Ku70作为RNA解旋酶调节miR-124的加工成熟及神经细胞的分化

目的Ku70蛋白主要通过其DNA结合特性参与双链DNA断裂(DSB)的非同源端连接(NHEJ)修复,有报道称其具有RNA结合功能,本文探索Ku70是否具有RNA解旋酶活性并影响miRNA加工成熟。方法利用RNA免疫共沉淀(RIP)测序结合生物信息学分析Ku蛋白结合的RNA;蛋白质印迹法(Western blot,WB)结合定量反转录PCR(qRTPCR)检测Ku蛋白与miRNAs的表达关系;生物膜干涉技术(BLI)实验分析Ku蛋白与RNA的结合能力;电泳迁移率变动分析(EMSA)实验确定Ku70及Ku80的RNA解旋酶活性;形态学检测结合WB分析Ku70调节miR-124引起的神经细胞功能变化;免疫荧光结合形态学分析寨卡病毒(ZIKV)感染后Ku70及miR-124的变化与神经元分化关联。结果研究发现,Ku70蛋白具有RNA解旋酶活性,并通过其RNA解旋酶活性影响miRNA加工成熟。Ku70缺失引起许多miRNAs上调,其中包括神经细胞特异的miR-124。在人神经前体细胞(h NPCs)和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中敲低Ku70可促进miR-124的成熟,从而导致上述细胞向神经元分化。本文进一步发现,ZIKV感染影响了Ku70及miR-124的表达,导致细胞形态的分化。结论本研究揭示了Ku70的一种新功能,即Ku70有可能参与miRNA的成熟调控和神经细胞的分化,并且可能是ZIKV病毒致小头症的原因之一。

神经胶质瘤U251细胞中TRIM21和TRIM8之间相互作用研究

目的探讨TRIM21和TRIM8在神经胶质瘤U251细胞中的相互作用机制及其生物学效应。方法在U251细胞中分别过表达和敲低TRIM21或TRIM8,通过蛋白质印迹和RT-PCR法检测两者的蛋白和mRNA表达水平。利用免疫荧光实验分析TRIM21和TRIM8的亚细胞定位。通过免疫共沉淀实验验证TRIM21和TRIM8之间的相互作用。应用胞内泛素化实验检测TRIM21和TRIM8的泛素化修饰。蛋白酶体抑制剂MG-132用于抑制蛋白酶体活性。利用流式细胞术检测U251细胞凋亡。结果在U251细胞中,TRIM21负向调控TRIM8蛋白水平,反之,TRIM8也可以负向调控TRIM21蛋白水平,并且都能抑制细胞凋亡。机制研究显示,U251细胞中TRIM21和TRIM8之间存在相互结合,两者相互调控是通过催化泛素化介导的泛素-蛋白酶体依赖性降解途径实现的。结论U251细胞中TRIM21与TRIM8可以通过泛素化修饰促进泛素-蛋白酶体依赖性的蛋白质降解相互负向调控,提示体内细胞正常生长分化需要TRIM21-TRIM8之间蛋白质水平的相对稳态,也即可能存在E3泛素连接酶蛋白稳态,稳态失衡可能与肿瘤的发生发展密切相关。

成纤维细胞生长因子对神经元的营养作用

成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）是一类多功能的多肽生长因子。近年来的研究表明，ＦＧＦ与神经系统的生长发育有十分密切的关系。ＦＧＦ体外能促进多种神经元的存活及突起生长，体内也能促进受损伤神经元的修复与再生，是一类新的神经营养因子。ＦＧＦ还与许多中枢神经系统疾病，如Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ病、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的发生发展有关，因此深入开展ＦＧＦ神经营养作用的研究具有十分重要的意义。

SELEX技术及Aptamer研究的新进展

综述了近几年指数富集的配体系统进化(SELEX)技术的改良与寡核苷酸配基(aptamer)研究应用方面的新进展.Aptamer是指利用SELEX(systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment)技术,从随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶分子特异结合的短单链寡核苷酸配基,通常具有纳摩尔到皮摩尔的亲和力.高通量筛选的技术特点与aptamer精确识别、易体外合成与修饰等特性,使得aptamer在分析化学与生物医药研究方面具有广阔的应用前景.

人酸性成纤维细胞生长因子神经营养作用的初步研究

本实验研究了人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)的体外神经营养作用。结果表明,haFGF在体外能明显促进鸡胚(E-8)脊髓组织神经突起的生长,并能明显改变新生大鼠脑星形胶质细胞的形态,使扁平、多角形紧密联接的细胞转化为具有纤维样突起的胶质细胞,同时对胶质细胞DNA合成也有一定促进作用。实验还证明,haFGF可增加体外培养新生大鼠海马神经元的存活,且大大增加神经元胞体体积及突起长度。

酸性成纤维细胞生长因子在体外对不同类型神经细胞的作用

酸性成纤维细胞生长因子在体外对不同类型神经细胞的作用邵宁生（北京军事医学科学院基础医学研究所，北京１００８５０）邵宁生，男，生化药理学专业。导师：周廷冲研究员、王会信研究员。论文答辩日期：１９９２年６月２２日，答辩委员会主席：韩济生教授成纤维细胞生长...

aFGF对神经元中蛋白质合成及cAMP含量的影响

酸性成纤维细胞生长因子(aeidie fibroblastgrowth faetoblast growth factor,aFGF)是近年来发现的一种新的神经营养因子,它在体外能促进多种神经元的存活及突起生长[1,2],体内也能促进受损伤神经元的修复与再生[3].最近我们的研究也表明,aFGF能促进体外培养的海马神经元形态上分化成熟闭.

酸性成纤维细胞生长因子对多种中枢神经元的作用

酸性成纤维细胞生长因子对多种中枢神经元的作用邵宁生，王会信，周廷冲，柳川，薛沿宁，汪浩勇（北京军事医学科学院基础医学研究所１００８５０）酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）是一种多功能的多肽生长因子，它在创伤愈合、血管形成及胚胎发育过程中都起一分重要的...

赤芍治疗热毒血瘀证的血清蛋白质组变化的初步研究

目的研究赤芍对大鼠热毒血瘀证的血清蛋白质组变化的影响。方法用双向电泳(two-di-mensionalelectrophoresis,2DE)分析正常组、内毒素组〔用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)静脉注射〕、赤芍组(灌胃给药)、LPS(静脉注射)+赤芍(灌胃给药)组之间的血清蛋白质组表达差异。结果(1)LPS致热毒血瘀证大鼠的血清在2DE胶上13个蛋白点(xPr)出现非常明显的含量变化,与正常组比较,LPS组的xPr16、xPr19的点容量值均显著降低,xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr6、xPr7、xPr8、xPr9、xPr11、xPr12、xPr23的点容量值均显著增高。(2)LPS+赤芍组与LPS组比较,LPS引起增高的xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr9的点容量值均显著降低,LPS引起降低的xPr16的点容量值显著增高,但xPr16的点容量值仍显著低于正常组,xPr1、xPr4、xPr9的点容量值均显著高于正常组;LPS+赤芍组的xPr2、xPr3两个蛋白点已被明显调节到正常状态;赤芍组除xPr2、xPr4外,在xPr1,xPr3,xPr9,xPr16点均表现对LPS显著的交互作用。(3)对xPr19,赤芍和LPS两因素显著的交互作用有协同性。(4)赤芍组xPr13、xPr14的点容量值均显著高于正常组,xPr15、xPr17的点容量值均显著低于正常组,这4个蛋白点LPS组与正常组比较差异均无显著性。结论通过调节xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr9、xPr16蛋白点,可能是赤芍治疗热毒血瘀证的疗效的分子基础。

受体-效应分子偶联中新的决定因素:膜微区中的运输和区室化

近年来研究表明 ,单个细胞中与同一G蛋白偶联的不同受体 ,可引发不同的生物化学或细胞应答。传统的关于G蛋白偶联受体信号转导途径是一维的观点 ,难以解释上面的现象。本文认为 ,在人们的思维模式里必须加入二维因素 :质膜中受体和效应分子的定位及移动。受体的定位促进了它与某一特定信号转导途径偶联 ,受体的移位是细胞信号转导路径多样化的重要手段。

玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化的初步研究

目的 :研究玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化。方法 :用双向电泳 (2DE)分析正常组、内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS ;静脉注射 )组、玄参 (灌胃给药 )组、LPS(静脉注射 ) +玄参 (灌胃给药 )组之间的血清蛋白质组表达差异。结果 :①LPS致内毒素血症大鼠的血清在 2DE胶上 16个蛋白点 (xPr)出现非常明显的含量变化 ,与正常组比较 ,LPS组的xPr16 ,xPr19的点容量值均极显著降低 ,xPr1,xPr2 ,xPr3,xPr4 ,xPr5 ,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均极显著增高。②LPS +玄参组与LPS组比较 ,LPS引起增高的xPr1,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均显著降低。玄参在xPr1,xPr8,xPr11,xPr12 ,xPr18均表现对LPS显著的交互作用。LPS +玄参组与正常组比较 ,其中xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr2 3蛋白点已被明显调节到正常状态 ,但是xPr18的点容量值显著低于正常组 ,xPr1,xPr6 ,xPr7的点容量值仍显著高于正常组。③玄参与LPS两因素对xPr5 ,xPr10 ,xPr19,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2均有明显的交互作用。④在玄参组 ,xPr13,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2的点容量值均比正常组显著增高 ,xPr10 ,xPr15的点容量值均比正常组显著降低 ,这

随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立

指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % .

LncRNA-GAS5抑制miR-21介导的非完全匹配靶mRNA降解

LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的蛋白表达,但不影响PTEN和TPM1mRNA的水平.此外,过表达miR-21后,qRT-PCR检测PTEN和TPM1mRNA的半衰期,发现它们的半衰期显著缩短,miR-21加速PTEN和TPM1mRNA的降解.通过转染lncRNA-GAS5的过表达质粒,发现lncRNA-GAS5竞争性地与miR-21结合能够延长PTEN和TPM1mRNA的半衰期,而miR-21与lncRNA-GAS5碱基互补配对结合后,又对lncRNA-GAS5存在调节作用,减弱lncRNA-GAS5的稳定性并加速lncRNA-GAS5的降解.LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵"能够抑制miR-21对非完全匹配靶mRNAPTEN和TPM1的降解,同时,miR-21与lncRNA-GAS5结合后又存在对lncRNA-GAS5的反馈调节,这些相互作用机制的发现有助于了解lncRNA、miRNA、mRNA之间这个复杂又精细的调控环路.

高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选

目的初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株。方法通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力,初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株。结果不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同,其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高,提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株,另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低,提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株。结论通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株。

不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定

目的分离鉴定变异链球菌临床分离株。方法收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养,通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应(PCR)扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ(spaP)、葡糖基转移酶B(gtfB)和葡聚糖酶(dexA)以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定。结果从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株,经生物化学,自动微生物分析系统,变异链球菌的特异性基因spaP、gtfB和dexA的PCR扩增均鉴定为变异链球菌,基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同。结论获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株。

MicroRNA及其靶基因的时空特异性与动态变化

MicroRNA(miRNA)是一类广泛存在于动植物中大小约22nt的内源单链非编码小RNA分子,通常在转录后水平负调控其靶基因的表达,在机体生命活动的各个过程中(如细胞增殖和分化、凋亡、疾病的发生发展等)发挥着重要的调节作用.越来越多的研究表明,miRNA的表达具有时序特异性和组织特异性.每种miRNA针对的数个甚至上百个潜在靶基因,在不同的细胞或同一细胞的不同状态下是否能发挥功能性靶标的作用也有所不同.这些研究结果不但说明miRNA及其靶标具有时空动态变化的特性,而且也提示miRNA在机体内发挥作用的复杂性.本文就miRNA及其靶标时空动态变化的相关研究进展做一综述,期望对深入了解miRNA的功能提供新的思路.

采用毛细管电泳技术筛选特异识别蓖麻毒素适配子的研究

采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术从随机寡核苷酸文库中筛选获得特异识别蓖麻毒素靶分子的适配子.将毛细管电泳技术作为分离手段引入到SELEX筛选中,利用毛细管电泳高效的分离能力使得筛选周期大大缩短.酶联免疫和斑点杂交实验结果表明,仅经4轮筛选即可获得特异识别蓖麻毒素蛋白的寡核苷酸适配子.

游离脂肪酸对大鼠肝细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的 :探讨游离脂肪酸 (FFA)是否会对大鼠肝细胞瘦素 (leptin)受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响。 方法 :分离、培养新生Sprague Dawley大鼠肝细胞 ,分别与软脂酸 (0 .2 5mmol/L)或油酸 (0 .12 5mmol/L)孵育 12、2 4和 36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测瘦素受体的蛋白水平。用RT PCR检测肝细胞内瘦素受体RNA含量的变化。应用免疫沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。 结果 :软脂酸和油酸孵育后大鼠肝细胞瘦素受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后无显著变化 ,在孵育 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的RNA水平在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 )。 结论 :FFA可对大鼠肝细胞瘦素受体的基因、蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这可能是FFA导致胰岛素抵抗的机制之一。

不同致龋性变形链球菌临床分离株差异ssDNA配基的筛选和鉴定

目的筛选不同致龋性变形链球菌临床分离株差异ssDNA配基并对其进行鉴定。方法利用完整细胞为靶子的消减SELEX技术筛选不同致龋性变形链球菌临床分离株差异ssDNA配基,通过放射性同位素、流式细胞术、基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structue分析软件分析配基的一、二级结构并对筛选得到的配基进行鉴定。结果经过9轮消减SELEX筛选,放射性同位素检测文库已富集;流式细胞术检测经过测序和分析得到12条配基中的H1、H16、H4、L1、L10和H19与高致龋变形链球菌临床分离株特异结合,不与低致龋变形链球菌临床分离株特异结合,其中,H19的特异性结合程度最强,解离常数为69.45±38.53 nmol/L。结论筛选获得特异识别高致龋变形链球菌临床分离株的ssDNA配基。