艾美耳球虫(E.flavescens)。并且检测了实验兔球虫的感染强度(OPG)和优势虫种,为江苏省实验兔球虫病的防治提供了依据。

心肌损伤早期血液Troponin I及酶学标志的动态变化

目的:探讨心肌损伤早期肌钙蛋白及心肌酶学的动态改变与规律。方法:成年新西兰兔以10mg/kg体重,从耳静脉匀速滴注异丙肾上腺素制作动物心肌损伤模型。分别于实验前和实验中每隔30分钟抽取血液,以肝素抗凝并分析心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,肌酸激酶(CK)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,同时观察心肌组织的病理学变化。结果:心肌组织在滴注的早期表现为心肌间质增宽,其中见散在的炎细胞浸润,以嗜中性粒细胞为主,部分区域心肌纤维变细。在4h时心肌间隙明显增宽,间质疏松、水肿,伴浆细胞、淋巴细胞及少量嗜中性粒细胞漫润。整个过程中AST活性增加20％,组间无明显差异(P>0.05)。LDH活性2h前变化不明显,4h时为用药前的2倍。CK于损伤后3h明显异常(P<0.05),4h时活性增加5倍。cTnI起初90min变化不明显,2h明显异常(P<0.05),4h浓度升高4倍。AST与其他标志物的相关程度低,而CK、LDH和cTnI问相关性显著(r>0.96)。结论:外周血中CK水平和cTnI浓度异常是反映心肌早期损伤的最灵敏标志物。

医学动物实验与生命伦理学的冲突及缓和途径

医学动物实验是生物医学研究的基本途径和有效手段,其研究对发展生物医学和增进人类健康至关重要。但动物实验研究让许多实验动物受到了伤害和痛苦,甚至丧失生命,这与生命伦理学尊重、行善、不伤害及公正的基本原则相冲突,与尊重和善待生命的宗旨相矛盾。对于医学动物实验所引发的伦理学问题、争论甚至冲突,可通过以下途径与策略来缓和与化解:促进生物医学与生命伦理学的良性互动与合作;遵循3R原则,科学、人道地实验;维护实验动物福利;充分发挥伦理委员会保护实验动物的作用;完善实验动物伦理规范与法律制度;共享动物实验数据。以此实现生物医学研究与伦理道德文明同步、协调、和谐发展。

鼠痘、小鼠肝炎和鼠仙台病毒感染症的国内流行情况及防控对策

为了解鼠痘、小鼠肝炎和鼠仙台病毒感染症这3种新纳入《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》鼠病在国内的流行情况,对这3种鼠病的文献资料进行了收集和分析。重点分析了3种鼠病在国内清洁级及以上级别的实验大、小鼠中的流行情况,同时对如何防控提出了建议和对策。这3种鼠病在国内清洁级或以上级别的实验大、小鼠中均有检出,应进一步提高实验大、小鼠屏障设施建设和管理的标准化和规范化水平,重视微生物监测的作用,有效提高实验大、小鼠的质量。

猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的生化及分子鉴定

为了建立胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌这3种猪常见呼吸道致病菌的区分鉴定方法,比较分析了3种细菌的生化特性,总结挑选出具有区分鉴定意义的生化项目,并从每种细菌中分别选择2个已知菌株进行生化反应的平行试验,同时用16SrDNA技术对细菌进行鉴定。通过对6株已知菌株的区分鉴定表明,细菌生化鉴定和16SrDNA鉴定均可用于3种猪呼吸道致病菌的鉴定,但两种方法配合使用,可以提高区别鉴定的效率和准确性。

C57BL/6小鼠葡萄球菌性角膜感染模型的建立及相关研究

目的以乙基亚硝基脲(ENU)诱变技术建立小鼠葡萄球菌性角膜感染模型,探讨其主要条件致病菌的生物学特性。方法以ENU(150mg/kg)腹腔注射10周龄雄性C57BL/6小鼠,60d后与其同品系雌性小鼠配种,F1代小鼠中发现角膜混浊小鼠,以具有角膜混浊表型小鼠与C57BL/6小鼠回交的方式繁育。对角膜混浊小鼠角膜感染菌进行分离、培养、纯化、鉴定,并使用不同抗生素进行药物敏感试验。结果建立了稳定的小鼠葡萄球菌性角膜感染模型。从自发性角膜混浊(B6-Co)小鼠眼部成功分离纯化了松鼠葡萄球菌,筛选出了对该菌敏感及耐药的抗生素。对该菌敏感的抗生素有阿奇霉素、克林霉素、氯霉素、庆大霉素、利福平、四环素、阿米卡星、复方新诺明、米诺环素、左氟沙星、头孢噻吩、头孢噻肟、呋喃唑酮;对该菌耐药的抗生素有头孢西丁、青霉素、氨苄西林、新生霉素;属于中间态的抗生素为呋喃妥因。结论C57BL/6小鼠葡萄球菌性角膜感染模型为自发性动物模型,系凝固酶阴性葡萄球菌感染所致,以松鼠葡萄球菌为主。

角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。

斯氏艾美耳球虫感染兔血常规及肝脏功能分析

为了对斯氏艾美耳球虫感染兔的血常规、肝功能和凝血4项进行检测分析。通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服接种的途径感染8只2月龄的无球虫新西兰兔,8只不感染的设为阴性对照组。感染30 d后,心脏采血采集血液样本,测量血常规、肝功能和凝血4项等血液指标。血液检测结果显示,与肝功能相关的8项指标中,仅有谷氨酰肽转移酶、血清胆碱酯酶差异显著,其余均差异极显著,血常规和凝血4项亦差异极显著。表明兔感染斯氏艾美耳球虫1个月后肝功能严重受损。